本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)作物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法。

背景技術(shù)：

肉蓯蓉作為中草藥在中國(guó)已有1800年的應(yīng)用歷史，是我國(guó)稀有的名貴中藥材，有“沙漠人參”之美譽(yù)，是補(bǔ)腎壯陽(yáng)的要藥。目前生藥市場(chǎng)上普遍使用的肉蓯蓉生藥有三種，分別為荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉和鹽生肉蓯蓉。肉蓯蓉是一種多年生的專(zhuān)一性根寄生植物，成熟肉蓯蓉種子的胚為球形原胚，發(fā)育簡(jiǎn)單，無(wú)胚根、胚芽和子葉的分化，在自然條件下萌發(fā)需經(jīng)歷一定時(shí)間的形態(tài)后熟與生理后熟期后，才能解除休眠。由于肉蓯蓉種子存在復(fù)雜的休眠特性和特殊的根專(zhuān)性寄生生物學(xué)特性，導(dǎo)致自然萌發(fā)困難、發(fā)芽率極低。目前，野生肉蓯蓉資源匱乏，特別是藥用效果最好的荒漠肉蓯蓉，野生荒漠肉蓯蓉和寄主梭梭均處于瀕危境地，現(xiàn)為國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物，被列入《中國(guó)植物紅皮書(shū)》。因此，人工栽培肉蓯蓉已經(jīng)成為我國(guó)西北地區(qū)發(fā)展經(jīng)濟(jì)作物，改善農(nóng)業(yè)種植結(jié)構(gòu)的重要途徑，將為當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶(hù)帶來(lái)可觀的經(jīng)濟(jì)效益。

雖然荒漠肉蓯蓉人工栽培面積在逐年擴(kuò)大，但荒漠肉蓯蓉種子價(jià)格昂貴，一公斤種子價(jià)格高達(dá)3萬(wàn)元左右，但由于荒漠肉蓯蓉種子萌發(fā)困難，市售的荒漠肉蓯蓉種子摻假現(xiàn)象嚴(yán)重。但是目前還沒(méi)有快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，常規(guī)發(fā)芽實(shí)驗(yàn)的方法并不適用于肉蓯蓉種子，因?yàn)槌Ｒ?guī)發(fā)芽方法處理下，肉蓯蓉種子發(fā)芽率較低，發(fā)芽時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不能快速準(zhǔn)確地得出肉蓯蓉種子的質(zhì)量數(shù)據(jù)，沒(méi)有數(shù)據(jù)支持的肉蓯蓉種子給農(nóng)戶(hù)帶來(lái)巨大的生產(chǎn)隱患。

近些年，國(guó)內(nèi)外的科研工作者針對(duì)打破肉蓯蓉種子休眠開(kāi)展了一些研究，采用的方法多種多樣，比如：歐陽(yáng)杰等采用50℃高溫預(yù)處理肉蓯蓉種子，誘導(dǎo)種子形成愈傷組織；牛東玲等通過(guò)溫水處理、變溫以及外源GA₃預(yù)處理，可以使肉蓯蓉種子萌發(fā)率達(dá)到16.7％；盛晉華等對(duì)肉蓯蓉種子經(jīng)過(guò)2～5℃低溫層積處理,發(fā)現(xiàn)種子內(nèi)源激素GA₃含量逐漸增加，ABA含量逐漸降低，最高發(fā)芽率17.8％；盛晉華研究發(fā)現(xiàn)氟啶酮能夠打破荒漠肉蓯蓉種子休眠，采用該法荒漠肉蓯蓉發(fā)芽率最高可達(dá)52.5％，發(fā)芽延續(xù)時(shí)間約30天左右。雖然這些方法在一定程度上打破了肉蓯蓉種子的休眠，但是發(fā)芽率依然偏低且不穩(wěn)定，而且發(fā)芽時(shí)間偏長(zhǎng)，就算在最理想狀態(tài)下，管花肉蓯蓉發(fā)芽率最高能達(dá)75％，荒漠肉蓯蓉發(fā)芽率最低，為16.7％-52.5％，直到30d才能統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率?，F(xiàn)有的方法不便于種子質(zhì)量檢驗(yàn)，嚴(yán)重影響肉蓯蓉種子市場(chǎng)流通，增加農(nóng)戶(hù)種植的風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提出一種高效快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，旨在為提出一種能夠顯著提高肉蓯蓉種子發(fā)芽率、縮短發(fā)芽時(shí)間、為肉蓯蓉種子質(zhì)量檢驗(yàn)和栽培提供技術(shù)支撐的檢驗(yàn)方法。

本發(fā)明提供的高效快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法，包括如下步驟：

1)溫水浸種：將肉蓯蓉種子首先在25-40℃溫水中浸泡3-5h；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在20-30℃條件下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡24-48h，然后蒸餾水沖洗干凈備用；

3)配制培養(yǎng)基：配制1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基或大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝至已滅菌的培養(yǎng)皿中備用；

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將步驟2)沖洗干凈的種子用消毒劑進(jìn)行消毒，并用無(wú)菌蒸餾水沖洗干凈；

