本發(fā)明涉及一種雙相組織培養(yǎng)方法，屬于植物組織培養(yǎng)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：組織培養(yǎng)法是現(xiàn)在最基本的快速擴繁方法，可以在短時間內(nèi)生產(chǎn)出幾十萬或幾百萬株苗木。但現(xiàn)有的方法培養(yǎng)基基本上是單層的，植株吸收的養(yǎng)分或激素也只能是單一層面上的，并且擴繁系數(shù)低，增殖率不高，可持續(xù)性不強。目前，現(xiàn)有技術(shù)中也有雙相組織培養(yǎng)方法的研究，但是仍然存在一定缺陷，如生根效果不夠理想，增殖率差，并且工藝復(fù)雜，需要單層加雙相多步驟培養(yǎng)，時間長，成本高。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種雙相組織培養(yǎng)方法。技術(shù)方案：為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種雙相組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：(1)在晴天選無病蟲害的植株，取枝條中部的莖干，每段莖干帶一個芽，節(jié)上下各留1cm，洗凈灰塵，再用自來水沖洗；(2)步驟(1)所得莖干在流水里沖洗后，再用70％酒精浸泡30s，用無菌水洗，然后用0.1％的升汞滅菌6min，再用無菌水洗，待接種；(3)雙相培養(yǎng)基配制：下層為固體培養(yǎng)基，上層為液體培養(yǎng)；下層采用1/2MS+2-iP(2-異戊烯腺嘌呤)4mg/L+IBA(吲哚丁酸)1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，上層不加瓊脂，其他成分和下層一樣；配制時先配制下層，在下層凝固時，將配制好的上層液體培養(yǎng)基在無菌條件下倒入培養(yǎng)瓶中；(4)培養(yǎng)條件：將步驟(2)所得莖干接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)，在環(huán)境溫度20℃下，光照4000lx、每天16小時光照條件下進行培養(yǎng)。作為優(yōu)選，步驟(1)中所述植株為四季杜鵑、月季、微型月季、八仙花、藍莓等。作為另一種優(yōu)選，步驟(2)中所述各無菌水洗的次數(shù)為3次。作為另一種優(yōu)選，步驟(2)中所述流水里沖洗的時間為30min。作為另一種優(yōu)選，步驟(3)中所述上層液體培養(yǎng)基的高度小于等于1cm。作為另一種優(yōu)選，步驟(3)中所述培養(yǎng)瓶為玻璃管狀的培養(yǎng)瓶。本發(fā)明雙相組培法是將培養(yǎng)基分上下兩層，下層是固態(tài)培養(yǎng)基，上層是液態(tài)培養(yǎng)基，外殖體在下層有瓊脂的培養(yǎng)基中，芽的分化較少，生長速度較慢，莖葉展開來后生伸長較緩，此時在上層的液體培養(yǎng)基中，新的腋芽發(fā)生，并接連依次分化；兩層培養(yǎng)基里的成分可以進行調(diào)節(jié)，從而最大限度的提高植物的增殖率。有效擴大繁殖系數(shù)，使規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)更加容易。此外，本發(fā)明方法只進行雙相培養(yǎng)步驟，工序簡單，節(jié)約時間。技術(shù)效果：相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明方法具有以下優(yōu)勢：1、縮短組培時間，使原來組培要一年出苗的可以6個月即可發(fā)根出苗；2、在單層培養(yǎng)基基礎(chǔ)上增殖率提高約12倍以上；3、技術(shù)難度和以前一樣，不會變得更復(fù)雜；4、使組培可持續(xù)性增強，不用在外殖體沒長到一定程度就換培養(yǎng)基。附圖說明圖1：本發(fā)明雙相培養(yǎng)基示意圖；圖2：本發(fā)明雙相培養(yǎng)四季杜鵑生長情況；圖3：常規(guī)單層培養(yǎng)四季杜鵑生長情況。具體實施方式根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。而本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體試驗結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所描述的本發(fā)明。實施例1以四季杜鵑為例：1、在晴天選無病蟲害的植株，取枝條中部的莖干，每段莖干帶一個芽，節(jié)上下各留1cm，用洗潔凈洗凈灰塵，再用自來水沖洗3次；2、莖干在流水里沖洗30min后，再用70％酒精浸泡30s，再用無菌水洗3次，用0.1％的升汞滅菌6min，再用無菌水洗3次，待接種；3、雙相培養(yǎng)基配制：芽增殖培養(yǎng)基：下層采用1/2MS+2-iP4mg/L+IBA1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L，上層不加瓊脂，其中激素、糖成分和下層一樣；配制時先配制下層，下層和一般培養(yǎng)基一樣方法配制，在下層凝固時，將配制好的液態(tài)培養(yǎng)基在無菌條件下倒入培養(yǎng)瓶中，上層的量不可過多，一般不超過1cm高。4、培養(yǎng)條件：在環(huán)境溫度20℃下，光照4000lx、每天16小時光照條件下進行培養(yǎng)。實施例2與實施例1基本相同，不同之處采用的植株為月季植株。實施例3與實施例1基本相同，不同之處采用的植株為微型月季植株。實施例4與實施例1基本相同，不同之處采用的植株為八仙花植株。實施例5與實施例1基本相同，不同之處采用的植株為藍莓植株植株。實驗例按照本發(fā)明上述方法進行組織培養(yǎng)，在25d和60d時觀察，對培養(yǎng)基的狀況和莖葉的生長表現(xiàn)，觀察培養(yǎng)過程中持續(xù)性的影響?？疾旖Y(jié)果見下表1和表2。單層培養(yǎng)為按照本發(fā)明實施例1方法，培養(yǎng)基為僅有所述下層固體培養(yǎng)基的單層培養(yǎng)基；對照1組為按照本發(fā)明實施例1方法，不同之處為培養(yǎng)基中去掉2-iP；對照1組為按照本發(fā)明實施例1方法，不同之處為培養(yǎng)基中去掉IBA；表1各方法培養(yǎng)60d后發(fā)芽情況組別發(fā)芽率(％)未發(fā)芽率(％)死亡污染率(％)單層培養(yǎng)53.333.313.3對照1組51.723.325.0對照2組55.025.020.0實施例185.011.73.3實施例286.710.03.3實施例385.013.31.7由表1可見，與單層培養(yǎng)方法以及兩個對照組相比較，本發(fā)明組織培養(yǎng)方法，能夠顯著提高植株的發(fā)芽率，降低未發(fā)芽率和死亡污染率。表2各方法培養(yǎng)過程中狀況觀察由上表2結(jié)果可得，單層培養(yǎng)基易干脫水，造成培養(yǎng)基和瓶壁容易脫離，所以一定時期后就要轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)基里繼續(xù)讓其生長，這樣就會使外殖體增加受污染的機會，從而影響組培效率；而雙相培養(yǎng)基由于上層是液態(tài)培養(yǎng)基，解決了單層培養(yǎng)基所帶來的問題，使得組培變得更有可持續(xù)性。當(dāng)前第1頁1 2 3