本發(fā)明屬于生物技術領域，具體地，涉及一種外生菌根真菌的栽培以及在野外植樹造林方法，更具體的，涉及紫花菌的菌種分離，菌根化苗合成以及野外植樹造林的技術問題。
背景技術：
目前，大多數(shù)菌根真菌都是采用室內無菌狀態(tài)下培育菌根苗，然后進行土壤栽培的方式，雞油菌(Cantharellus cibarius)、松乳菇(Lactarius delicious)，紅汁乳菇(Lactarius hatsutake)等都獲得了成功。紫花菌(Lactarius vividus)在我國中部以及南部廣泛分布且被人們大量食用，近年來由于天氣變暖,加之人類的活動，在城市周邊山林里,已很難發(fā)現(xiàn)紫花菌，產(chǎn)量下降的趨勢明顯，而且目前尚未有關于其人工仿生培育的報道，因此，紫花菌仿生栽培并和植樹造林相結合可以增加紫花菌的產(chǎn)量同時恢復植被，改善生態(tài)環(huán)境，也為當?shù)剞r戶創(chuàng)收。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種紫花菌仿生栽培方法，及其在植樹造林中的應用。目前尚未有關于其人工仿生培育的報道，本發(fā)明的紫花菌仿生栽培并和植樹造林相結合可以增加紫花菌的產(chǎn)量同時恢復植被，改善生態(tài)環(huán)境，并為當?shù)剞r戶創(chuàng)收。
為了實現(xiàn)本發(fā)明上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術方案：
一種紫花菌仿生栽培方法，該方法包括菌根化育苗、大田仿生栽培步驟。
根據(jù)所述的一種紫花菌仿生栽培方法，其中所述的菌根化育苗步驟包括下述步驟：
1)宿主植物幼苗的制備：選取紫花菌的宿主植物馬尾松種子，用自來水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分鐘進行表面消毒，無菌水沖洗三遍后播于裝有1:1的蛭石和珍珠巖的塑料筐內，在精控溫室條件為空氣溫度20-25℃、基質濕度60-70％下培養(yǎng)，無菌水澆灌，宿主植物基質中培育3個半月后，準備接種；所述育苗基質蛭石和珍珠巖先在121℃、0.1MPa中滅菌1h，滅菌結束放置3天后，在同樣條件中再次滅菌1次后使用；
2)紫花菌菌種的獲得：無菌條件下，取紫花菌菌蓋與菌柄交接處的菌肉組織，接種于MMN培養(yǎng)基上28℃避光培養(yǎng)，MMN培養(yǎng)基配方為：MgSO4.7H2O：1.5g/L，KH2PO4：3g/L，酵母浸膏：5g/L，葡萄糖：20g/L，VB1：0.01g/L，NaCl：0.058g/L，CaCl2：1.11g/L，檸檬酸鐵：1.5×10-2g/L，瓊脂：20g/L，培養(yǎng)20天后得到菌絲體。
3)紫花菌對宿主植物的侵染：將2)分離得到的紫花菌無污染菌絲體轉接至MMN液體培養(yǎng)基中，不含瓊脂，28℃靜置培養(yǎng)4周，無菌操作下分成1cm×1cm方塊，取出1)培育3個半月的宿主幼苗，剪去主根根尖，營養(yǎng)缽高14cm，底部長5cm×寬5cm，頂部為長6.5cm×寬6.5cm，將宿主幼苗放入缽內，加基質至根長1/3處，放入2)培養(yǎng)好的菌絲體，切成1cm×1cm方塊，每個營養(yǎng)缽放置4塊并靠近根部，然后繼續(xù)加基質至缽口2cm處，所加基質為滅菌的1:1的蛭石和珍珠巖，培養(yǎng)10-11個月，得到紫花菌侵染的植株。
