本發(fā)明涉及一種含苯基酰胺類、二硝基苯胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，同時還涉及包含該菌藥組合物的制劑及應用，屬于植物保護和農藥學領域。

背景技術：

煙草黑脛病(Tobacco black shank)是一種世界范圍的毀滅性土傳病害，其病原菌為疫霉菌煙草變種[Phytophthora parasitica var nicotianae(Breda de Hann)Tuker]。煙草疫霉在煙株苗期至成株期均可侵染，主要侵染煙草莖稈，也可侵染葉片。煙草黑脛病在莖基形成水漬狀黑斑，皮層組織變黑凹陷，并沿莖部上下擴展，髓部黑褐色壞死并干縮呈碟片狀(萬維肖,何孝兵,曲平治,等.煙草黑脛病早期預防技術[J].植物醫(yī)生,2014(02):50-50)。葉片染病后初為水浸狀暗綠色小斑，后擴大為中央黃褐色壞死，邊緣有輪紋的膏藥狀黑斑，全株萎蔫(孫計平,李雪君,吳照輝,等.煙草黑脛病的研究進展[J].湖北農業(yè)科學,2011,50(16):3253-3256)。煙草疫霉以菌絲體與厚壁孢子隨病株殘體在土壤或堆肥中越冬，成為次年的初侵染源。病株上產生的孢子囊或釋放出來的游動孢子通過地面流水或隨風雨進行再侵染(王萬能,肖崇剛.煙草黑脛病的綜合防治及其研究進展[J].南方農業(yè)學報,2003(2):42-43)。隨著20世紀80年代后期我國煙草種植面積的不斷擴大，煙草黑脛病迅速擴展。煙草黑脛病平均發(fā)病率為10％～20％，發(fā)病率高的田塊達75％，嚴重的甚至造成絕收(陳瑞泰,朱賢朝,王智發(fā),等.全國16個主產煙省(區(qū))煙草侵染性病害調研報告[J].中國煙草科學,1997(04):1-7)。

化學防治是煙草黑脛病防控的重要措施，其中甲霜靈、氟啶胺等農藥是生產中使用較為廣泛的藥劑。甲霜靈是苯基酰胺類內吸性殺菌劑，80年代中期在我國生產使用，在卵菌病害防治中發(fā)揮著重要作用，其作用機制為抑制病原菌的聚合酶活性，干擾RNA合成。氟啶胺(SHIRLAN，IKF-1216)是由日本石原產業(yè)公司開發(fā)的2,6-二硝基苯胺類廣譜殺菌劑，通過抑制孢子形成與萌發(fā)、菌絲生長等抵制感染，耐雨水沖刷、持效期長，對灰葡萄孢引起的多種灰霉病有特效，同苯并咪唑類、二羧酰亞胺類及目前市場上已有的殺菌劑無交互抗性，對交鏈孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、核盤菌屬和黑星菌屬等病菌引起的病害亦有良好的活性。但是隨著生產中的普遍應用，化學殺菌劑的抗性問題也隨之發(fā)生。而化學藥劑復配可以減少一種殺菌劑成分的用量，延緩抗藥性的發(fā)生，同時降低生產成本，是植物病害防治中的重要措施之一。

煙草黑脛病的化學防治是病害綜合防治中的重要措施，目前其復配藥劑也有相關報道和專利。如公布號CN105265448A的發(fā)明專利公開的一種用于防治煙草根腐、黑脛病的殺菌劑，主要由甲霜靈和惡霉靈組成，輔以甲醇、乳化劑后兌水使用即可；公布號CN104430438A的發(fā)明專利公開的一種殺菌組合物，其有效成分為惡唑菌酮和霜脲氰，二者的重量比為80:1～1:80，適用于防治由病原真菌引起的植物病害，尤其是煙草黑脛病及瓜果、蔬菜等作物上的霜霉病、疫病等；公布號CN103478163A的發(fā)明專利公開了一種含苯噻菌胺的殺菌農藥組合物，除苯噻菌胺外還包括乙磷鋁，二者的重量比為1:40～60:1，該組合物可用于防治煙草黑脛病、作物疫病及霜霉病等。

