] -4-(三氟甲基巰基)苯基，
[0147] -4-(三氟甲基亞磺?；?苯基，或者
[0148] -4-(三氟甲基磺?；?苯基。
[0149] 本發(fā)明的這個第二方面的【具體實施方式】有：
[0150] a. 2-氰基-2_[ [4_(三氟甲基巰基）苯甲?；鵠氨基]丙基]4_(三氟甲基巰基）苯甲 酸酯
[0152] 特別是S-對映體：
[0151]
[0153]
[0154] b.乙酸[2-氰基_2-[[4-(三氟甲基巰基)苯甲?；鵠氨基]]丙酯
[0155]
[0156] 特別是S-對映體：
[0157]
[0158] c.苯甲酸[2-氰基-2-(4-((三氟甲基)硫代)苯甲酰胺基）]丙酯
[0159]
[0160] d.丙炔酸[2-氰基-2-(4-((三氟甲基)硫代)苯甲酰胺基）]丙酯
[0161]

[0162] e.2_氰基_2-[[4-(三氟甲基巰基）苯甲?；鵠氨基]丙基]4_(三氟甲基巰基）苯甲 酸酯
[0163]
[0164] 根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供如本發(fā)明的第二方面定義的化合物，用于在治療或 預(yù)防疾病的方法中使用。
[0165] 在某些實施方式中，本文提供的任何化合物作為基本上純的立體異構(gòu)體提供。式 (1)和式(2)(或者式A和式B)中用星號標(biāo)記的立構(gòu)中心為乙基部分的Cl碳原子。在某些實施 方式中，提供基本上純的立體異構(gòu)體的制劑，其中該原子為S構(gòu)型，
[0166]
[0167] 將本文提供的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽視為包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0168] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用于預(yù)防或治療蠕蟲感染（特別是絳蟲類 (tapeworms/cestodes)、吸蟲類（flukes/trematodes)和線蟲類（roundworms/nematodes) 感染）、絳蟲感染、血吸蟲病、蛔蟲病、麥地那龍線蟲病、象皮病、蟯蟲病、絲蟲病、鉤蟲感染、 盤尾絲蟲病、旋毛蟲病和/或鞭蟲病的藥物組合物，該藥物組合物包含根據(jù)本發(fā)明的上述方 面或?qū)嵤┓绞降幕衔??？梢允褂媚c內(nèi)給藥(例如經(jīng)鼻、經(jīng)頰、直腸給藥，或者特別是口服給 藥）以及非胃腸給藥(例如真皮(準(zhǔn)確地）、真皮內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、肝內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥)的藥物 組合物。該藥物組合物包含約1 %至約95 %的活性成分，優(yōu)選包含約20 %至約90 %的活性成 分。
[0169] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用于預(yù)防或治療蠕蟲感染（特別是絳蟲類 (tapeworms/cestodes)、吸蟲類（flukes/trematodes)和線蟲類（roundworms/nematodes) 感染）、絳蟲感染、血吸蟲病、蛔蟲病、麥地那龍線蟲病、象皮病、蟯蟲病、絲蟲病、鉤蟲感染、 盤尾絲蟲病、旋毛蟲病和/或鞭蟲病的劑型，該劑型包含根據(jù)本發(fā)明的上述方面或?qū)嵤┓绞?的化合物。劑型可以通過各種途徑給藥，包括經(jīng)鼻、經(jīng)頰、直腸，透皮或口服給藥，或者作為 吸入制劑或栓劑給藥?；蛘?，劑型可以用于非胃腸給藥，例如靜脈內(nèi)、肝內(nèi)或特別是皮下給 藥，或者是肌肉內(nèi)注射形式。任選地，可以存在藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。