根據(jù)所述的一種紫花菌仿生栽培方法，其中所述的宿主植物幼苗的制備步驟中，選取松科植物為紫花菌的宿主植物。
根據(jù)所述的一種紫花菌仿生栽培方法，其中所述的室外仿生栽培是指將培養(yǎng)12-18個月的紫花菌侵染的植株即菌根化樹苗移栽至自然土壤中，所述土壤為紅壤、黃壤、紫色土，土壤的酸堿度在5-6.5之間。
根據(jù)所述的一種紫花菌仿生栽培方法，其中所述的土壤為板巖發(fā)育土壤。
所述的一種紫花菌仿生栽培方法在植物樹造林中的應用，將培養(yǎng)12-18個月的紫花菌侵染的植株即菌根化樹苗移栽至自然土壤中，2-3年收獲紫花菌子實體，所述土壤為紅壤、黃壤、紫色土，土壤的酸堿度在5-6.5之間；所述的菌根化樹苗由下述方法而得：
1)制備宿主植物幼苗：選取紫花菌的宿主植物馬尾松種子，用自來水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分鐘進行表面消毒，無菌水沖洗三遍后播于裝有1:1的蛭石和珍珠巖的塑料筐內，在精控溫室條件為空氣溫度20-25℃、基質濕度60-70％下培養(yǎng)，無菌水澆灌，宿主植物基質中培育3個半月后，準備接種；所述育苗基質蛭石和珍珠巖先在121℃、0.1MPa中滅菌1h，滅菌結束放置3天后，在同樣條件中再次滅菌1次后使用；
2)紫花菌菌種的獲得：無菌條件下，取紫花菌菌蓋與菌柄交接處的菌肉組織，接種于MMN培養(yǎng)基上28℃避光培養(yǎng)，MMN培養(yǎng)基配方為：MgSO4.7H2O：1.5g/L，KH2PO4：3g/L，酵母浸膏：5g/L，葡萄糖：20g/L，VB1：0.01g/L，NaCl：0.058g/L，CaCl2：1.11g/L，檸檬酸鐵：1.5×10-2g/L，瓊脂：20g/L，培養(yǎng)20天后得菌絲體。
3)紫花菌對宿主植物的侵染：將2)分離得到的紫花菌無污染菌絲體轉接至MMN液體培養(yǎng)基中，不含瓊脂，28℃靜置培養(yǎng)4周，無菌操作下分成1cm×1cm方塊，取出1)培育3個半月的宿主幼苗，剪去主根根尖，營養(yǎng)缽高14cm，底部長5cm×寬5cm，頂部為長6.5cm×寬6.5cm，將宿主幼苗放入缽內，加基質至根長1/3處，放入培養(yǎng)好的菌絲體，切成1cm×1cm方塊，每個營養(yǎng)缽放置4塊并靠近根部，然后繼續(xù)加基質至缽口2cm處，所加基質為滅菌的1:1的蛭石和珍珠巖，培養(yǎng)10-11個月，得到紫花菌侵染的植株。
本發(fā)明提供了紫花菌的仿生栽培技術，且該技術與植樹造林相結合，不僅可以使紫花菌產(chǎn)量穩(wěn)定，而且有利于植被恢復，對自然環(huán)境友好，也為當?shù)剞r戶創(chuàng)收。
具體實施方式
下面用本發(fā)明的實施例來進一步說明本發(fā)明的實質性內容，便并不以此來限定本發(fā)明。
實施例1
紫花菌(Lactarius vividus)與馬尾松(Pinus massoniana)的仿生栽培及其在植樹造林中的應用。
