一種玳玳花煙用香料的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種玳玳花煙用香料的制備方法。該香料是由以下方法制備而得：A.發(fā)酵菌種活化，根霉活化；B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理；C.玳玳花發(fā)酵；D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取，即得所述的玳玳花煙用香料。本發(fā)明的香料對卷煙的香氣和吸味品質(zhì)改善作用明顯，香氣逼真，強度高，與香煙協(xié)調(diào)。本發(fā)明的方法工藝過程簡單易行，設(shè)備簡單，可直接用于卷煙加香加料，生產(chǎn)的產(chǎn)品可溶性好，便于推廣應(yīng)用。本發(fā)明所用的原料來源廣泛，成本低，價格低廉，經(jīng)濟效益好。
【專利說明】
一種玳玳花煙用香料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及煙用香料制備領(lǐng)域，特別是涉及到一種玳玳花煙用香料的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] ?代?代花(Citrus aurantium)，別名回青橙、枳殼花、酸橙花，常綠灌木，枝愣、細長， 葉互生，革質(zhì)，橢圓形，春夏4-5月開白花，香氣濃郁，果實扁球形，當年冬季為橙紅色，翌年 夏季又變青，故稱"回青橙"，因有果實數(shù)代同生一樹習(xí)性，亦稱"公孫桔"。主要栽培在浙江、 江蘇、福建和四川等地，玳玳為重要栽培芳香植物，其花、枝葉和果皮的精油都是重要的調(diào) 香原料，廣泛用于食品、化妝品、香皂等香精中；特別是花精油，其香氣優(yōu)雅，主要用于配制 尚檔香精。
[0003] 目前，利用微生物發(fā)酵技術(shù)制備煙用香料，是一門全新的技術(shù)領(lǐng)域。微生物在增殖 過程中可產(chǎn)生龐大的高活性酶系，如多糖水解酶類、蛋白酶類、纖維素酶類、酯化酶類、氧化 還原酶類及裂合酶類等，在酶促作用、化學(xué)作用及微生物體內(nèi)復(fù)雜代謝的協(xié)同作用下，使原 料發(fā)生分解、降解、氧化、還原、聚合、偶聯(lián)、轉(zhuǎn)化等作用，形成復(fù)雜的低分子化合物，其中包 括各種香味化合物，如醇類、醛類、酮類、酸類、酯類、酚類、咲喃類、啦嗪類、啦啶類和萜烯類 等，這些香氣物質(zhì)無疑也是煙草的香氣組分。但現(xiàn)有技術(shù)中，利用玳玳花為原料采用微生物 發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)特色煙用香料的方法未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種能夠采用微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)玳玳花 煙用香料的方法。
[0005] 本發(fā)明一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于，按照如下步驟進行：
[0006] A.發(fā)酵菌種活化
[0007] ①酵母菌種活化:選取微生物菌種，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于25 ~30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YPD液體培養(yǎng)基 中，于25~30°C恒溫培養(yǎng)24~48h，得到活化的種子液；
[0008] ②根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液；
[0009] B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理
[0010] 選取清潔干燥的玳玳花作為原料，均勻噴灑玳玳花質(zhì)量〇. 1~〇. 25倍的處理液，在 115°C下滅菌5~15min，即得玳玳花原料;所述處理液含有質(zhì)量分數(shù)1~5%葡萄糖，0.1~ 1 %硫酸銨，0.1~0.5 %七水硫酸鎂，0.1~1 %氯化鈉，0.05~0.12 %七水硫酸亞鐵，余量為 水；
[0011] C.玳玳花發(fā)酵
[0012] 將活化酵母種子液和根霉分別按照1:1〇~20和1:5~10的質(zhì)量比接種到無菌的玳 玳花原料中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于25~32°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2~7 天；
[0013] D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取
[0014] 取發(fā)酵后的玳玳花，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚，55 ~60 °C回流提取，提取至提取器中液體至無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過 濾，揮去濾液中的石油醚，即為所述的玳玳花煙用香料。
[0015] 優(yōu)選的，步驟A中所述的酵母菌種為釀酒酵母菌，根霉菌種為白地根霉。
[0016]優(yōu)選的，步驟A中所述的YPD培養(yǎng)基為：葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨20g，蒸餾水 100mL;如果選用斜面培養(yǎng)基則需加瓊脂15g;配制完成后以115°C滅菌20min。
