本發(fā)明屬于胎盤及臍帶細胞保存
技術領域：
，特別涉及一種胎盤及臍帶細胞保護液。
背景技術：
：近年來，保存胎盤干細胞和臍帶血干細胞的熱潮逐年上漲，大多數(shù)人已經知曉利用臍帶血干細胞能夠治愈血液系統(tǒng)疾病等等諸多好處，但是對于胎盤干細胞的生物醫(yī)學領域的重大用途卻知之甚少。保存胎盤主要是從保存的胎盤中提取間充質干細胞，胎盤中含有的間充質干細胞非常豐富，這種間充質干細胞屬于多能干細胞，具有強大的增殖能力和多向分化潛能，能夠培養(yǎng)發(fā)育成人體的各種組織器官與神經系統(tǒng)，此外，胎盤間充質干細胞治療疾病范圍比較廣泛，例如治療心、腦血管疾病、神經系統(tǒng)疾病、肝臟疾病、骨組織病、角膜損失、燒傷燙傷、肌病等多種肌??；同理，很多人們保存臍帶血主要是從保存的臍帶血中提取臍帶間充質干細胞，臍帶間充質干細胞具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點，臍帶間充質干細胞是用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復理想的種子細胞。為此，由于胎盤干細胞和臍帶血干細胞對于治療人體疾病的重要性，越來越多的人開始儲存臍帶間充質干細胞和胎盤干細胞以備將來不時之需。儲存臍帶間充質干細胞和胎盤干細胞一般包括采集、運輸、交接、檢測、分離、凍存、復蘇、原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)等諸多步驟，在臍帶和胎盤采集后到分離前需要運輸、交接和檢測三個步驟，實際操作中需要存放較長的時間。臍帶和胎盤一旦采集，脫離了原有的體內環(huán)境，其細胞的活性在短時間內會迅速下降，這直接影響了其分離得到的胎盤細胞和臍帶細胞的質量和活力，為此，如何維持離體胎盤和臍帶細胞的活性成為了首要解決的問題。諸如時間、溫度、滲透壓等。為了實現(xiàn)能夠將胎盤和臍帶進行有效保存，現(xiàn)有專利公開號為cn105028388a公開了保護液及其制備方法，該保護液中含有右旋糖酐、氯化鈉、氯化鈣、氯化鉀、葡萄糖和人血白蛋白組成的溶液，為細胞提供了適宜保存環(huán)境，但是該保護液配制復雜，而且溶液穩(wěn)定性差，并不能實質模擬人體環(huán)境，而且細胞凍存過程中滲透壓及凍存溫度均能夠造成細胞存儲期間活性下降，活性物質損失較快，細胞在長期存儲過程中很容易凋亡，為此，急需開發(fā)一種能夠延長細胞保存期且能夠有效保證細胞活性，防止細胞凋亡的胎盤及臍帶細胞保護液。技術實現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術中的保護液雖然能夠保存胎盤或臍帶細胞，但是這種保護液配制復雜，而且溶液穩(wěn)定性差，并不能實質模擬人體環(huán)境，而且細胞凍存過程中滲透壓及凍存溫度均能夠造成細胞存儲期間活性下降，活性物質損失較快，細胞在長期存儲過程中很容易凋亡等問題，本發(fā)明提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液。本發(fā)明具體技術方案如下：本發(fā)明提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑和氨基糖苷類抗生素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10-30mg、所述氨基糖苷類抗生素180-240u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10-15mg/ml。本發(fā)明提供的保護液通過在mem–α培養(yǎng)基水溶液中加入支原體抑制劑和氨基糖苷類抗生素，為胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞提供了適宜的保存環(huán)境，通過大量實驗驗證，兩種成分協(xié)同配伍溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中組成的保護液能夠模擬人體環(huán)境，更加適宜胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞保存，在運輸過程中起到保護細胞活性的作用，延長了運輸、存儲時間，防止細胞離體后在運輸和存儲過程中細胞凋亡，為胎盤或臍帶細胞后期存儲提供了有效基礎。本發(fā)明提供的每升所述mem–α培養(yǎng)基水溶液包括聚乙烯吡咯烷酮100g、還原型輔酶ii5g、dmem液體培養(yǎng)基500ml、三(羥甲基)甲基甘氨酸25g、地塞米松100mg、考馬斯亮蘭r-2505g、3-[3-(膽酰胺基丙基)二甲氨基]丙磺酸鹽5g、曲利苯蘭25g、n-十二烷基肌氨酸鈉100g、葡聚糖凝膠g-25[中]25g、胃蛋白酶[1:3000]25g、透明質酸酶100mg、g-418100mg、dmem/f12(1:1)液體培養(yǎng)基500ml、異丙基-β-d-硫代半乳糖苷1g、包埋劑118ml、一步法總rna提取試劑200ml、噻孢霉素100mg、丙酮酸鈉10g、精胺1g、亞精胺[精瞇]1g、澳洲胎牛血清500ml、胎牛血清200ml、蛋白酶k100mg、l-纈氨酸25g、l-亮氨酸100g、l-色氨酸10g、維生素c25g、胸腺嘧啶核苷5g、l-谷胱甘肽5g、腺苷-5'-三磷酸二鈉1g、氨芐青霉素1g、3,3'-二氨基聯(lián)苯胺10g、n-(2-羥乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸25g。