生防菌株是天然存在的生物活體，具有良好的環(huán)境相容性。利用生防菌株防治煙草黑脛病具有防效高、安全性好、成本低等優(yōu)點。公告號CN101220335B的發(fā)明專利公開的一種防治煙草黑脛病的菌株，名稱為淡紫擬青霉ZY-19-2，保藏編號CCTCC NO:M207196，該菌株對煙草黑脛病菌有較強的抑制作用，可定殖在煙草植株根際抵抗病菌的浸染；公告號CN103614319B的發(fā)明專利也公開了一種用于防治煙草黑脛病的阿氏芽孢桿菌J-6，保藏編號CCTCC NO:M2013475，該菌株能誘導煙葉拮抗黑脛病從而發(fā)揮疫霉防治效果；公告號CN102925393B的發(fā)明專利公開的一種兼抗根結線蟲和煙草疫霉的煙草內生菌，名稱為解淀粉芽孢桿菌ZY-9-13，保藏編號CGMCC NO:6162，該菌株對煙草根結線蟲和黑脛病均具有防治效果，可與煙草育苗基質混合使用或在煙草植株移栽時施入根際周圍，生防效果顯著。但是，上述專利均未涉及殺菌劑與生防菌劑聯(lián)用的內容。

可持續(xù)發(fā)展的農業(yè)生產系統(tǒng)要求減少農藥的投入，而生物、化學協(xié)同防治病害可減輕對環(huán)境的壓力，延緩對化學藥劑產生抗性，使藥效更穩(wěn)定和持久(尹敬芳.生物-化學協(xié)同防治辣椒疫病菌藥合劑初步研究[D].中國農業(yè)大學,2006)。已有研究表明，生防菌劑和化學藥劑復配對多種病原菌均有良好的防治效果。如黃藍狀菌與甲霜錳鋅復配可防治小麥赤霉病(毛雪琴,彭志榮,邱海萍,等.生防菌株MT-06發(fā)酵條件及復配殺菌劑對小麥赤霉病的防效[J].浙江農業(yè)科學,2013(07):821-824)，枯草芽胞桿菌與戊唑醇復配可防治蠶豆枯萎病(陳志誼,任海英,劉永鋒,等.戊唑醇和枯草芽孢桿菌協(xié)同作用防治蠶豆枯萎病及增效機理初探[J].農藥學學報,2002(4):40-44)，枯草芽胞桿菌與苯醚甲環(huán)唑、嘧菌酯等復配可防治蘋果輪紋病(周寒.殺菌劑和生防菌協(xié)調控制蘋果采后輪紋病及作用機制[D].安徽農業(yè)大學,2009)，井岡霉素與枯草芽胞桿菌協(xié)同防治水稻紋枯病(陳志誼,劉永鋒,陸凡.井岡霉素和生防菌Bs-916協(xié)同控病作用及增效機理[J].植物保護學報,2003,30(4):429-434.)等等，但是以上菌藥復配的防治靶標均不涉及煙草疫霉。公布號CN104381303A的發(fā)明專利公開了一種用于防治真菌病害的菌藥組合物，由核黃素與枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉按照質量比1.21～2.34:97.96～98.79復配而成，相較單獨施用枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉，該菌藥組合物能顯著提高煙草黑脛病、赤星病等病害防治功效，增強植株抗病性，但是也僅達到與化學藥劑相當?shù)姆乐涡Ч?/p>

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種含苯基酰胺類、二硝基苯胺類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，該組合物對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病等具有優(yōu)異的防治效果，防效顯著優(yōu)于使用單一種類的殺菌劑、生防菌菌劑以及上述任一種類殺菌劑與生防菌菌劑的組合，且可延緩化學抗藥性的產生。

同時，本發(fā)明還提供一種包含上述菌藥組合物的菌藥制劑。

最后，本發(fā)明再提供一種上述菌藥組合物、菌藥制劑在防治煙草根結線蟲病和/或煙草黑脛病中的應用。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術方案是：

