本發(fā)明涉及到楠木繁育領(lǐng)域，尤其是一種楠木組培快繁方法。

背景技術(shù)：

楠木生長(zhǎng)在南方，以云南、貴州、四川、廣東、廣西、海南省為主，楠木高大、枝葉互不相礙，葉如桑葉，大如中耳，四季不凋，新舊相換，城市綠化首選樹(shù)。它的花呈黃色，實(shí)似丁香，青色，不可食用。樹(shù)干高的達(dá)十多丈，樹(shù)徑 粗，氣味芳香，木質(zhì)堅(jiān)硬耐水浸，是制作棟梁器物的上等好材料，這是城市綠化樹(shù)木的好品種。楠木性味辛，性溫，無(wú)毒。功能主治：霍亂吐下不止，煮汁服。枝可園功，治水腫，削楠木，桐木汁泡足。隨著市場(chǎng)的發(fā)展，對(duì)楠木良種壯苗的需求日益增加，因此，如何快速擴(kuò)繁楠木優(yōu)良基因型顯得十分必要。近年來(lái)，尤其是生物工程技術(shù)的快發(fā)展，組培快繁體系的建立，為林木的無(wú)性選育提供了一定的技術(shù)支撐。利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行珍稀瀕危物種及優(yōu)良品系樹(shù)種繁育，具有加速育種、縮短繁殖過(guò)程、節(jié)省空間、減少勞動(dòng)、周年生產(chǎn)等特點(diǎn)。而目前楠木主要采用扦插、嫁接和播種等傳統(tǒng)方式進(jìn)行育苗，存在育苗成本高，苗木長(zhǎng)勢(shì)不好、參差不齊、良種潛力未能得到充分發(fā)揮等缺點(diǎn)，使得目前楠木優(yōu)質(zhì)壯苗的供應(yīng)還無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求。為了滿足市場(chǎng)對(duì)楠木苗的巨大需求，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了楠木離體再植株，建立楠木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，不僅能有效地克服楠木傳統(tǒng)育苗中的一些缺缺陷，而且對(duì)繁育出的無(wú)性系苗木在保持母本的優(yōu)良性狀起到一定的作用，有利于楠木優(yōu)良無(wú)性系苗木的規(guī)?；a(chǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供出一種楠木組培快繁方法，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了楠木離體再植株，建立楠木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的，一種楠木組培快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）外植體采集及消毒：采取楠木樹(shù)樁基部形態(tài)表征一致的當(dāng)年生萌動(dòng)狀態(tài)的飽滿嫩枝作為外植體，在流水下沖洗 4h，浸泡于6%洗衣粉溶液13分鐘，用軟毛刷6%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 95min，用蒸餾水沖洗 6次，于超凈工作臺(tái)中以75%乙醇溶液浸泡62s，無(wú)菌水沖洗6次，再用含有0.06%吐溫-20的0.6%升汞溶液消毒16min，無(wú)菌水沖洗6次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用;

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約2cm的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng),接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2300lx，培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況;

（3）叢生芽增殖：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng),接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2300lx，培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)42天后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽數(shù);

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）增殖中獲得的植株從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根,接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為3200lx，置于培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后統(tǒng)計(jì)生根情況;

（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 6天后，打開(kāi)瓶蓋 4天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，在 1000 倍的生物菌劑中浸泡 15min，然后移栽至盛有所設(shè)計(jì)的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗,置于帶有遮陰網(wǎng)的自動(dòng)噴霧的塑料大棚內(nèi)保溫保濕溫度控制在 36℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右，避免陽(yáng)光直射，移栽32天后統(tǒng)計(jì)成活率。

步驟（2）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+1.1mg/L NAA+8.1mg/L 6-BA+3.1mg/L KT+1.6g/L AC+32g/L蔗糖+6.1g/L瓊脂，pH為5.9。

步驟（3）所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.6mg/L 2,4-D+6.0mg/L 6-BA+1.1mg/L NAA+1.6g/L AC+31g/L蔗糖+6.3g/L瓊脂，pH為5.9。

步驟（4）所述的生根培養(yǎng)基為：White+1.1mg/L NAA+3.1mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.1g/L瓊脂，pH為5.9。