上述所述的dmem(dulbecco’smodifiedeaglemedisum)液體培養(yǎng)基為一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基。每升該培養(yǎng)基內各成分及含量如下：無水氯化鈣265mg/l、九水硝酸鐵0.1mg/l、氯化鉀400mg/l、無水硫酸鎂97.6mg/l7、氯化鈉6400mg/l、無水磷酸二氫鈉109mg/l、丁二酸75mg/l、丁二酸鈉100mg/l、l-鹽酸精氨酸84mg/l、l-鹽酸胱氨酸63mg/l、甘氨酸30mg/l、l-鹽酸組氨酸42mg/l、l-異亮氨酸105mg/l、l-絲氨酸42mg/l、l-蘇氨酸95mg/l、l-色氨酸16mg/l、l-酪氨酸72mg/l、l-纈氨酸94mg/l、d-泛酸鈣4mg/l、酒石酸膽堿7.2mg/l、葉酸4mg/l、肌醇7.2mg/l、煙酰胺4mg/l、核黃素0.4mg/l、鹽酸硫胺4mg/l、鹽酸吡哆辛4mg/l。進一步的改進，dmem培養(yǎng)基為低糖型dmem培養(yǎng)基。進一步的，所述氨基糖苷類抗生素為慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星或妥布霉素中的一種或多種，優(yōu)選的，所述氨基糖苷類抗生素由慶大霉素和卡那霉素按照5:2的重量份數(shù)比組成。進一步的，所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20-40份、賴氨四環(huán)素10-30份、吉米沙星20-50份。支原體抑制劑中包括柱晶白霉素、賴氨四環(huán)素和吉米沙星能夠有效抑制并殺死保護液中的支原體，作用周期短，不影響胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的保存和代謝，并且經過處理后的細胞表面光滑，胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞在運輸和后期存儲過程中不會輕易被支原體重新感染，為細胞的存儲提供了安全的生存環(huán)境，為胎盤或臍帶的運輸提供了保護作用。進一步的，所述支原體抑制劑還包括以下重量份數(shù)的組分：莪術提取物5-10份、魚腥草提取物4-8份、土茯苓提取物3-6份。支原體對細胞的存儲有很大的威脅作用，很容易造成細胞感染，從而使細胞凋亡，為此，本發(fā)明中進一步提供了支原體抑制劑中增加了莪術提取物、魚腥草提取物和土茯苓提取物，這三種中藥成分能夠在原始西藥成分的基礎上，通過中西醫(yī)結合的藥效成分組成支原體抑制劑，有效抑制和殺死保護液中的支原體，作用周期較短，對細胞具有較強的保護作用，防止細胞感染。進一步的，所述保護液還含有羥乙基淀粉和甲殼質，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述羥乙基淀粉8-10mg、所述甲殼質1-5mg。本發(fā)明中通過增加羥乙基淀粉和甲殼質能夠有效維持胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的滲透平衡，起到維持溶液的滲透壓的作用，提高溶液穩(wěn)定性，防止細胞凋亡，有效模擬人體環(huán)境，為細胞提供一個穩(wěn)壓、穩(wěn)定、適宜的生存環(huán)境，延長了細胞的保存時間。進一步的，所述保護液還含有右旋糖酐和肝素鈉，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述右旋糖酐4-6mg、所述肝素鈉1-3mg。本發(fā)明中提供的右旋糖酐和肝素鈉可以作為低溫保護劑，提高溶液的穩(wěn)定性，為細胞提供一個與人體較為接近的生存環(huán)境，降低細胞死亡率，延長細胞的保存時間。進一步的，所述保護液還含有亞硒酸鈉和n-乙酰半胱氨酸，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述亞硒酸鈉0.4-0.6mg、所述n-乙酰半胱氨酸0.1-0.3mg。本發(fā)明提供的保護液中加入亞硒酸鈉和n-乙酰半胱氨酸能夠消除保存能引起細胞活性降低或者死亡的細胞毒素。其中，亞硒酸鈉可以促進氫過氧化物代謝，消除保護液中氧化物酶和氧自由基對細胞的傷害，這一點上對干細胞具有良好的損傷保護作用。此外，n-乙酰半胱氨酸是活性氧自由基的清除劑，它可以改善氧化應激引起的不同種類細胞的損傷；對亞硒酸鈉的所減緩之外的其他的氧化損傷等進行彌補，保證細胞溫和的保存環(huán)境。進一步的，所述保護液還含有乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉和葡萄糖胺，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述乳糖醛酸5-8mg、所述血白蛋白2-4mg、所述葡萄糖酸鈉5-8mg、所述葡萄糖胺4-6mg。本發(fā)明中提供的保護液中加入乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉、葡萄糖胺，能夠為細胞提供一定的營養(yǎng)成分，同時能夠提高細胞免疫性，防止細胞感染，抑制細胞凋亡，提高細胞的存活率。優(yōu)選的，所述保護液還含有頭孢哌酮鈉和酚紅，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述頭孢哌酮鈉1-4mg、所述酚紅1-3mg。本發(fā)明中通過在保護液中加入頭孢哌酮鈉和酚紅的作用是對可能發(fā)生的污染進行預防和提示已經發(fā)生的污染，當溶液被污染后，可以顯示顏色，通過觀察保護液的顏色可以判斷細胞污染程度，有效減少細胞凋亡。