菌藥組合物，由苯基酰胺類殺菌劑、二硝基苯胺類殺菌劑和生防菌菌粉組成，以質量比計，苯基酰胺類殺菌劑:二硝基苯胺類殺菌劑:生防菌菌粉＝1～10:1～10:1～10，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

所述苯基酰胺類殺菌劑(PAFs)包括?；彼犷悮⒕鷦?如甲霜靈、精甲霜靈、苯霜靈、精苯霜靈、呋霜靈)、丁酸內酯類殺菌劑(如甲呋酰胺)和惡唑烷酮類殺菌劑(如惡霜靈)(汪漢成,李文紅,馮勇剛,等.煙草黑脛病化學防治的歷史與現(xiàn)狀[J].中國煙草學報,2011,17(5):96-102)。具體可選自甲霜靈、精甲霜靈、苯霜靈、精苯霜靈、呋霜靈、甲呋酰胺、惡霜靈等中的一種或多種。如單獨選用甲霜靈、苯霜靈或呋霜靈，或者選用精甲霜靈與精苯霜靈、甲霜靈與甲呋酰胺、呋霜靈與惡霜靈的組合，亦或者選用苯霜靈、呋霜靈與惡霜靈的組合。相較使用單一一種苯基酰胺類殺菌劑，殺菌劑復配(兩種及以上殺菌劑配合使用)具有相加作用或增效作用。并且，復配殺菌劑中各組分配比可以任意選取，如苯霜靈與惡霜靈按照質量比1～10:1～10復配，苯霜靈與呋霜靈、甲呋酰胺按照質量比1～10:1～10:1～10復配，等等。由于組合形式多樣，此處不一一列舉。

所述二硝基苯胺類殺菌劑選自氟啶胺等。

優(yōu)選的，菌藥組合物中苯基酰胺類殺菌劑選自甲霜靈、精甲霜靈、苯霜靈、精苯霜靈、呋霜靈、甲呋酰胺、惡霜靈等中的任意一種，二硝基苯胺類殺菌劑為氟啶胺。苯基酰胺類殺菌劑中甲霜靈、呋霜靈、甲呋酰胺等的作用機理相同或相似，因此從中選擇任意一種與氟啶胺復配，復配殺菌劑再與生防菌聯(lián)合使用，不僅能簡化配方，同時對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病等也能達到良好的防治效果。苯基酰胺類的甲霜靈、苯霜靈、惡霜靈等是一類具有保護和治療作用的內吸殺菌劑，可以被植株根、葉、梢迅速吸收，并通過維管束的導管和細胞間隙等非生活空間系統(tǒng)向植株上部轉移，對疫霉菌具有很高的活性，可用于莖、葉、種子及土壤處理。二硝基苯胺類的氟啶胺可使病原菌呼吸作用中的氧化磷酸化解偶聯(lián)，阻礙能量合成，抑制病原菌的菌絲生長、孢子形成與萌發(fā)。

所述生防菌菌粉可參照專利(公告號CN102925393B)中方法制備。生防菌優(yōu)選為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZY-9-13，保藏編號：CGMCC No.6162，保藏時間：2012年05月29日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。該菌株兼抗煙草根結線蟲和煙草疫霉，尤其能抑制煙草黑脛病菌菌絲生長及孢子萌發(fā)，在煙草根際較好的定殖。參見專利“一種兼抗根結線蟲和煙草疫霉的煙草內生菌及其應用”(公告號：CN102925393B)。經試驗驗證，苯基酰胺類殺菌劑、二硝基苯胺類殺菌劑對解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)的生長影響微弱，殺菌劑與菌株之間的相容性良好，可以進行菌藥組合。

所述菌藥組合物可采用常規(guī)方法制備成任意一種適于農業(yè)使用的劑型，如可濕性粉劑、懸浮劑、水分散顆粒劑、乳油、水乳劑、微乳劑、水劑、微膠囊劑、可溶性粉劑等。制劑中菌藥組合物為有效成分，其含量為制劑總質量的0.1～99.9％。

