本發(fā)明涉及一種經(jīng)濟(jì)作物栽培技術(shù)，尤其是一種百香果脫毒方法。
背景技術(shù)：
百香果（Passiflora edulis Sims），學(xué)名西番蓮，西番蓮科，西番蓮屬，為熱帶、亞熱帶多年生常綠藤本漿果類果樹，當(dāng)前百香果病蟲害發(fā)生嚴(yán)重，表現(xiàn)在：種植后根部腐爛、成株易受病蟲害侵染，造成嚴(yán)重減產(chǎn)。據(jù)分析，這與百香果幼苗自身攜帶病毒有關(guān)，百香果花葉病毒CMV和木質(zhì)化病毒PWV為危害百香果幼苗的兩種最主要病毒。傳統(tǒng)的百香果脫毒方法是：采用藥劑病毒靈、黃糖醋等噴灑莖葉，脫毒不完全，環(huán)境適合時(shí)百香果花葉病毒CMV和木質(zhì)化病毒PWV仍發(fā)生嚴(yán)重，導(dǎo)致該種植方法植株矮小，莖尖和葉片皺縮，產(chǎn)量低，品質(zhì)差、畸形果較多。
目前針對百香果種苗脫毒的研究不少，如中國專利：申請公布號CN 105284314A的專利：一種百香果脫毒苗的培育方法，步驟包括：場地選擇→構(gòu)建擇育苗棚→構(gòu)建苗床→安裝自動噴霧系統(tǒng)→制備裝有輕基質(zhì)營養(yǎng)土的營養(yǎng)袋→制備離體材料→離體材料脫毒→制備生根液→浸泡生根液→營養(yǎng)袋管理 ( 對基質(zhì)的濕度進(jìn)行調(diào)整及消毒 ) →扦插→啟動自動噴水系統(tǒng)進(jìn)行濕度管理→幼苗管理→出圃。還有申請公布號為CN 105340744A的專利：公開了一種百香果組織培養(yǎng)育苗的方法，其包括：基本培養(yǎng)基的配制、外植體的消毒、叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)培養(yǎng)以及移栽定植。還有申請公布號為CN 105706935A的專利公開了一種百香果脫毒苗的培養(yǎng)方法，通過植株外植體前處理、基礎(chǔ)培養(yǎng)、脫毒培養(yǎng)、增殖組培快繁培養(yǎng)、生根培養(yǎng)5個(gè)步驟獲得百香果脫毒苗。以上三個(gè)公開的專利通過對百香果外植器官進(jìn)行消毒處理后離體培養(yǎng)來獲得脫毒種苗，步驟簡單，但在獲取外植體時(shí)難以區(qū)分是否已經(jīng)為病毒攜帶植株，另外單一的莖尖脫毒難以取得理想的脫毒效果，因此，如何從多方面對百香果種苗進(jìn)行消毒處理，從而獲得百香果的脫毒苗，還值得進(jìn)一步研究。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種百香果脫毒方法，使脫毒后百香果苗木生長快，結(jié)果期縮短2個(gè)月，提高產(chǎn)量和品質(zhì)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
一種百香果的種苗脫毒方法，包括以下步驟：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在40～46℃左右濕水中浸泡5～10分鐘，再放入50～60℃熱水中處理50～60min，取出后吸干水分。
進(jìn)一步的，將百香果種子在43～45℃左右濕水中浸泡5～8分鐘，再放入50～57℃熱水中處理52～58min。
更進(jìn)一步的，將百香果種子在45℃左右濕水中浸泡6分鐘，再放入50～57℃熱水中處理55min。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在40～50℃左右濕水中浸泡5～10min，再放入55～56℃熱水中處理50～60min。
進(jìn)一步的，將莖尖在42～48℃左右濕水中浸泡5～8min，再放入50～57℃熱水中處理52～58min。
更進(jìn)一步的，將莖尖在45℃左右濕水中浸泡6min，再放入50～57℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；得無毒苗。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
本發(fā)明的有益效果為：
采用本發(fā)明方法對百香果進(jìn)行脫毒處理，可以有效脫除百香果花葉病毒CMV和木質(zhì)化病毒PWV，脫毒苗無花葉、斑駁、皺縮，生長快，結(jié)果早，產(chǎn)量高，脫毒率高，成活率高。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在40℃左右濕水中浸泡6分鐘，再放入50℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在40℃左右濕水中浸泡6min，再放入50℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗18.5%，成活率85.8%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例2：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在41℃左右濕水中浸泡5分鐘，再放入51℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在41℃左右濕水中浸泡5min，再放入51℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗22.7%。