本發(fā)明還提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液的制備方法，該制備方法包括以下步驟:s1、取濃度為10-15mg/ml的mem-α培養(yǎng)基水溶液，向所述mem-α培養(yǎng)基水溶液中加入氨基糖苷類抗生素，并進行攪拌，使氨基糖苷類抗生素充分溶解在mem-α培養(yǎng)基水溶液中，每mlmem-α培養(yǎng)基水溶液中溶解所述氨基糖苷類抗生素的含量為180-240u；s2、向步驟s1中溶解有氨基糖苷類抗生素的mem-α培養(yǎng)基水溶液中加入支原體抑制劑，并進行攪拌，使支原體抑制劑充分溶解在mem-α培養(yǎng)基水溶液中，即得到胎盤及臍帶細胞保護液，每mlmem-α培養(yǎng)基水溶液中溶解所述支原體抑制劑的含量為10-30mg。本發(fā)明與現(xiàn)有專利提供的保護液的制備方法相比，配制較為方便，無需特定的環(huán)境，可以大批量生產配制，不受外界環(huán)境影響。本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明提供的保護液不僅能夠有效殺死或抑制支原體的形成，防止胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞感染，而且通過加入保護成分能夠為胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞提供一個穩(wěn)定的滲透壓環(huán)境，有效模擬人體環(huán)境，提高細胞生存率，同時能夠為細胞短時間內保存和運輸提供營養(yǎng)成分，提高細胞的免疫性能，防止細胞感染，有效提高細胞的生存力，延長細胞運輸時間。具體實施方式下面結合以下實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明。實施例1本發(fā)明實施例1提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑和慶大霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。實施例2本發(fā)明實施例2提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素和卡那霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素150u、所述卡那霉素60u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為12.5mg/ml。實施例3本發(fā)明實施例3提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、阿米卡星和妥布霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑30mg、所述慶大霉素80u、所述阿米卡星80u、所述妥布霉素80u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為15mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份。本發(fā)明還提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液的制備方法，該制備方法包括以下步驟:s1、取濃度為15mg/ml的mem-α培養(yǎng)基水溶液，向所述mem-α培養(yǎng)基水溶液中加入慶大霉素、阿米卡星和妥布霉素，并進行攪拌，使慶大霉素、阿米卡星和妥布霉素充分溶解在mem-α培養(yǎng)基水溶液中，每mlmem-α培養(yǎng)基水溶液中溶解所述慶大霉素80u、所述阿米卡星80u、所述妥布霉素80u；s2、向步驟s1中溶解有慶大霉素、阿米卡星和妥布霉素的mem-α培養(yǎng)基水溶液中加入支原體抑制劑，并進行攪拌，使支原體抑制劑充分溶解在mem-α培養(yǎng)基水溶液中，即得到胎盤及臍帶細胞保護液，每mlmem-α培養(yǎng)基水溶液中溶解所述支原體抑制劑的含量為30mg。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份直接混合即可。實施例4本發(fā)明實施例4提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、卡那霉素和阿米卡星用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素70u、所述卡那霉素70u和所述阿米卡星70u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為11mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份。本實施例4中提供的保護液的制備方法與實施例3的方法相同。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份直接混合即可。實施例5本發(fā)明實施例5提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星和妥布霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素60u、所述卡那霉素60u、所述阿米卡星30u、所述妥布霉素30u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為12mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份。