[0017] 優(yōu)選的，步驟A中所述的豆芽汁斜面培養(yǎng)基為：10%豆芽汁20ml，蔗糖5g，純凈水 80ml，121 °C滅菌20min。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟D中石油醚體積與發(fā)酵后的玳玳花的質(zhì)量比為5~10g/mL。
[0019] 微生物在增殖過程中可產(chǎn)生龐大的高活性酶系，如多糖水解酶類、蛋白酶類、纖維 素酶類、酯化酶類、氧化還原酶類及裂合酶類等，在酶促作用、化學(xué)作用及微生物體內(nèi)復(fù)雜 代謝的協(xié)同作用下，以玳玳花為原料發(fā)生分解、降解、氧化、還原、聚合、偶聯(lián)、轉(zhuǎn)化等作用， 形成復(fù)雜的低分子化合物，其中包括各種香味化合物，如醇類、醛類、酮類、酸類、酯類、酚 類、呋喃類、吡嗪類、吡啶類和萜烯類等，這些香氣物質(zhì)無疑也是煙草的香氣組分。
[0020] 本發(fā)明的香料對卷煙的香氣和吸味品質(zhì)改善作用明顯，香氣逼真，強度高，與香煙 協(xié)調(diào)。本發(fā)明的方法工藝過程簡單易行，設(shè)備簡單，可直接用于卷煙加香加料，生產(chǎn)的產(chǎn)品 可溶性好，便于推廣應(yīng)用。本發(fā)明所用的原料來源廣泛，成本低，價格低廉，經(jīng)濟效益好。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明一種玳玳花煙用香料的成分分析GC/MS圖譜。
【具體實施方式】
[0022] 為了更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實施例詳細描述本發(fā)明提供的技術(shù) 方案。下例僅用于進一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0023] -種玳玳花煙用香料的制備方法，按照如下步驟進行：
[0024] A.發(fā)酵菌種活化
[0025]①酵母菌種活化:選取微生物菌種，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于25 ~30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YPD液體培養(yǎng)基 中，于25~30°C恒溫培養(yǎng)24~48h，得到活化的種子液；
[0026]②根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液；
[0027] B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理
[0028]選取清潔干燥的玳玳花作為原料，均勻噴灑玳玳花質(zhì)量0.1~0.25倍的處理液，在 115°C下滅菌5~15min，即得玳玳花原料;所述處理液含有質(zhì)量分數(shù)1~5%葡萄糖，0.1~ 1 %硫酸銨，0.1~0.5 %七水硫酸鎂，0.1~1 %氯化鈉，0.05~0.12 %七水硫酸亞鐵，余量為 水；
[0029] C.玳玳花發(fā)酵
[0030] 將活化酵母種子液和根霉分別按照1:10~20和1:5~10的質(zhì)量比接種到無菌的玳 玳花原料中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于25~32°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2~7 天；
[0031] D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取
[0032] 取發(fā)酵后的玳玳花，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚，55 ~60 °C回流提取，提取至提取器中液體至無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過 濾，揮去濾液中的石油醚，即為所述的玳玳花煙用香料。
[0033] 優(yōu)選的，步驟A中所述的酵母菌種為釀酒酵母菌，根霉菌種為白地根霉。
[0034]優(yōu)選的，步驟A中所述的YPD培養(yǎng)基為：葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨20g，蒸餾水 100mL;如果選用斜面培養(yǎng)基則需加瓊脂15g;配制完成后以115°C滅菌20min。
[0035] 優(yōu)選的，步驟A中所述的豆芽汁斜面培養(yǎng)基為：10 %豆芽汁20ml，蔗糖5g，純凈水 80ml，121 °C滅菌20min。
[0036] 優(yōu)選的，所述步驟D中石油醚體積與發(fā)酵后的玳玳花的質(zhì)量比為5~10g/mL。
[0037] 實施例1
[0038] A.發(fā)酵菌種活化
[0039]①酵母菌活化:取釀酒酵母，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于25 °C的恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于25°C恒溫培 養(yǎng)24h，得到活化的種子液。YH)培養(yǎng)基:葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨20g，蒸餾水1 OOmL (斜 面培養(yǎng)基需加瓊脂15g)，以115°C滅菌20min。
[0040]②根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液；
[0041] B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理
[0042] 選取200g玳玳花作為原料，用喉頭噴霧器均勻噴灑20g處理液，（所述處理液含有 1 %葡萄糖，0.1 %硫酸銨，0.1 %七水硫酸鎂，0.1 %氯化鈉，0.05 %七水硫酸亞鐵），在115 °C 下滅菌5min〇
