本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)技術，具體涉及一種青錢柳試管苗生根培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)方法。

背景技術：

青錢柳[Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinskaja]屬胡桃科(Juglandaceae)青錢柳屬植物，別名搖錢樹、麻柳，青錢李、山麻柳、山化樹。青錢柳被譽為“植物大熊貓”、“醫(yī)學界的第三棵樹”，是冰川四紀幸存下來的珍稀樹種，僅存于中國，是國家重點保護的瀕危植物。青錢柳主要分布于江西、浙江、江蘇、安徽、福建、臺灣、湖北、四川、貴州、云南等地，多零星分布于深山老林和一些自然保護區(qū)中。

青錢柳更具有獨特的保健和藥用價值。民間長期以來用青錢柳葉做茶，茶氣清香，味甜?！吨袊兴庂Y源志要》(1994)記載，青錢柳葉具清熱消渴解毒之效。《全國中草藥名鑒》(1996)記載，青錢柳樹皮、葉、根有殺蟲止癢，消炎止痛祛風之功效。現(xiàn)代藥理學研究證明，青錢柳有降血壓、降血脂和抗衰老等藥用功效。研究發(fā)現(xiàn)，青錢柳葉含有大量的鉀、鈣、鎂、磷等常量元素，還含有錳、鐵、銅、鉻、鋅、硒、釩、鍺等微量元素。其中，與糖代謝和胰島素作用密切相關的元素鉻、鎳、鋰、硒、釩的含量較高，能夠協(xié)助胰島素發(fā)揮降血糖作用，并能改善糖耐量。青錢柳葉還含有豐富的多糖、黃酮、三萜、甾體類、皂苷、香豆精等有機化合物，這些化合物能有效降低甘油三酯和膽固醇，使青錢柳具有降血壓、降血糖、降血脂的功能，同時對增強人體免疫力、抗氧化、抗衰老等具有獨特作用。

目前，市場上的青錢柳苗木多為野生資源移栽或人工培育的種子實生苗。由于青錢柳種源有限，種子飽滿率低，還具有深休眠特性，采用常規(guī)播種育苗方法育種周期長，效率低，難以在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量種苗，不能滿足市場的需求。近幾年來，國內(nèi)外研究人員以離體胚、葉片、嫩芽、莖段等為外植體相繼開展青錢柳的組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究，如謝寅峰等(謝寅峰等.青錢柳組培快繁體系的初步研究.西北植物學報，2009，29(11)：2331-2338)利用離體胚初步建立了青錢柳的快繁體系，采用WPM+0.2mg/L IBA+20g/L蔗糖培養(yǎng)基進行誘導，生根率為16.67％，經(jīng)過15d暗誘導處理，生根率可提高到23.33％。喬卿梅等(喬卿梅,程茂高,魏志華.不同外源激素對青錢柳莖段組織培養(yǎng)的影響.北方園藝2009(7)：125-127)研究發(fā)現(xiàn)，在青錢柳莖段組織培養(yǎng)中，不定根誘導的適宜培養(yǎng)基為改良MS+5.0mg/L IBA，誘導率為40.00％。魯萌等(魯萌等.青錢柳莖段腋芽的離體培養(yǎng)技術.南京林業(yè)大學學報(自然科學版)，2013，37(6)：6-10)以WPM為基本培養(yǎng)基，研究IBA、GGR-6、ABT-1對青錢柳生根的影響，結(jié)果表明，10％GGR+1.0mg/L IBA組合處理效果最好，生根率為25％。已有的研究結(jié)果表明，青錢柳試管苗已能成功擴繁，但其生根率低、生根質(zhì)量差，難以滿足工廠化育苗的要求。由此可見，青錢柳組培苗的生根技術已成為制約青錢柳種苗工廠化生產(chǎn)的關鍵環(huán)節(jié)，組培苗生根技術的突破，對建立青錢柳高效組培快繁體系、擴大種植規(guī)模具有重要意義。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種青錢柳試管苗生根培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)方法。采用本發(fā)明所述的生根培養(yǎng)基對常規(guī)青錢柳試管苗進行生根培養(yǎng)，可以獲得70％以上的生根率，且根系發(fā)育良好，植株生長健壯，移栽成活率高。