本實施例5中提供的保護液的制備方法與實施例3的方法相同。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份直接混合即可。實施例6本發(fā)明實施例6提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、卡那霉素、阿米卡星和妥布霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素60u、所述卡那霉素60u、所述阿米卡星30u、所述妥布霉素30u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為12mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份。本實施例6中提供的保護液的制備方法與實施例3的方法相同。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份直接混合即可。實施例7本發(fā)明實施例7提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉和甲殼質用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉10mg和所述甲殼質1mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份。本實施例7提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉10mg和所述甲殼質1mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份直接混合即可。實施例8本發(fā)明實施例8提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉和甲殼質用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉8mg和所述甲殼質3mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份。本實施例8提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉8mg和所述甲殼質3mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份直接混合即可。實施例9本發(fā)明實施例9提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐和肝素鈉用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素210u、所述羥乙基淀粉9mg、所述甲殼質5mg、所述右旋糖酐4mg、所述肝素鈉1mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份。本實施例9提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑20mg、慶大霉素210u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質5mg、右旋糖酐4mg、肝素鈉1mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份直接混合即可。實施例10本發(fā)明實施例10提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉、亞硒酸鈉和n-乙酰半胱氨酸用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉8mg、所述甲殼質3mg、所述右旋糖酐6mg、所述肝素鈉3mg、所述亞硒酸鈉0.4mg、所述n-乙酰半胱氨酸0.1mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份。本實施例10提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑10mg、慶大霉素180u、羥乙基淀粉8mg、甲殼質3mg、右旋糖酐6mg、肝素鈉3mg、亞硒酸鈉0.4mg、n-乙酰半胱氨酸0.1mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份直接混合即可。實施例11本發(fā)明實施例11提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉、亞硒酸鈉、n-乙酰半胱氨酸、乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉和葡萄糖胺用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素210u、所述羥乙基淀粉9mg、所述甲殼質1mg、所述右旋糖酐4mg、所述肝素鈉1mg、所述亞硒酸鈉0.6mg、所述n-乙酰半胱氨酸0.3mg、所述乳糖醛酸5mg、所述血白蛋白2mg、所述葡萄糖酸鈉5mg、所述葡萄糖胺4mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份。