[0043] C.玳玳花發(fā)酵
[0044] 將活化酵母種子液和根霉分別按照1:10和1:5的質(zhì)量比接種到無菌的玳玳花原料 中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于25°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵7天。
[0045] D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取
[0046] 取發(fā)酵后的玳玳花20g，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚 100mL，然后固定在鐵架臺上，置于60°C恒溫水浴鍋中，同時冷凝水回流，提取至提取器中液 體無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去濾液中的石油醚，收集 揮發(fā)油。
[0047] 實施例2 [0048] A.發(fā)酵菌種活化
[0049]①酵母菌活化:取釀酒酵母，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于28 °C的恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h使菌種活化，再將活化的菌種接種于Yro液體培養(yǎng)基中，于28 °C恒溫培 養(yǎng)48h，得到活化的種子液。YH)培養(yǎng)基:葡萄糖20g，酵母膏1 Og，蛋白胨20g，蒸餾水1 OOmL (斜 面培養(yǎng)基需加瓊脂15g)，以115°C滅菌20min。
[0050]②根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液；
[0051] B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理
[0052]選取200g玳玳花作為原料，用喉頭噴霧器均勻噴灑40g水溶液，（含有1.5 %葡萄 糖，0.5 %硫酸銨，0.28 %七水硫酸鎂，0.8 %氯化鈉，0.05 %七水硫酸亞鐵），在115 °C下滅菌 15min〇
[0053] C.玳玳花發(fā)酵
[0054] 將活化酵母種子液和根霉分別按照1:15和1:8的質(zhì)量比接種到無菌的玳玳花原料 中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于30的培養(yǎng)箱中發(fā)酵5天。
[0055] D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取
[0056]取發(fā)酵后的玳玳花20g，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚 100mL，然后固定在鐵架臺上，置于恒溫水浴鍋中（55°C)，同時冷凝水回流，提取至提取器中 液體無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去濾液中的石油醚，收 集揮發(fā)油。
[0057] 實施例3 [0058] A.發(fā)酵菌種活化
[0059]①酵母菌活化:取釀酒酵母，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于30°C的恒 溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于30 °C恒溫培 養(yǎng)48h，得到活化的種子液。Yro培養(yǎng)基:葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨20g，蒸餾水100mL (斜 面培養(yǎng)基需加瓊脂15g)，以115°C滅菌20min。
[0060] ②根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液；
[0061] B.玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理
[0062]選取200g玳玳花作為原料，用喉頭噴霧器均勻噴灑20~50g水溶液，（含有5%葡萄 糖，1 %硫酸銨，0.5 %七水硫酸鎂，1 %氯化鈉，0.12 %七水硫酸亞鐵），在115 °C下滅菌 15min〇
[0063] C.玳玳花發(fā)酵
[0064]將活化酵母種子液和根霉分別按照1: 20和1:10的質(zhì)量比接種到無菌的玳玳花原 料中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于32°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵7天。
[0065] D.發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取
[0066]取發(fā)酵后的玳玳花20g，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚 200mL，然后固定在鐵架臺上，置于恒溫水浴鍋中（60°C)，同時冷凝水回流，提取至提取器中 液體無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮去濾液中的石油醚，收 集揮發(fā)油。
[0067] 實施例4
[0068] 取在溫度22°C±1°C和相對濕度(RH)60%±2%下平衡好的單料煙絲10g若干份， 按其質(zhì)量的〇.01 %、〇.02%、0.05%分別稱取玳玳花揮發(fā)油，用適量的95%的乙醇稀釋后， 用喉頭噴管均勻的噴在煙絲上，加香的煙絲樣品放入溫度22°C±1°C和相對濕度(RH)60% ±2%的恒溫恒濕箱中平衡48h，用填煙器分別將加香的煙絲制成煙支，再在溫度22°C 土 1°C 和相對濕度(RH)60% ±2%的恒溫恒濕箱中平衡48h，請專業(yè)的卷煙感官評吸小組進行評 吸。