[0170] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用于制備用于預(yù)防或治療蠕蟲感染(特別是絳蟲 類（tapeworm s/cestodes)、吸蟲類（flukes/trematodes)和線蟲類（roundworms/ nematodes)感染）、絳蟲感染、血吸蟲病、蛔蟲病、麥地那龍線蟲病、象皮病、蟯蟲病、絲蟲病、 鉤蟲感染、盤尾絲蟲病、旋毛蟲病和/或鞭蟲病的藥物的方法，該方法包括使用根據(jù)本發(fā)明 的上述方面或?qū)嵤┓绞降幕衔?。根?jù)本發(fā)明的藥物通過本領(lǐng)域中已知的方法制備，特別 是通過傳統(tǒng)的混合、包衣、?；?、溶解或凍干來制備。
[0171] 根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了用于預(yù)防或治療蠕蟲感染，特別是前面提到的適 應(yīng)癥的方法，該方法包括將根據(jù)本發(fā)明的上述方面或?qū)嵤┓绞降幕衔锝o藥于有需要的患 者。
[0172] 該治療可以是出于預(yù)防目的或治療目的。對于給藥，根據(jù)本發(fā)明的上述方面的化 合物優(yōu)選地以包含化學(xué)純形式的化合物以及任選地藥學(xué)上可接受的載體和任選地佐劑的 藥物制劑的形式提供。使用對蠕蟲感染有效量的該化合物。該化合物的劑量取決于物種、患 者的年齡、體重和個體狀況、個體的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)、給藥方式以及給藥的目的是預(yù)防還是 治療。給予的每日劑量的范圍為約lyg/kg~約1000mg/kg，優(yōu)選為約Iyg~約IOOyg的根據(jù)本 發(fā)明的活性劑。
[0173] 無論本文在何處提到本發(fā)明的實施方式，以及這樣的實施方式僅提到本發(fā)明的一 個特征，意圖這樣的實施方式可以與提到不同特征的任何其他實施方式相結(jié)合。例如，定義 R'的任何實施方式可以與定義T、R2或R3的任何實施方式相結(jié)合，以表征本發(fā)明的一組化合 物或本發(fā)明的具有不同性質(zhì)的單個化合物。
[0174] 不加限制，進(jìn)一步通過下面的實施例來表征本發(fā)明，從這些實施例可以得出另外 的特征、優(yōu)點或?qū)嵤┓绞?。這些實施例并不意在限制本發(fā)明，而是舉例說明本發(fā)明。
【附圖說明】
[0175] 圖1示出了來自不同的4天進(jìn)行的試驗的捻轉(zhuǎn)血矛線蟲L3幼蟲在測試化合物ahpOH 和ahpOHl的存在下的發(fā)育。顯示了孵育7天后計數(shù)的L3的數(shù)量。誤差棒表示±1標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0176] 圖2示出了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲L3幼蟲在測試化合物ahpOH和ahpOHl的存在下的發(fā)育。顯 示了來自四個獨立試驗、針對DMSO對照孔中的發(fā)育率（100%)歸一化的L3的發(fā)育率。進(jìn)行非 線性回歸(連續(xù)線），得出LC50(虛線）。誤差棒表示均值的± 1標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)。
【具體實施方式】
[0177] 實施例
[0178] 細(xì)胞毒性以及殺線蟲研究
[0179]使用熒光細(xì)胞存活力測定（刃天青）（Ahmed等，免疫學(xué)方法雜志 (J. Immunol.Methods)，1994,170,211)確定了對人宮頸癌Hela和非癌(MRC-5)細(xì)胞系的毒 性，結(jié)果在表1中示出。發(fā)現(xiàn)所述化合物對這兩個細(xì)胞系都沒有毒性。