紫花菌的子實體鑒別：菌蓋直徑3-10cm，年幼時內卷，很快中心凹陷甚至外翻；表面有輕微環(huán)狀斑紋，水浸狀，稍顯油狀，淡黃色，橙色，灰橙色，金黃色，褐黃色，年老時中心赭黃色混合淡灰綠色邊緣呈桔色，干燥時桔色混合淡藍綠色，局部有淡綠色斑紋；有些擔子果完全成熟時邊緣呈鋸齒狀，偶爾局部分裂。菌肉厚度為2-8mm，淡桔色或比菌蓋顏色淡，擦傷后不變色，年老后呈淡綠色。菌褶2-8mm寬，厚，年幼時排列較擁擠，隨時間逐漸變分離，直生到簡短的延生，亮桔色，金黃色，桔色，年老或擦傷時不變色也不褪色成暗綠色和綠色。菌柄3-4.5×0.8-2cm，等粗或向下漸漸變細；表面略呈水浸狀，極少凹陷，亮桔色到金黃色，幾乎與菌褶同色，局部色淡，頂部近白色或更淡，擦傷后不變綠色；底部有短小，淡橙色或淡綠色的硬毛。乳汁少，橙色到金黃色，2-10分鐘或干燥后慢慢的褪色至暗血紅色。孢子印為淡赭色。
1)馬尾松無菌幼苗的獲得：馬尾松種子用自來水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分鐘進行表面消毒，無菌水沖洗三遍后播于裝有1:1的蛭石和珍珠巖的塑料筐內，在精控溫室條件為空氣溫度20-25℃、基質濕度60-70％下培養(yǎng)，無菌水澆灌；育苗基質蛭石和珍珠巖需先在121℃、0.1MPa中滅菌1h，滅菌結束后放置3天后，在同樣條件中再次滅菌1次，宿主植物基質中培育3個半月后，準備接種；
2)紫花菌菌種的獲得：無菌條件下，取紫花菌菌蓋與菌柄交接處的菌肉組織，接種于MMN培養(yǎng)基上28℃避光培養(yǎng)，MMN培養(yǎng)基配方為：MgSO4.7H2O：1.5g，KH2PO4：3g，酵母浸膏：5g，葡萄糖：20g，VB1：0.01g，NaCl：0.058g，CaCl2：1.11g，檸檬酸鐵：1.5×10-2g，瓊脂：20g(1L)；20天后長出菌絲體。
3)接種：馬尾松苗培育6個月后，準備接種。接種前需要將幼苗主根根尖剪去1-2cm，以便于側根的生長以及侵染；紫花菌菌絲體平板長滿后，在無菌的條件下，用接種刀將菌絲體劃分成1cm×1cm大小的正方形備用，將宿主幼苗放入缽內，加基質至根長約1/3處，放入切割好的菌絲塊，每個營養(yǎng)缽放置4塊并靠近根部，然后繼續(xù)加基質至缽口2cm處，所加基質為滅菌的蛭石和珍珠巖，二者比例為1:1，培育10-11個月，即可得到紫花菌侵染的馬尾松；
4)野外移栽：將培育12-18個月的馬尾松幼苗移栽至適合馬尾松以及紫花菌生長的區(qū)域，土壤的酸堿度在5-6.5之間，板巖發(fā)育土壤最佳，在產(chǎn)菇期間，云貴地區(qū)為6月底至8月雨季期間，有大量的降水以及大幅度的降溫，此間最高氣溫低于20℃，最低氣溫在10℃以上，地溫在10-18℃左右，降雨平均每天到6-8mm，相對濕度達到80％。2-3年后，即可收獲紫花菌子實體。移栽五年后，32株松樹可產(chǎn)生569個紫花菌子實體(30kg)。
在野外移栽紫花菌菌根馬尾松苗，與非菌根化馬尾松苗相比，松苗成活率和增長率都得到提高，在林木種植園中栽培食用真菌代表了一種新型的農業(yè)生產(chǎn)活動，能夠滿足對美食漸增的需求和有利于維持自然生態(tài)系統(tǒng)，而又能提供額外的環(huán)境和社會經(jīng)濟利益。