[0069] 評吸效果如表一所示。
[0070]表一卷煙添加玳玳花煙用香料的評價效果
[0073] 實施例5
[0074]玳玳花揮發(fā)油揮發(fā)性成分分析
[0075] ①色譜條件：采用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Gas chromatography-mass spectrometry，GC/MS)對提取物進行分析;色譜柱為HP - 5MS，規(guī)格為50cm X 0 · 25mm X 0 · 25μ m;載氣為氮氣，進氣量1. OmL/min;進樣口溫度260 °C ;升溫速度50°C/min，5min升到250 °C ; 進樣量1此，不分流；IE離子源，70eV，掃描范圍50~650amu，傳輸線溫度250°C ;使用WILEY和 MAINLIB譜庫檢索。
[0076] ②揮發(fā)油前處理:取O.lg提取物，加入10ml無水乙醇，使其充分溶解，靜置2h，取上 清液，利用〇. 4um的微孔過濾器過濾，濾液放置于GC/MS自動進樣器中進行分析。
[0077]分析結(jié)果：如表二所示是玳玳花揮發(fā)油揮發(fā)性成分分析結(jié)果，圖一所示的是玳玳 花揮發(fā)油揮發(fā)性成分分析GC/MS圖譜。
[0078]表二玳玳花揮發(fā)油揮發(fā)性成分分析結(jié)果

[0081 ]微生物在增殖過程中可產(chǎn)生龐大的高活性酶系，如多糖水解酶類、蛋白酶類、纖維 素酶類、酯化酶類、氧化還原酶類及裂合酶類等，在酶促作用、化學(xué)作用及微生物體內(nèi)復(fù)雜 代謝的協(xié)同作用下，以玳玳花為原料發(fā)生分解、降解、氧化、還原、聚合、偶聯(lián)、轉(zhuǎn)化等作用， 形成復(fù)雜的低分子化合物，其中包括各種香味化合物，如醇類、醛類、酮類、酸類、酯類、酚 類、呋喃類、吡嗪類、吡啶類和萜烯類等，這些香氣物質(zhì)無疑也是煙草的香氣組分。
[0082]本發(fā)明的香料對卷煙的香氣和吸味品質(zhì)改善作用明顯，香氣逼真，強度高，與香煙 協(xié)調(diào)。本發(fā)明的方法工藝過程簡單易行，設(shè)備簡單，可直接用于卷煙加香加料，生產(chǎn)的產(chǎn)品 可溶性好，便于推廣應(yīng)用。本發(fā)明所用的原料來源廣泛，成本低，價格低廉，經(jīng)濟效益好。
【主權(quán)項】
1. 一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于，按照如下步驟進行： A. 發(fā)酵菌種活化 ① 酵母菌種活化:選取微生物菌種，接種于準備好的YPD斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于 25~30°C恒溫培養(yǎng)24~48h，得到活化的種子液； ② 根霉活化:選取根霉菌種，接種于準備好的豆芽汁斜面培養(yǎng)基上，放置于25~30°C的 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48~72h使菌種活化，再將活化的菌種接種于YH)液體培養(yǎng)基中，于25~ 30°C恒溫培養(yǎng)48~72h，得到活化的種子液； B. 玳玳花發(fā)酵原料預(yù)處理 選取清潔干燥的玳玳花作為原料，均勻噴灑玳玳花質(zhì)量〇 . 1~〇 . 25倍的處理液，在115 °C下滅菌5~15min，即得玳玳花原料;所述處理液含有質(zhì)量分數(shù)1~5%葡萄糖，0.1~1 %硫 酸銨，0.1~0.5 %七水硫酸鎂，0.1~1 %氯化鈉，0.05~0.12 %七水硫酸亞鐵，余量為水； C. 玳玳花發(fā)酵 將活化酵母種子液和根霉分別按照1:10~20和1:5~10的質(zhì)量比接種到無菌的玳玳花 原料中，攪拌，使原料與種子液充分混合均勻，放置于25~32°C的培養(yǎng)箱中發(fā)酵2~7天； D. 發(fā)酵后玳玳花揮發(fā)油提取 取發(fā)酵后的玳玳花，用濾紙包成小包放入索氏提取器中，提取瓶內(nèi)加入石油醚，55~60 °C回流提取，提取至提取器中液體至無色，取出提取液，加無水硫酸鈉低溫干燥24h過濾，揮 去濾液中的石油醚，即為所述的玳玳花煙用香料。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于:優(yōu)選的，步驟A 中所述的酵母菌種為釀酒酵母菌，根霉菌種為白地根霉。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于:優(yōu)選的，步驟A 中所述的YH)培養(yǎng)基為：葡萄糖20g，酵母膏10g，蛋白胨20g，蒸餾水100mL;如果選用斜面培 養(yǎng)基則需加瓊脂15g;配制完成后以115°C滅菌20min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于:優(yōu)選的，步驟A 中所述的豆芽汁斜面培養(yǎng)基為：10%豆芽汁20ml，蔗糖5g，純凈水80ml，121°C滅菌20min。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種玳玳花煙用香料的制備方法，其特征在于:優(yōu)選的，所述 步驟D中石油醚體積與發(fā)酵后的玳玳花的質(zhì)量比為5~10g/mL。
【文檔編號】C12P1/02GK105969834SQ201610375468
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月31日
【發(fā)明人】呂品, 陳 勝, 蹇順華
【申請人】湖北中煙工業(yè)有限責任公司, 武漢黃鶴樓香精香料有限公司