[0180] 使用標(biāo)準(zhǔn)的幼蟲發(fā)育測定(LDA)評價和證實了化合物aphOH和ahpOHl對捻轉(zhuǎn)血矛 線蟲幼蟲發(fā)育的功效。LDA是用于檢測對線蟲具有殺幼蟲作用的化合物的工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測試。對 于化合物 ahpOH，LC5〇 值為 173ηΜ(95%α:19·9ηΜ-1·495μΜ)，對于化合物 ahpOHl，LC5〇 值為 550nM( 95 % Cl: 10.6ηΜ-2.866μΜ)。劑量-響應(yīng)曲線顯示在表1和圖2中。
[0182] 表1:所選的化合物的細(xì)胞毒性和殺線蟲性。IC5q值表示在刃天青測定中對HeLa和 MRC-5細(xì)胞系的測量結(jié)果。
[0183] 濃度在1〇〇μΜ至25μΜ時，化合物aphOH和ahpOHl嚴(yán)重地、可重復(fù)地抑制了捻轉(zhuǎn)血矛 線蟲幼蟲的發(fā)育。對于這兩種化合物，都證明了劑量響應(yīng)，且LC 5q均在納摩爾范圍內(nèi)。這些化 合物對其準(zhǔn)備用于的寄生線蟲具有功效。對于ahpOH和ahpOHl二者，在多個試驗中測試的濃 度大部分都在微摩爾的范圍中，并且平均的幼蟲發(fā)育率為<50%。因此，對于這兩種化合 物，得出LC 5q的曲線面積(area of curve)都沒有高度填充數(shù)據(jù)點（圖2)。濃度低于25μΜ時， 幼蟲發(fā)育率有變化。在這些試驗中，LC5q計算的置信度相對較低，如置信區(qū)間所表示的;推薦 進(jìn)一步測試在低微摩爾至納摩爾范圍內(nèi)的濃度，以便獲得對于每種化合物的準(zhǔn)確的LC50。
[0184] 內(nèi)寄生物
[0185] 對犬惡絲蟲(Dirofilaria immitis)(Di)(絲蟲的線蟲)的體外活性
[0186] 從來自供體動物(對于Di的狗)的血液新鮮收獲并清潔微絲蝴
[0187] 然后，將微絲蝴分布在含有待評價抗寄生物活性的測試物質(zhì)的格式化微量培養(yǎng)板 中。通過連續(xù)稀釋法來測試每種化合物，以便確定其最小有效劑量(MED)。將上述板在26°C、 60%的相對濕度(RH)下孵育48小時。然后記錄微絲蝴的運動性，以確定可能的殺線蟲活性。
[0188] 功效用與對照和標(biāo)準(zhǔn)品相比減少的運動性百分比表示。
[0189] 對捻車專血矛線蟲和蟲它形毛圓線蟲(Trichostrongylus colubriformis)(胃腸道線 蟲類)的體外活性
[0190] 使用新鮮收獲并清潔的線蟲卵接種在含有待評價抗寄生物活性的測試物質(zhì)的適 當(dāng)格式化的微量培養(yǎng)板上。通過連續(xù)稀釋法測試每種化合物，以確定其MED。測試化合物在 營養(yǎng)培養(yǎng)基中稀釋，使得卵完全發(fā)育為3齡幼蟲（3rd instar larvae)。將上述板在28°C、 60%的相對濕度(RH)下孵育6天。記錄卵孵化和隨后的幼蟲發(fā)育以確定可能的殺線蟲活性。 [0191]功效用卵孵化減少的百分比、L3的發(fā)育減少的百分比或各個階段幼蟲的無力和死 亡百分比表示。
[0192] 測試了對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、犬惡絲蟲和蛇形毛圓線蟲的活性，結(jié)果在表1a中示出。

[0195] 表la:示出了對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲、犬惡絲蟲和蛇形毛圓線蟲的活性。
[0196] 在表1a中可以看出，可以得到感興趣的EC值，特別是對捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的EC值。
[0197] 實驗部分
[0198] 材料:所有化學(xué)品都是試劑級質(zhì)量或更好，從商業(yè)供應(yīng)商獲得，并且使用前沒有進(jìn) 一步純化。使用的溶劑是接收到的溶劑或是經(jīng)4人和3A分子篩干燥的溶劑。THF和Et 2O通過 使用標(biāo)準(zhǔn)方法在氮氣下新鮮蒸餾[14]。所有合成都采用標(biāo)準(zhǔn)的Schlenk技術(shù)進(jìn)行。