實施例2
紫花菌(Lactarius vividus)與臺灣松(Pinus taiwannensis)的仿生栽培及其在植樹造林中的應用。
紫花菌的子實體鑒別：菌蓋直徑3-10cm，年幼時內卷，很快中心凹陷甚至外翻；表面有輕微環(huán)狀斑紋，水浸狀，稍顯油狀，淡黃色，橙色，灰橙色，金黃色，褐黃色，年老時中心赭黃色混合淡灰綠色邊緣呈桔色，干燥時桔色混合淡藍綠色，局部有淡綠色斑紋；有些擔子果完全成熟時邊緣呈鋸齒狀，偶爾局部分裂。菌肉厚度為2-8mm，淡桔色或比菌蓋顏色淡，擦傷后不變色，年老后呈淡綠色。菌褶2-8mm寬，厚，年幼時排列較擁擠，隨時間逐漸變分離，直生到簡短的延生，亮桔色，金黃色，桔色，年老或擦傷時不變色也不褪色成暗綠色和綠色。菌柄3-4.5×0.8-2cm，等粗或向下漸漸變細；表面略呈水浸狀，極少凹陷，亮桔色到金黃色，幾乎與菌褶同色，局部色淡，頂部近白色或更淡，擦傷后不變綠色；底部有短小，淡橙色或淡綠色的硬毛。乳汁少，橙色到金黃色，2-10分鐘或干燥后慢慢的褪色至暗血紅色。孢子印為淡赭色。
1)臺灣松種子用自來水清洗三遍后，用75％酒精浸泡30分鐘進行表面消毒，無菌水沖洗三遍后播于裝有1:1的蛭石和珍珠巖的塑料筐內，在精控溫室條件為空氣溫度20-25℃、基質濕度60-70％下培養(yǎng)，無菌水澆灌；育苗基質蛭石和珍珠巖需先在121℃、0.1MPa中滅菌1h，滅菌結束后放置3天后，在同樣條件中再次滅菌1次，宿主植物基質中培育3個半月后，準備接種；
2)紫花菌菌種的獲得：無菌條件下，取紫花菌菌蓋與菌柄交接處的菌肉組織，接種于MMN培養(yǎng)基上28℃避光培養(yǎng)，MMN培養(yǎng)基配方為：MgSO4.7H2O：1.5g，KH2PO4：3g，酵母浸膏：5g，葡萄糖：20g，VB1：0.01g，NaCl：0.058g，CaCl2：1.11g，檸檬酸鐵：1.5×10-2g，瓊脂：20g(1L)；
3)接種：臺灣松栽培3個半月后，準備接種。接種前需要將幼苗主根根尖剪去1-2cm，以便于側根的生長以及侵染；紫花菌菌絲體平板長滿后，在無菌的條件下，將用接種刀將菌絲體劃分成1cm×1cm大小的正方形備用，將宿主幼苗放入缽內，加基質至根長約1/3處，放入切割好的菌絲塊，每個營養(yǎng)缽放置4塊并靠近根部，然后繼續(xù)加基質至缽口2cm處，所加基質為滅菌的蛭石和珍珠巖，二者比例為1:1，培育10-11個月，即可得到紫花菌侵染的臺灣松幼苗；
4)野外移栽：將培育10-11個月的臺灣松幼苗移栽至合適臺灣松和紫花菌生長的區(qū)域，土壤的酸堿度在5-6.5之間，板巖發(fā)育土壤最佳，在產(chǎn)菇期間，云貴地區(qū)為6月底至8月雨季期間，有大量的降水以及大幅度的降溫，此間最高氣溫低于20℃，最低氣溫在10℃以上，地溫在10-18℃左右，降雨平均每天到6-8mm，相對濕度達到80％。2-3年后，即可收獲紫花菌子實體。2-3年后，即可收獲紫花菌子實體。移栽五年后，40棵松可收獲593個紫花菌子實體(30kg)。
野外移栽紫花菌菌根化臺灣松，不僅提高了松苗的成活率，還能夠收獲紫花菌子實體，在經(jīng)濟，生態(tài)上都收益。