菌藥制劑，包含上述菌藥組合物，以及一種或多種農藥學上可接受的助劑。所述助劑包括潤濕分散劑、穩(wěn)定劑、防凍劑、崩解劑、增稠劑、消泡劑、有機溶劑、載體等，以及其他有益于有效成分在制劑中穩(wěn)定發(fā)揮藥效的物質，是農藥制劑中常用的或允許使用的各種成分。助劑的具體選擇和用量可根據(jù)配方要求通過常規(guī)試驗確定。

所述潤濕分散劑可選自十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質素磺酸鈣、木質素磺酸鈉、月桂酸硫酸鈉、烷基聚氧乙烯醚磺酸鹽、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、烷基萘甲醛縮合物磺酸鹽、拉開粉、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯、羥甲基纖維素等中的任意一種或多種。

所述穩(wěn)定劑可選自鄰苯三酚、BHT、BHA、檸檬酸、環(huán)氧大豆油、亞麻油、丁香酚、蓖麻油、橄欖油、對苯二酚、水楊酸、山梨酸鈉、丁基縮水甘油醚、苯基縮水甘油醚、甲苯基縮水甘油醚、聚乙烯基乙二醇二縮水甘油醚、二萘酚、一萘酚中的任意一種或多種。

所述防凍劑可選自甘油、丙二醇、乙二醇、尿素、氯化鈉中的任意一種。

所述崩解劑可選自硫酸銨、氯化鈣、氯化鎂、氯化鋁、膨潤土、磷酸二氫胺、尿素等中的任意一種或多種。

所述增稠劑可選自黃原膠、阿拉伯膠、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、甲基纖維素、雜多糖、可溶性淀粉、蔗糖、葡萄糖、海藻酸鈉、丙烯酸系聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、松香、石膏、硫酸鈉、骨膠、大豆蛋白、糊精、硅酸、硅酸鋁鎂等中的任意一種或多種。

所述消泡劑可選自硅油類消泡劑、硅酮類消泡劑、C_10～20飽和脂肪酸類消泡劑、C_8～10脂肪醇類消泡劑中的任意一種。

所述有機溶劑可選自甲苯、二甲苯、烷基苯、異丙醇、丁醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇、苯甲醇、環(huán)己醇、丙酮、甲基異丁基酮、環(huán)己酮、二甲基甲酰胺、吡咯烷酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、植物油等中的任意一種或多種。

所述載體可選自石英、粘土、蒙脫土、二氧化硅、硅藻土、浮石、石膏、滑石、膨潤土、高嶺土、陶土、白炭黑、方解石、大理石、海泡石、白云石、凹凸棒土等中的任意一種或多種。

菌藥組合物的應用，具體為菌藥組合物在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中的應用。

菌藥制劑的應用，具體為菌藥制劑在防治煙草根結線蟲和/或煙草黑脛病中的應用。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明中的菌藥組合物由苯基酰胺類殺菌劑、二硝基苯胺類殺菌劑和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，其中苯基酰胺類殺菌劑能抑制病原菌中RNA聚合酶的活性，二硝基苯胺類的氟啶胺可使病原菌呼吸作用中的氧化磷酸化解偶聯(lián)，阻礙能量合成，抑制病原菌的菌絲生長、孢子形成與萌發(fā)，這兩類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌配合使用對煙草根結線蟲病、煙草黑脛病具有優(yōu)異的防治效果，防效顯著優(yōu)于使用單一種類的殺菌劑、生防菌菌劑以及上述任一種類殺菌劑與生防菌菌劑的組合，且可延緩化學抗藥性的產生，特別適用于田間煙草黑脛病的防治。

具體實施方式

下述實施例僅對本發(fā)明作進一步詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限制。

實施例1

菌藥組合物，由甲霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，甲霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝1:1:1，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例2

菌藥組合物，由精甲霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，精甲霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝5:1:10，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例3

菌藥組合物，由苯霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，苯霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝10:3:1，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例4

菌藥組合物，由精苯霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，精苯霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝1:5:10，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例5

菌藥組合物，由呋霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，呋霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝4:10:1，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例6

菌藥組合物，由甲呋酰胺、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，甲呋酰胺:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝10:10:1，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例7

