本發(fā)明涉及羅漢果種植技術(shù)領(lǐng)域，具體來說，涉及一種促進羅漢果種子性別分化的處理方法。

背景技術(shù)：

羅漢果(Siraitiagrosvenorii(Swingle)C.Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang)屬于葫蘆科羅漢果屬藥食兩用植物，具有潤肺止咳、生津止渴的功效，適用于肺熱或肺燥咳嗽、百日咳及暑熱傷津口渴等，此外還有潤腸通便的功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，羅漢果對支氣管炎、高血壓等疾病有顯著療效，對冠心病、肥胖癥、血管硬化有一定的防治作用，其甜度是蔗糖的300倍，具有豐富的營養(yǎng)的價值。近年來對羅漢果的研究逐漸深入，在成分提取、藥理作用及栽培等成果顯著，但對誘導(dǎo)種子性別分化尚未見報道，由于羅漢果雌雄異株，自然情況下采用種子培育出的植株中有80％以上為雄性植株，眾所周知，雄性植株不會結(jié)果，要獲得雌性植株非常困難，大大提高了羅漢果雌性植株的培育成本，抑制著羅漢果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，對羅漢果雌性植株的培育的研究具有較大的經(jīng)濟價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明對羅漢果種子進行激素及機械損傷誘導(dǎo)在發(fā)芽過程中分化成為雌株，解決人工控制羅漢果性別分化，同時解決羅漢果雌株短缺問題，獲得高產(chǎn)大量雌株羅漢果脫毒種苗等。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題：

一種促進羅漢果種子性別分化的處理方法，包括以下步驟：

(1)清洗、消毒：先將羅漢果種子清洗之后，然后進行消毒；

(2)殺菌：將處理后的羅漢果種子進行殺菌；

(3)機械損傷：將殺菌處理后的羅漢果種子進行無菌處理，接著破除羅漢果種子表面的活性物質(zhì)，接著進行消毒、清洗后，用升汞溶液浸泡一段時間，接著將羅漢果種子進行清洗，接著從羅漢果種子中取出胚，待用；

(4)浸泡：將羅漢果種子的胚用GA溶液浸泡一段時間后取出；

(5)培養(yǎng)：將羅漢果種子的胚放入培養(yǎng)基中，在一定的溫度和光照條件下培養(yǎng)，即得羅漢果的雌性植株。

優(yōu)選地，所述步驟(1)中，是將采集回來的羅漢果去除果皮及果囊，取出種子用清水沖洗，再用酒精對羅漢果種子進行消毒處理，接著用無菌水沖洗，待用。

更優(yōu)選地，所述步驟(1)中，是將采集回來的羅漢果去除果皮及果囊，取出種子用清水沖洗1～2h，用濃度為75％的醫(yī)用酒精對種子進行消毒處理1～6min，用無菌水沖洗3～4次，待用。

優(yōu)選地，所述步驟(2)中，采用紫外燈對羅漢果種子殺菌20～40min。

優(yōu)選地，所述步驟(3)中，將殺菌處理后的羅漢果種子進行無菌處理，接著破除羅漢果種子表面的活性物質(zhì)，接著用酒精浸泡消毒1～3min，再用無菌水沖洗3～5次，接著用升汞溶液浸泡5～15min，將種子從升汞溶液中取出后用無菌水浸泡1～5min，接著沖洗3～4次，接著用鑷子和解剖刀從羅漢果種子中去除胚乳取出胚。

優(yōu)選地，所述升汞溶液的濃度為0.1～0.3％。

優(yōu)選地，所述步驟(4)中，采用GA溶液浸泡的時間為1～2h，將種子從溶液中取出后用無菌水沖洗2～3次。

優(yōu)選地，所述GA溶液的質(zhì)量濃度為10～20mg/L。

優(yōu)選地，所述步驟(5)中，培養(yǎng)溫度控制在25～35℃，光照條件 為2500～3000lx。

優(yōu)選地，所述基本培養(yǎng)基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及瓊脂混合后，調(diào)節(jié)pH值為5～7，再經(jīng)高壓滅菌制成。

優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

本發(fā)明的有益效果在于：

首先，本發(fā)明通過機械損傷處理能夠使羅漢果種子胚更好的吸收GA溶液，促進羅漢果種子胚誘導(dǎo)成雌性植株分化。

其次，本發(fā)明配制的培養(yǎng)基為種子在發(fā)芽過程中誘導(dǎo)分化成為雌性植株提供充足的營養(yǎng)和激素需求，誘導(dǎo)出穩(wěn)定的雌性植株。

再次，本發(fā)明的工藝能夠人為控制羅漢果性別分化，有效解決自然情況下難以獲得羅漢果雌性植株問題。

具體實施方式

為了方便本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的描述。實施例僅僅是對該發(fā)明的舉例說明，不是對本發(fā)明的限定，實施例中未作具體說明的步驟均是已有技術(shù)，在此不做詳細描述。