本實施例11提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑20mg、慶大霉素210u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質1mg、右旋糖酐4mg、肝素鈉1mg、亞硒酸鈉0.6mg、n-乙酰半胱氨酸0.3mg、乳糖醛酸5mg、血白蛋白2mg、葡萄糖酸鈉5mg、葡萄糖胺4mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份直接混合即可。實施例12本發(fā)明實施例12提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉、亞硒酸鈉、n-乙酰半胱氨酸、乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉、葡萄糖胺、頭孢哌酮鈉和酚紅用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑10mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉8mg、所述甲殼質3mg、所述右旋糖酐6mg、所述肝素鈉3mg、所述亞硒酸鈉0.4mg、所述n-乙酰半胱氨酸0.1mg、所述乳糖醛酸8mg、所述血白蛋白4mg、所述葡萄糖酸鈉8mg、所述葡萄糖胺6mg、所述頭孢哌酮鈉1mg、所述酚紅1mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份。本實施例12提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑10mg、慶大霉素180u、羥乙基淀粉8mg、甲殼質3mg、右旋糖酐6mg、肝素鈉3mg、亞硒酸鈉0.4mg、n-乙酰半胱氨酸0.1mg、乳糖醛酸8mg、血白蛋白4mg、葡萄糖酸鈉8mg、葡萄糖胺6mg、頭孢哌酮鈉1mg、酚紅1mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素40份、賴氨四環(huán)素30份、吉米沙星50份、莪術提取物5份、魚腥草提取物4份、土茯苓提取物3份直接混合即可。實施例13本發(fā)明實施例11提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉、亞硒酸鈉、n-乙酰半胱氨酸、乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉、葡萄糖胺、頭孢哌酮鈉和酚紅用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素210u、所述羥乙基淀粉9mg、所述甲殼質4mg、所述右旋糖酐4mg、所述肝素鈉1mg、所述亞硒酸鈉0.6mg、所述n-乙酰半胱氨酸0.3mg、所述乳糖醛酸5mg、所述血白蛋白2mg、所述葡萄糖酸鈉5mg、所述葡萄糖胺4mg、所述頭孢哌酮鈉4mg、所述酚紅3mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份。本實施例13提供的保護液的制備方法是將支原體抑制劑20mg、慶大霉素210u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質4mg、右旋糖酐4mg、肝素鈉1mg、亞硒酸鈉0.6mg、n-乙酰半胱氨酸0.3mg、乳糖醛酸5mg、血白蛋白2mg、葡萄糖酸鈉5mg、葡萄糖胺4mg、頭孢哌酮鈉4mg、酚紅3mg分別溶解在mem–α培養(yǎng)基水溶液中即可。支原體抑制劑的配制方法為：將柱晶白霉素30份、賴氨四環(huán)素20份、吉米沙星35份、莪術提取物8份、魚腥草提取物6份、土茯苓提取物5份直接混合即可。對照例1本發(fā)明對照例1提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將慶大霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述慶大霉素100u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。對照例2本發(fā)明對照例2提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素15份。對照例3本發(fā)明對照例3提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑和慶大霉素用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素180u，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為10mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：賴氨四環(huán)素30份、莪術提取物5份、土茯苓提取物3份。對照例4本發(fā)明對照例4提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素和羥乙基淀粉用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、所述慶大霉素180u、所述羥乙基淀粉10mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為12.5mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份。