菌藥組合物，由惡霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，惡霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝4:8:7，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例8

菌藥組合物，由甲霜靈、惡霜靈、氟啶胺和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，甲霜靈:惡霜靈:氟啶胺:解淀粉芽孢桿菌菌粉＝4:4:8:1，菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g。

實施例9

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：苯霜靈25份，氟啶胺28份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉18份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，十二烷基磺酸鈉12份，月桂醇基硫酸鈉9份，木質素磺酸鈣6份，乙基纖維素8份，蔗糖3份，高嶺土20份；制備方法為：按照質量份數(shù)準確取各原料，粉碎后過篩，混合均勻，得到可濕性粉劑。

實施例10

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：精甲霜靈5份，氟啶胺5份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉45份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，木質素磺酸鈣10份，十二烷基硫酸鈉5份，蔗糖4份，白炭黑16份，硅藻土15份；制備方法同實施例9。

實施例11

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：呋霜靈15份，氟啶胺15份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉22份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，十二烷基磺酸鈉7份，月桂醇基硫酸鈉3份，十二烷基硫酸鈉5份，乙基纖維素3份，蔗糖5份，硅藻土15份，凹凸棒土12份；制備方法同實施例9。

實施例12

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：甲呋酰胺15份，氟啶胺18份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉20份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉6份，拉開粉5份，硫酸鈉3份，黃原膠8份，蔗糖4份，高嶺土20份；制備方法為：按照質量份數(shù)準確取各原料，混合均勻后造粒，干燥、篩分，得到懸浮劑。

實施例13

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：甲霜靈12份，氟啶胺15份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉38份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉8份，拉開粉3份，淀粉5份，硫酸鈉2份，黃原膠6份，蔗糖5份，膨潤土18份，硅藻土11份；制備方法同實施例12。

實施例14

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：精苯霜靈12份，氟啶胺20份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉39份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉7份，拉開粉5份，硫酸鈉3份，蔗糖5份，膨潤土12份，硅藻土15份；制備方法同實施例12。

實施例15

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：惡霜靈15份，氟啶胺35份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉5份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，聚乙烯吡咯烷酮8份，十二烷基酚聚氧乙烯醚3份，十二烷基苯磺酸鈉5份，環(huán)氧乙烷3份，乙基纖維素10份，凹凸棒土15份；制備方法為：按照質量份數(shù)準確取各原料，混合均勻后超微氣流粉碎，造粒，得到水分散顆粒劑。

實施例16

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：苯霜靈18份，甲呋酰胺12份，氟啶胺18份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉15份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，木質素磺酸鈉8份，二丁基萘磺酸鈉3份，十二烷基苯磺酸鈉4份，聚乙烯吡咯烷酮5份，淀粉3份，蔗糖3份，硅藻土22份；制備方法同實施例15。

在本發(fā)明的其他實施例中，還可將菌藥制劑制成水乳劑、水劑、微膠囊劑等劑型，助劑采用本領域常規(guī)助劑即可。

在本發(fā)明的其他實施例中，還可從苯基酰胺類殺菌劑中任選多種與氟啶胺復配，復配殺菌劑再與生防菌組合或制成菌藥制劑。

對比例1

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：苯霜靈53份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉18份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，其他助劑及制備方法同實施例9。

對比例2

菌藥制劑，由以下質量份數(shù)的原料制成：氟啶胺53份，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉18份(菌粉中活菌數(shù)不低于10⁶cfu/g)，其他助劑及制備方法同實施例9。

上述各實施例及對比例中的解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉參照專利(公告號CN102925393B)具體實施方式中方法制備成可濕性粉劑。