步驟（5）所述的移栽培養(yǎng)基質(zhì)為由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基質(zhì)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：楠木為我國(guó)南方特有的主要造林樹(shù)種。近年來(lái)隨著集體林權(quán)制度改革的推進(jìn)和商品材價(jià)格的上漲，林農(nóng)經(jīng)營(yíng)楠木的積極性加大，楠木經(jīng)營(yíng)水平和良種意識(shí)的不斷提高，對(duì)楠木良種壯苗的需求日益增加。而目前楠木主要采用扦插、嫁接和播種等傳統(tǒng)方式進(jìn)行育苗，存在育苗成本高，苗木長(zhǎng)勢(shì)不好、參差不齊、良種潛力未能得到充分發(fā)揮等缺點(diǎn)，使得目前楠木優(yōu)質(zhì)壯苗的供應(yīng)還無(wú)法滿足市場(chǎng)的需求。為了滿足市場(chǎng)對(duì)楠木苗的巨大需求，本發(fā)明以優(yōu)良無(wú)性系嫩枝為外植體，通過(guò)外植體消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、叢生芽增殖、不定根發(fā)生、煉苗移栽等過(guò)程獲得了楠木離體再植株，建立楠木組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，可以保持楠木無(wú)性系母本的優(yōu)良性狀，有利于楠木優(yōu)良無(wú)性系苗木的規(guī)?；a(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

（1）外植體采集及消毒：采取楠木樹(shù)樁基部形態(tài)表征一致的當(dāng)年生萌動(dòng)狀態(tài)的飽滿嫩枝作為外植體，在流水下沖洗 2h，浸泡于4%洗衣粉溶液6min，用軟毛刷3%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 62min，用蒸餾水沖洗 4次，于超凈工作臺(tái)中以75%乙醇溶液浸泡21s，無(wú)菌水沖洗6次，再用含有0.02%吐溫-20的0.2%升汞溶液消毒6min，無(wú)菌水沖洗4次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約2cm的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為1600lx，置于培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后誘導(dǎo)率達(dá)100%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.3mg/L NAA+6.0mg/L 6-BA+1.6mg/L KT+1.0 g/L AC+26g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.6。

（3）叢生芽增殖：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為1600lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)43天后芽數(shù)10個(gè)以上。所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.3mg/L 2,4-D+3.8mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+1.5g/L AC+ 28g/L蔗糖+5.0g/L瓊脂，pH為5.6。

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）增殖中獲得的植株從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2100lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后生根達(dá)到96%以上。所述的生根培養(yǎng)基為：White+0.5mg/L NAA+1.8mg/LIBA+19g/L蔗糖+3.9g/L瓊脂，pH為5.6。

（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 5天后，打開(kāi)瓶蓋 3天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，在 1000 倍的生物菌劑中浸泡 6min，然后移栽至盛有所設(shè)計(jì)的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗。置于帶有遮陰網(wǎng)的自動(dòng)噴霧的塑料大棚內(nèi)保溫保濕溫度控制在 26℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右，避免陽(yáng)光直射，移栽32天后成活率達(dá)到93以上。所述的移栽培養(yǎng)基質(zhì)為由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基質(zhì)。

實(shí)施例2

（1）外植體采集及消毒：采取楠木樹(shù)樁基部形態(tài)表征一致的當(dāng)年生萌動(dòng)狀態(tài)的飽滿嫩枝作為外植體，在流水下沖洗 4h，浸泡于4%洗衣粉溶液9min，用軟毛刷4%洗衣粉溶液輕輕刷洗材料，再用自來(lái)水以滴水的形式?jīng)_洗 72min，用蒸餾水沖洗 5次，于超凈工作臺(tái)中以75%乙醇溶液浸泡32s，無(wú)菌水沖洗6次，再用含有0.02%吐溫-20的0.2%升汞溶液消毒8min，無(wú)菌水沖洗6次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分備用。

（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)：將經(jīng)步驟（1）處理后的嫩枝剪成約2.5cm的莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2300lx，培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后誘導(dǎo)率達(dá)98%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+0.5mg/LNAA+6.5mg/L6-BA+2.5mg/L KT+1.5g/LAC+33g/L蔗糖+6.0g/L瓊脂，pH為5.6。

（3）叢生芽增殖：將步驟（2）誘導(dǎo)培養(yǎng)得到叢生芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2600lx，培養(yǎng)溫度為24℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)42天后芽數(shù)10個(gè)以上。所述的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.3mg/L 2,4-D+3.8mg/L 6-BA+0.55mg/L NAA+1.25g/L AC+ 26g/L蔗糖+4.8g/L瓊脂，pH為5.6。

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）增殖中獲得的植株從基部切下并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2300lx，培養(yǎng)溫度為22℃，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)32天后生根達(dá)到96%以上。所述的生根培養(yǎng)基為：White+1.2mg/LNAA+2.2mg/LIBA+22g/L蔗糖+4.2g/L瓊脂，pH為5.6。

（5）煉苗移栽：將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下 5天后，打開(kāi)瓶蓋 4天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，在 1000 倍的生物菌劑中浸泡 8min，然后移栽至盛有所設(shè)計(jì)的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽1株生根苗。置于帶有遮陰網(wǎng)的自動(dòng)噴霧的塑料大棚內(nèi)保溫保濕溫度控制在 24℃，濕度應(yīng)保持在 75％左右，避免陽(yáng)光直射，移栽32天后成活率達(dá)到98以上。所述的移栽培養(yǎng)基質(zhì)為由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基質(zhì)。