實施例一

一種促進羅漢果種子性別分化的處理方法，包括以下步驟：

(1)清洗、消毒：將采集回來的500個羅漢果去除果皮及果囊，取出種子用清水沖洗1h，將種子放入燒杯中，向燒杯中加入濃度為75％的醫(yī)用酒精對種子進行消毒處理，酒精的用量以淹沒所用燒杯中種子為宜，處理1min后，用無菌水沖洗3次，待用；

(2)殺菌：將處理后的羅漢果種子放入無菌燒杯中，再將燒杯放入超凈臺里，打開紫外燈殺菌處理20min；

(3)機械損傷：將殺菌處理后的羅漢果種子進行無菌處理，接 著破除羅漢果種子表面的活性物質(zhì)，將種子放入無菌燒杯中，接著用酒精浸泡消毒1min，酒精的用量以淹沒種子為宜，再用無菌水沖洗3次，接著用濃度為0.1％的升汞溶液浸泡5min，將種子從升汞溶液中取出后用無菌水浸泡1min，接著沖洗3次，接著用鑷子和解剖刀從羅漢果種子中去除胚乳取出胚，待用；

(4)浸泡：將羅漢果種子的胚用質(zhì)量濃度為10mg/L的GA溶液浸泡1h后取出，用無菌水沖洗2次，待用；

(5)培養(yǎng)：將羅漢果種子的胚放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度控制在25℃，光照條件為2500lx，培養(yǎng)1個月后，將培養(yǎng)出的幼苗進行性別鑒定，獲得的幼苗有86％以上為雌性(表1)。所述基本培養(yǎng)基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及瓊脂混合后，調(diào)節(jié)pH值為5，再經(jīng)高壓滅菌制成，制得的培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

表1

實施例二

一種促進羅漢果種子性別分化的處理方法，包括以下步驟：

(1)清洗、消毒：將采集回來的500個羅漢果去除果皮及果囊，取出種子用清水沖洗2h，將種子放入燒杯中，向燒杯中加入濃度為75％的醫(yī)用酒精對種子進行消毒處理，酒精的用量以淹沒所用燒杯中種子為宜，處理6min后，用無菌水沖洗5次，待用；

(2)殺菌：將處理后的羅漢果種子放入無菌燒杯中，再將燒杯放入超凈臺里，打開紫外燈殺菌處理40min；

(3)機械損傷：將殺菌處理后的羅漢果種子進行無菌處理，接著破除羅漢果種子表面的活性物質(zhì)，將種子放入無菌燒杯中，接著用酒精浸泡消毒3min，酒精的用量以淹沒種子為宜，再用無菌水沖洗4次，接著用濃度為0.3％的升汞溶液浸泡15min，將種子從升汞溶液中取出后用無菌水浸泡5min，接著沖洗4次，接著用鑷子和解剖刀從羅漢果種子中去除胚乳取出胚，待用；

(4)浸泡：將羅漢果種子的胚用質(zhì)量濃度為20mg/L的GA溶液浸泡2h后取出，用無菌水沖洗3次，待用；

(5)培養(yǎng)：將羅漢果種子的胚放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度控制在35℃，光照條件為3000lx，培養(yǎng)1個月后，將培養(yǎng)出的幼苗進行性別鑒定，獲得的幼苗有92％以上為雌性(表2)。所述基本培養(yǎng)基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及瓊脂混合后，調(diào)節(jié)pH值為7，再經(jīng)高壓滅菌制成，制得的培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

表2

實施例三

一種促進羅漢果種子性別分化的處理方法，包括以下步驟：

(1)清洗、消毒：將采集回來的500個羅漢果去除果皮及果囊，取出種子用清水沖洗1.5h，將種子放入燒杯中，向燒杯中加入濃度為75％的醫(yī)用酒精對種子進行消毒處理，酒精的用量以淹沒所用燒杯中種子為宜，處理3min后，用無菌水沖洗4次，待用；

(2)殺菌：將處理后的羅漢果種子放入無菌燒杯中，再將燒杯 放入超凈臺里，打開紫外燈殺菌處理30min；

(3)機械損傷：將殺菌處理后的羅漢果種子進行無菌處理，接著破除羅漢果種子表面的活性物質(zhì)，將種子放入無菌燒杯中，接著用酒精浸泡消毒3min，酒精的用量以淹沒種子為宜，再用無菌水沖洗4次，接著用濃度為0.2％的升汞溶液浸泡10min，將種子從升汞溶液中取出后用無菌水浸泡3min，接著沖洗3次，接著用鑷子和解剖刀從羅漢果種子中去除胚乳取出胚，待用；

(4)浸泡：將羅漢果種子的胚用質(zhì)量濃度為15mg/L的GA溶液浸泡1.5h后取出，用無菌水沖洗3次，待用；

(5)培養(yǎng)：將羅漢果種子的胚放入裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)溫度控制在30℃，光照條件為2800lx，培養(yǎng)1個月后，將培養(yǎng)出的幼苗進行性別鑒定，獲得的幼苗全部為雌性(表3)。所述基本培養(yǎng)基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及瓊脂混合后，調(diào)節(jié)pH值為6，再經(jīng)高壓滅菌制成，制得的培養(yǎng)基為MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L瓊脂。

表3