試驗例

1、菌藥組合物的協(xié)同增效作用測定

采用菌絲生長速率法測定煙草黑脛病菌對殺菌劑、解淀粉芽孢桿菌和菌藥組合物的藥劑敏感性。表1中殺菌劑原藥(未加解淀粉芽孢桿菌)的供試濃度為0.30μg/mL，表2中苯基酰胺類殺菌劑原藥(未加解淀粉芽孢桿菌)的供試濃度為0.05μg/mL，表3中二硝基苯胺類殺菌劑原藥(未加解淀粉芽孢桿菌)的供試濃度為1.00μg/mL；解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌懸液的濃度為10¹⁰cfu/mL，菌藥組合物(各類殺菌劑原藥對應濃度+解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)10¹⁰cfu/mL)，復配形式具體見下表1～3。將直徑5mm菌碟置于含藥的燕麥培養(yǎng)基中央，每藥劑處理重復3次，以無藥處理為對照，采用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同處理對煙草黑脛病菌的抑制率，評價菌藥組合物對黑脛病菌的抑制作用，結果見下表1～3。

采用Abbott數(shù)學模型計算菌藥組合物對病原菌的抑制效果(Colby S,Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations[J].Weeds,1967)。

藥劑對煙草黑脛病菌的理論抑制率計算公式如下：

E＝(X₁+X₂+…)-X₁·X₂·…/100；

式中：E代表藥劑對煙草黑脛病菌的預期(理論)抑制率，X₁、X₂…分別代表藥劑A、藥劑B…對煙草黑脛病菌的抑制率。

評價方法為：期望(理論)抑制率與實際測定抑制率相比較，當理論值＜實際值時，表現(xiàn)為增效作用；當理論值＝實際值時，表現(xiàn)為相加作用；當理論值＞實際值時，表現(xiàn)為拮抗作用。

表1苯基酰胺類、二硝基苯胺類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌對菌絲生長的抑制效果

表2苯基酰胺類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌對煙草黑脛病菌菌絲生長的抑制效果

表3二硝基苯胺類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌對煙草黑脛病菌菌絲生長的抑制效果

從表1～3可以看出，含苯基酰胺類殺菌劑、二硝基苯胺類殺菌劑和解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)的菌藥組合物對煙草黑脛病菌的抑制效果顯著優(yōu)于使用單一種類的殺菌劑、解淀粉芽孢桿菌以及上述任一種類殺菌劑與解淀粉芽孢桿菌的組合。表明本發(fā)明中菌藥組合物各組分之間具有協(xié)同增效作用。

2、菌藥制劑對煙草黑脛病菌的溫室藥效試驗

通過溫室接種煙草黑脛病菌，并噴施實施例9～16及對比例1～2制備的菌藥制劑，具體方法如下：參照董瑜的方法制備菌谷接種物，將20個直徑5mm的菌餅加入500g滅菌的谷子中，28℃培養(yǎng)14d，混合均勻后備用(董瑜.防治煙草黑脛病緩釋型殺菌劑研究[D].中國農業(yè)科學院,2015)；將中煙100煙苗種植在10×10cm的營養(yǎng)缽中，營養(yǎng)土與蛭石的比例為1:1，待煙苗長至6～7片真葉時，進行藥劑灌根處理，每個營養(yǎng)缽加藥液50mL，每個處理5株煙苗，以不施加藥劑、加50mL清水的處理作為對照。試驗設三次重復，施藥3d后于煙株根部接種菌谷10g/株，施藥7d后進行病害調查，按照以下公式計算防治效果：

防治效果(％)＝(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)×100％。

煙草黑脛病分級標準參照中華人民共和國煙草行業(yè)標準(YC/T39-1996)，試驗結果見下表4。表4中，72％甲霜·錳鋅可濕性粉劑購自浙江禾本科技有限公司，68％精甲霜·錳鋅水分散粒劑購自先正達作物保護有限公司，500g/L氟啶胺懸浮劑購自日本石原產業(yè)株式會社，解淀粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌劑參照專利(公告號CN102925393B)具體實施方式中方法制備，以上均為對照組。

表4菌藥制劑對煙草黑脛病的防治效果

從表4可以看出，實施例9～16中菌藥制劑對煙草黑脛病均具有優(yōu)異的防治效果，防效達85％以上，優(yōu)于市售的化學藥劑、解淀粉芽孢桿菌菌劑及對比例1～2中菌藥制劑，為黑脛病的防治提供了新型備選藥劑，通過與市售藥劑輪換使用，可降低抗藥性的產生。