成活率72.7%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例3：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在45℃左右濕水中浸泡6分鐘，再放入55℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在45℃左右濕水中浸泡6min，再放入55℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗30.3%。成活率63.5%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例4：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在45℃左右濕水中浸泡6分鐘，再放入50℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在45℃左右濕水中浸泡6min，再放入57℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗51.9%。成活率56.9%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例5：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在44℃左右濕水中浸泡8分鐘，再放入57℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在46℃左右濕水中浸泡6min，再放入55℃熱水中處理50min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗78.2%。成活率38.6%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例6：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在46℃左右濕水中浸泡6分鐘，再放入57℃熱水中處理54min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在46℃左右濕水中浸泡6min，再放入52℃熱水中處理55min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗100%，成活率22.6%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。
實(shí)施例7：
（1）種子熱處理：將百香果果實(shí)中充分發(fā)育的種子取出，放進(jìn)砂布內(nèi)包好，先在46℃左右濕水中浸泡8分鐘，再放入57℃熱水中處理55min，取出后吸干水分。
（2）種子消毒：在無菌條件下，將熱處理過的種子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次。
（3）砧木培養(yǎng)：剝?nèi)シN皮，接種于砧木培養(yǎng)基上，每支試管接種2～3粒種子，置于黑暗恒定27±2℃溫度下發(fā)芽培養(yǎng)，待幼苗生長13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室內(nèi)散射光下培養(yǎng)1～2t；所述砧木培養(yǎng)基組成為：MS無機(jī)鹽類+3％蔗糖+1%瓊脂，pH5.7。
（4）莖尖消毒：從果園中結(jié)果母樹上選擇生長旺盛的新梢，取枝頂端約5cm嫩梢，在室內(nèi)剪成1～1.5cm長，用自來水沖洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉過濾液中消毒5min，以無菌水沖洗3～5次。
（5）莖尖熱處理：莖尖熱處理先在46℃左右濕水中浸泡6min，再放入52℃熱水中處理54min。
（6）接穗繁殖：切取1～2mm莖尖，帶2～3個(gè)葉原基，接種在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培養(yǎng)基上。
（7）莖尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：將砧木苗從試管內(nèi)取出，切去過長的根，縮短至4～6cm，切去莖的上部使上胚軸剩下約l～1.5cm，把子葉和腋芽去掉，在上胚軸前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剝好的帶2～3個(gè)葉原基，高約0.2～0.4mm的莖尖切下，立即轉(zhuǎn)接到制備好的倒“T”形缺口上；獲得無毒苗100%，但成活率5.2%。
（8）生根培養(yǎng)：嫁接培養(yǎng)后的百香果脫毒苗接種至生根培養(yǎng)基中，進(jìn)行生根培養(yǎng)30d～40d；所述生根培養(yǎng)基配方，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，蔗糖2%～3%、瓊脂0.8%～1.0%、MS+6-BA 0 .08%～0 .12%、γ-PGA0.1%～0 .15%、余量為水。
（9）嫁接苗移栽培養(yǎng)：當(dāng)植株根長至 2～3cm 時(shí)，進(jìn)行馴化移栽，移栽于營養(yǎng)缽中，10～15d 后可移栽到果園，然后按照防蟲網(wǎng)室標(biāo)準(zhǔn)建立基地管理，防治蚜蟲、紅蜘蛛和介殼蟲的為害。
（10）PCR檢測：經(jīng)PCR檢測，確認(rèn)苗木無病毒可以出圃。