對照例5本發(fā)明對照例5提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質和右旋糖酐用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、慶大霉素180u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質1mg、右旋糖酐4mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為12.5mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份。對照例6本發(fā)明對照例6提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉和亞硒酸鈉用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、慶大霉素180u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質4mg、右旋糖酐4mg、肝素鈉3mg、亞硒酸鈉0.4mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為14mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份。對照例7本發(fā)明對照例6提供了一種胎盤及臍帶細胞保護液，所述保護液主要是將支原體抑制劑、慶大霉素、羥乙基淀粉、甲殼質、右旋糖酐、肝素鈉、亞硒酸鈉、n-乙酰半胱氨酸、乳糖醛酸和血白蛋白用mem–α培養(yǎng)基水溶液溶解而成，每ml所述mem–α培養(yǎng)基水溶液分別溶解所述支原體抑制劑20mg、慶大霉素180u、羥乙基淀粉9mg、甲殼質5mg、右旋糖酐4mg、肝素鈉3mg、亞硒酸鈉0.4mg、n-乙酰半胱氨酸0.3mg、乳糖醛酸5mg、血白蛋白2mg，所述mem–α培養(yǎng)基水溶液的濃度為14mg/ml。所述支原體抑制劑包括以下重量份數(shù)的組分：柱晶白霉素20份、賴氨四環(huán)素10份、吉米沙星20份、莪術提取物10份、魚腥草提取物8份、土茯苓提取物6份。試驗1、本發(fā)明提供的保護液對胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞存活率的影響1、檢測樣品：取本發(fā)明實施例1、實施例2和對照例1提供的保護液進行檢測試驗。2、采集樣品：分別3組細胞群，第一組細胞群中含有1.9×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第二組細胞群中含有2.5×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第三組細胞群中含有2.2×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，將第一組、第二組和第三組細胞群分別浸沒在實施例1、實施例2和對照例1提供的保護液中，在溫度為4℃的條件下保存3天后，檢測不同保護液中胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的數(shù)量和生長情況。組別原始細胞數(shù)量保存后細胞數(shù)量細胞存活率實施例11.9×1051.69×10589％實施例22.5×1052.37×10595％對照例12.2×1051.4×10564％由上述數(shù)據(jù)得知，本發(fā)明實施例1、實施例2提供的保護液與對照例1相比，本發(fā)明實施例1、實施例2提供的保護液能夠有效提高細胞存活率，而且保護液中支原體抑制劑和慶大霉素的含量越高，其細胞的存活率越高，實施例2提供的保護液中的細胞存活率達到了95％，為此，可以驗證本發(fā)明提供的保護液中通過在mem–α培養(yǎng)基溶液中加入支原體抑制劑和氨基糖苷類抗生素能夠有效模擬人體環(huán)境，提高細胞存活率，降低細胞凋亡，延長細胞運輸時間，并且實施例2加入混合的氨基糖苷類抗生素的效果明顯好于單一的氨基糖苷類抗生素。試驗2、本發(fā)明提供的保護液對胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的活率檢測1、檢測樣品：以實施例1、7、9、11提供的保護液為實驗1-4組，對照例1、4、5、7提供的保護液對照1-4組。2、采集樣品：將采集的等量的臍帶細胞或胎盤細胞分別浸沒上述實驗1-4組和對照1-4組中。將各實驗組和對照組的臍帶細胞或胎盤細胞分別在24h、48h、96h、240h、480h、960h和1920h進入試驗程序，調整臍帶細胞或胎盤細胞的密度均為1×106cells/ml。按細胞懸液：0.4％臺盼藍＝3:1(v:v)充分混勻，取20μl細胞懸液加入細胞計數(shù)板中，用countstar細胞計數(shù)器進行細胞活性率檢測。細胞活性率結果如下表所示。實驗組和對照組細胞活率結果注：“--”表示沒有活性。