[0199] 儀器和方法：在30 °C下，在Bruker DRX 400或AV2500上在氘代溶劑中記錄1H-和 13C-匪R譜。用ppm記錄化學(xué)位移δ。殘留溶劑峰已被用作內(nèi)部參照。峰多重性的縮寫如下：s (單峰）、d(雙重峰）、dd(雙重雙峰）、t(三重峰）、q(四重峰）、m(多重峰）和br(寬峰）。在 PerkinElmer光譜BX TF-IR光譜儀上記錄紅外光譜，對于固體，用KBr壓片(presslings)。信 號強(qiáng)度縮寫為w(弱）、m(中等）、s(強(qiáng)）和br(寬）。在Bruker Esquire 6000或Bruker maxis QTOF-MS儀(布魯克道爾頓GmbH(Bruker Daltonics GmbH)，不來梅，德國）上記錄ESI質(zhì)譜。 在Bruker maxis QTOF-MS儀(布魯克道爾頓GmbH(Bruker Daltonics GmbH)，不來梅，德國） 上記錄高分辨率ESI質(zhì)譜。將樣品（0.5mg左右）溶解在0.5mL的MeCN/H20( I: I )+0.1 %的 HCOOH中。然后，將該溶液按10:1稀釋，并通過3μ1 · HiirT1的連續(xù)流體注入分析。在180°C、氮 氣霧化器壓力為0.4巴、干燥氣體流速為4.01/min、毛細(xì)管電壓為4000V、端板補(bǔ)償 (endplate off set)為 _5〇OV下，以正電噴霧離子化模式（electrospray ionization mode) 操作質(zhì)譜儀。以20000的分辨率、每秒掃描一次，在質(zhì)量范圍m/z為100~2000中以全掃描方 式進(jìn)行MS采集。質(zhì)量在m/z為158~1450的質(zhì)量范圍內(nèi)用2mM的甲酸鈉溶液校正，準(zhǔn)確度低于 2ppm。元素微量分析在LecoCJMS-932元素分析儀上進(jìn)行。
[0200] 2-氨基 _2_ 輕甲基丙臆(proprionitrile) (ahp)
[0201 ] 按照Gauvry等(W02005044784A1)公開的下面的過程制備2-氨基-2-輕甲基丙腈 (ahp) 〇
[0202]乙酸[2-氰基-2-(4-((三氟甲基)硫代)苯甲酰胺基）]丙酯(ahp0Hl，le)
[0203] 將N-(2-氰基-1-羥丙-2-基）-4-((三氟甲基）硫代）苯甲酰胺（ahp0H，0.411g， 1 · 35mmo 1)溶解于二氯甲燒（35mL)中。向該無色溶液中，添加乙酰氯（144yL，2 · 03mmo 1)和 NEt3(0.28mL，0.203mmo 1)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時。然后，蒸發(fā)二氯甲烷，并用己 烷：乙酸乙酯（7:3)作為洗脫劑(Rf = O.59)通過二氧化硅柱色譜法純化粗產(chǎn)物，得到收率為 44%的無色固體乙酸[2-氰基-2-(4-((三氟甲基)硫代)苯甲酰胺基）]丙酯(ahpOHl)。
[0204] 化合物Ie、ld、Im和In以類似于化合物ahpOHl的方式合成，但是用適當(dāng)活化的甲酸 處理以得到所希望的化合物。
[0205] 對于ahpOHl的數(shù)據(jù)
[0206] IR(KBr，cm-3 :3478s、3414s、2924w、2845w、2360w、2336w、1757w、1638m、1616m、 1533w、1387w、1320w、1225w、1166w、1113w、1079w、1043w、856w、667w、625w。
[0207] 1H NMR(500MHz，CDC13) J/ppm = 7.82(d，3J = 8· 15Hz，lH，芳香H)，7.75(d，3J = 8Hz，1H，芳香H)，7.14(s，lH，NH)，4.52(d，2J= 12 .OHz，1H，CH2)，4.40(d，2J= 11.6Hz，1H， CH2)，2.22(s，3H，CH3)，1.86(s，3H，CH3)。
[0208] 13C 匪R(500MHz，CDC13) :δ/ρρπι=172·3、165·8、136·2、134·9、129·5、129·4、 12