本發(fā)明所述的青錢柳試管苗生根培養(yǎng)基的配方為：

改良MS+IBA0.5～2.0mg/L+IAA0～2.0mg/L+胺鮮酯0.02～0.1mg/L+蔗糖15～20g/L，pH5.5～6.0；

其中，改良MS的配方為：

大量元素的組分及濃度為：硝酸鉀700mg/L、硝酸銨600mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀60mg/L、二水氯化鈣165mg/L；

有機化合物的組分及濃度為：肌醇100mg/L、煙酸1mg/L、鹽酸吡哆醇1mg/L、鹽酸硫胺素0.2mg/L、甘氨酸2mg/L；

微量元素的組分及濃度同MS培養(yǎng)基。

上述技術方案中，所述青錢柳生根培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為：改良MS+IBA0.5～1.0mg/L+IAA 0.8～1.5mg/L+胺鮮酯0.05～0.08mg/L+蔗糖18～20g/L，pH5.5～6.0；最優(yōu)選為改良MS+IBA 0.5mg/L+IAA 1.0mg/L+胺鮮酯0.05mg/L+蔗糖20g/L，pH5.5～6.0。所述青錢柳生根培養(yǎng)基的pH值優(yōu)選為5.8～6.0。

本發(fā)明還包括青錢柳試管苗的生根培養(yǎng)方法，具體為：切取單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少25d；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：

改良MS+IBA0.5～2.0mg/L+IAA0～2.0mg/L+胺鮮酯0.02～0.1mg/L+蔗糖15～20g/L，pH5.5～6.0；

其中，改良MS的配方為：

大量元素的組分及濃度為：硝酸鉀700mg/L、硝酸銨600mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀60mg/L、二水氯化鈣165mg/L；

有機化合物的組分及濃度為：肌醇100mg/L、煙酸1mg/L、鹽酸吡哆醇1mg/L、鹽酸硫胺素0.2mg/L、甘氨酸2mg/L；

微量元素的組分及濃度同MS培養(yǎng)基。

上述方法中，青錢柳試管苗的生根培養(yǎng)條件可以與現(xiàn)有技術相同。優(yōu)選如下：培養(yǎng)溫度為20～30℃，光照周期為10～14h/d，光照強度為2000～3000Lx；進一步優(yōu)選的培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為23～27℃，光照周期為10～12h/d，光照強度為2000～3000Lx。

上述方法中，青錢柳試管苗在生根培養(yǎng)基中在上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)25d時，生根率可達到70％以上，而且根系發(fā)育良好，植株生長健壯。本發(fā)明所述方法中，優(yōu)選試管苗在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)時間為25～35d。

上述方法中，所述青錢柳生根培養(yǎng)基的配方優(yōu)選為：改良MS+IBA0.5～1.0mg/L+IAA 0.8～1.5mg/L+胺鮮酯0.05～0.08mg/L+蔗糖18～20g/L，pH5.5～6.0；最優(yōu)選為改良MS+IBA 0.5mg/L+IAA 1.0mg/L+胺鮮酯0.05mg/L+蔗糖20g/L，pH5.5～6.0。所述青錢柳生根培養(yǎng)基的pH值優(yōu)選為5.8～6.0。

本發(fā)明所述方法中，用于進行生根培養(yǎng)的試管苗按現(xiàn)有常規(guī)方法離體培養(yǎng)得到，優(yōu)選是以青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)所得。優(yōu)選是選取高度≥2cm的單株試管苗進行生根培養(yǎng)，更優(yōu)選是選取高度≥3cm且長有3～4個復葉的單株試管苗進行生根培養(yǎng)，這樣可以進一步提高植株的移栽成活率。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的特點在于：通過改良基本培養(yǎng)基組分濃度、結(jié)合使用特定濃度的胺鮮酯、IBA以及IAA植物生長調(diào)節(jié)劑，使所得生根培養(yǎng)基可有效促進青錢柳試管苗的生根。利用該生根培養(yǎng)基對青錢柳試管苗進行生根培養(yǎng)，可使生根率達到70％以上(優(yōu)選實施例可達86％)，且根系發(fā)育良好，植株生長健壯，移栽成活率高，為實現(xiàn)青錢柳組培產(chǎn)業(yè)化和推廣應用提供了技術支撐。

附圖說明

圖1為實施例1中按常規(guī)方法獲得的青錢柳試管苗的圖片；

圖2為采用本發(fā)明實施例1中所述的生根培養(yǎng)基培養(yǎng)25d時的生根苗的圖片。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳述，以更好地理解本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明并不限于以下實施例。