由上述數(shù)據(jù)可知，實施例1提供的保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的細胞活性要比使用對照例1提供的保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的細胞活率高；實施例7、9、11分別提供的保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的活性要比使用對照例1、4、5、7提供的保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的細胞活率高；并且實施例9和11提供的保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的時間要比對照例5和7提供保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的時間長，分別可達到480h和1920h。由此得出，本發(fā)明提供的保護液中缺少支原體抑制劑或氨基糖苷類抗生素后，其干細胞的活率顯著降低。當保護液中選擇的mem–α培養(yǎng)基溶液為加入羥乙基淀粉和甲殼質后，能夠顯著提高保護液保存的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的活率，當羥乙基淀粉和甲殼質的成分中缺少其一或者成分被替代后，失去了提高干細胞活率的作用；并且在保護液中加入右旋糖酐和肝素鈉的混合物還可提高保護液胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的保存時間，可將保存時間提高到480h，當右旋糖酐和肝素鈉的成分缺少其一或被別的成分替代后，胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的保存時間會縮短；本發(fā)明提供的保護液中加入乳糖醛酸、血白蛋白、葡萄糖酸鈉和葡萄糖胺的混合物還可提高保護液胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞的保存時間，保存時間能夠達到1920h，細胞的活率依然保持在65％以上。試驗3、本發(fā)明提供的保護液對胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞免疫力的影響1、檢測樣品：取本發(fā)明實施例3、5、10和對照例2、3、6提供的保護液進行檢測試驗。2、采集樣品：分別6組細胞群，第一組細胞群中含有7.9×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第二組細胞群中含有3.2×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第三組細胞群中含有4.9×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第四組細胞群中含有3.5×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第五組細胞群中含有4.2×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，第六組細胞群中含有3.2×105個離體胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞，將第一、二、三、四、五、六組細胞群分別浸沒在實施例3、5、10及對照例2、3、6提供的保護液中，在溫度為4℃的條件下保存12天后，將培養(yǎng)后的胎盤干細胞和臍帶間充質干細胞消化處理后用流式細胞儀計數(shù)檢測細胞感染支原體或其他細菌的數(shù)量，并計算細胞受到支原體或細菌感染率；結果如下表：。組別細胞總數(shù)量未感染的細胞數(shù)量感染率實施例37.9×1055.7×10528％實施例53.2×1052.72×10515％實施例104.9×1054.61×1056％對照例23.5×1052.1×10540％對照例34.2×1053.15×10525％對照例63.2×1052.82×10512％由上述數(shù)據(jù)得出，由實施例3和對照例2對比可知，本發(fā)明提供的保護液中含有的慶大霉素和支原體抑制劑能夠有效抑制細菌或支原體的生成，同時能夠殺死支原體，確認任意一種成分均不能達到抑制細菌或支原體的效果。由實施例5和對照例3可知，中西醫(yī)結合組成的支原體抑制劑能夠有效降低支原體和細菌的形成，而且本發(fā)明中公開了支原體抑制劑由柱晶白霉素、賴氨四環(huán)素、吉米沙星、莪術提取物、魚腥草提取物、土茯苓提取物能夠比較有效的抑制和殺死支原體，由實施例10和對照例6可知，本發(fā)明提供的保護液能夠有效提高細胞的免疫能力，防止細胞感染支原體。本發(fā)明的胎盤或臍帶細胞保護液用于保存從胎盤或臍帶采集后到臍帶或胎盤分離前的人來源的臍帶或胎盤。本發(fā)明的胎盤或臍帶保護液可以在保存胎盤或臍帶的過程中降低胎盤或臍帶的新陳代謝，減少代謝物的累積，又能提供一些基本的營養(yǎng)物質和能量物質，以維持最低的代謝水平，能有效地保存胎盤或臍帶中的干細胞的活性，大大減少運輸、交接、檢測的時間限制。經此種保護液保存的胎盤或臍帶，分離出的干細胞活性受時間的影響很小，大大減少了胎盤或臍帶從采集到制備的時間限制，且所用的所有成分均符合臨床標準，污染率小。經此保護液2-10℃恒溫保存的胎盤或臍帶，在保存48小時后胎盤或臍帶中細胞活性是采集的新鮮胎盤或臍帶的80％，采集保存后的胎盤或臍帶同不加任何溶液保存的胎盤或臍帶的污染率相比，由1.2％降到了0.15％。本發(fā)明不局限于上述最佳實施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下都可得出其他各種形式的產品，但不論在其形狀或結構上作任何變化，凡是具有與本申請相同或相近似的技術方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內。當前第1頁12