以下各實施例中，所涉及的改良MS包括大量元素、微量元素和有機化合物，具體的配方如下：

大量元素的組分及濃度為：硝酸鉀700mg/L、硝酸銨600mg/L、七水硫酸鎂185mg/L、磷酸二氫鉀60mg/L、二水氯化鈣165mg/L；

微量元素的組分及濃度為：碘化鉀0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、四水硫酸錳22.3mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、七水硫酸亞鐵27.8mg/L。其中，七水硫酸亞鐵與乙二胺四乙酸二鈉螯合，乙二胺四乙酸二鈉濃度為37.3mg/L。

有機化合物的組分及濃度為：肌醇100mg/L、煙酸1mg/L、鹽酸吡哆醇1mg/L、鹽酸硫胺素0.2mg/L、甘氨酸2mg/L。

實施例1

1)取青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)獲得試管苗，如圖1所示；

2)生根培養(yǎng)：切取高度大于3.5cm且長有3～4個復葉的單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d(在培養(yǎng)25d時如圖2所示)；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良MS+IBA0.5mg/L+IAA1.0mg/L+胺鮮酯0.05mg/L+蔗糖20g/L，pH5.8，采用濾紙橋為支撐物。

生根培養(yǎng)條件為：溫度為23～25℃，光照周期為12h/d，光照強度為2000Lx。

按生根株數(shù)/接種株數(shù)×100％來計算生根率(以下相同)，生根率為86％。

對比例1

重復實施例1的方法，只是將生根培養(yǎng)基配方修改為：改良MS+IBA0.5mg/L+IAA 1.0mg/L+蔗糖20g/L，pH5.8。

經(jīng)計算，生根率為25％。

對比例2

重復實施例1的方法，只是將生根培養(yǎng)基配方修改為：改良MS+IBA 0.5mg/L+IAA 1.0mg/L+胺鮮酯0.01mg/L+蔗糖20g/L，pH5.8。

經(jīng)計算，生根率為40％。

對比例3

重復實施例1的方法，只是將生根培養(yǎng)基配方修改為：改良MS+IBA0.5mg/L+IAA 1.0mg/L+胺鮮酯0.15mg/L+蔗糖20g/L，pH5.8。

經(jīng)計算，生根率為5％。

實施例2

1)取青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)獲得試管苗；

2)生根培養(yǎng)：切取高于3.5cm且長有3～4個復葉的單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良MS+IBA1.5mg/L+胺鮮酯0.05mg/L+蔗糖20g/L，pH5.8，采用濾紙橋為支撐物。

在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：溫度為23～25℃，光照周期為12h/d，光照強度為2000Lx。

經(jīng)計算，生根率為80％。

實施例3

1)取青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)獲得試管苗；

2)生根培養(yǎng)：切取高于2.5cm且長有2～3個復葉的單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良MS+IBA0.5mg/L+IAA 2.0mg/L+胺鮮酯0.02mg/L+蔗糖15g/L，pH6.0，采用濾紙橋為支撐物。

在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：溫度為25℃，光照周期為10h/d，光照強度為3000Lx。

經(jīng)計算，生根率為75％。

實施例4

1)取青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)獲得試管苗；

2)生根培養(yǎng)：切取高于2.5cm且長有1～2個復葉的單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)27d；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良MS+IBA1.5mg/L+IAA0.5mg/L+胺鮮酯0.1mg/L+蔗糖18g/L，pH5.5，采用濾紙橋為支撐物。

在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：溫度為20℃，光照周期為14h/d，光照強度為2500Lx。

經(jīng)計算，生根率為70％。

實施例5

1)取青錢柳當年生枝條，按常規(guī)方法離體培養(yǎng)獲得試管苗；

2)生根培養(yǎng)：選取高于3.5cm且長有3～4個復葉的單株試管苗，接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)28d；其中：

所述生根培養(yǎng)基的配方為：改良MS+IBA1.0mg/L+IAA1.5mg/L+胺鮮酯0.08mg/L+蔗糖16g/L，pH5.9，采用濾紙橋為支撐物。

在生根培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件為：溫度為30℃，光照周期為12h/d，光照強度為2000～2200Lx。

經(jīng)計算，生根率為82％。