5)種子置床：采用無(wú)菌操作技術(shù)將步驟4)消毒好的種子置于步驟3)已制備好的培養(yǎng)皿上，每個(gè)培養(yǎng)皿置30-80粒種子；

6)發(fā)芽：將步驟5)種子已置床的培養(yǎng)皿置于25℃進(jìn)行發(fā)芽。

進(jìn)一步，所述1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基的配制方法為，采用MS培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，將其中所有無(wú)機(jī)鹽的濃度都減半，配制出1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后加入占1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基重量3％的蔗糖，調(diào)整pH值為5.8，再加入占1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基。

進(jìn)一步，所述大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基包含的組分為KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄，其濃度分別為950mg/L、825mg/L、185mg/L、85mg/L，將上述四種組分按相應(yīng)濃度混合，調(diào)整pH值為5.8，加入占培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述溫水浸種步驟中，將肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h。

優(yōu)選地，所述氟啶酮處理步驟中，將肉蓯蓉種子于25℃條件下，在10mg/l氟啶酮溶液中浸泡36h，然后蒸餾水沖洗干凈備用。

優(yōu)選地，所述種子消毒步驟為在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用。

優(yōu)選地，所述種子置床步驟中，每個(gè)培養(yǎng)皿上置50粒種子。

優(yōu)選地，將種子已置床的培養(yǎng)皿置于25℃，黑暗條件下進(jìn)行發(fā)芽。

進(jìn)一步，所述肉蓯蓉種子為荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉任一種。

本發(fā)明的有益效果為：

1、提高發(fā)芽率，縮短發(fā)芽時(shí)間：資料研究表明，氟啶酮能夠打破肉蓯蓉種子休眠，但采用該法進(jìn)行種子發(fā)芽前需要先將種子根據(jù)直徑分級(jí)，選取直徑大于0.5mm的種子，然后將種子消毒后浸泡在氟啶酮溶液中進(jìn)行發(fā)芽，荒漠肉蓯蓉的種子發(fā)芽率最高為52.5％，發(fā)芽率偏低，30d統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，發(fā)芽時(shí)間太長(zhǎng)。本研究通過(guò)篩選適宜的氟啶酮濃度和處理時(shí)間，同時(shí)結(jié)合溫水浸種處理以及發(fā)芽培養(yǎng)基的優(yōu)化，結(jié)果表明，一定濃度的氟啶酮處理種子一段時(shí)間可有效打破荒漠肉蓯蓉種子休眠，但種子要萌發(fā)還需要一定的礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，在不提供營(yíng)養(yǎng)時(shí)，發(fā)芽率最高僅為16％，因此，一定濃度的礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)也是打破荒漠肉蓯蓉種子休眠的重要因素。本發(fā)明提供的方法提供了針對(duì)打破肉蓯蓉種子發(fā)芽休眠的專(zhuān)用培養(yǎng)基，該方法快速高效，14d時(shí)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率高達(dá)73％。采用本方法，14天時(shí)即可統(tǒng)計(jì)肉蓯蓉種子發(fā)芽率，比目前市場(chǎng)上最快速的檢驗(yàn)方法還快了16天。

2、為肉蓯蓉種子質(zhì)量檢驗(yàn)和育種提供技術(shù)支撐：目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有能14天就得出結(jié)果的快速高效的肉蓯蓉種子質(zhì)量檢驗(yàn)方法，本發(fā)明通過(guò)對(duì)肉蓯蓉種子的前處理方法、發(fā)芽條件的特殊設(shè)計(jì)，顯著的打破了肉蓯蓉種子的休眠，提高了肉蓯蓉種子的發(fā)芽率，縮短了發(fā)芽所需時(shí)間，該發(fā)明可為肉蓯蓉種子質(zhì)量檢驗(yàn)、組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)基因育種提供良好的技術(shù)平臺(tái)。

3、篩選出特定發(fā)芽培養(yǎng)基，沒(méi)有使用寄主引物即可誘導(dǎo)發(fā)芽。由于肉蓯蓉是根專(zhuān)性寄生植物，在誘導(dǎo)種子發(fā)芽時(shí)，現(xiàn)有技術(shù)有些采用添加專(zhuān)性寄主引物，例如管花肉蓯蓉使用紅柳提取物，荒漠肉蓯蓉使用梭梭提取物，但這些提取物是否起到實(shí)質(zhì)作用并未有權(quán)威證據(jù)。有些僅采用化學(xué)藥劑處理，但發(fā)芽率偏低。本發(fā)明創(chuàng)造性的使用了1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基和采用四種大量元素配制的大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基，配合整套種子前處理方法，并未使用專(zhuān)性寄主引物，使得荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率大幅提高至73％。研究中發(fā)現(xiàn)肉蓯蓉種子單純采用藥劑處理發(fā)芽率很低，只有配合使用一定濃度的四種大量元素，種子發(fā)芽率才能大幅提高。該技術(shù)方法不僅可為進(jìn)一步深入研究肉蓯蓉種子萌發(fā)機(jī)理提供線(xiàn)索，同時(shí)也可為其它寄生植物種子發(fā)芽提供一種新思路和新方法。

附圖說(shuō)明

圖1為肉蓯蓉種子發(fā)芽流程圖；

圖2為實(shí)施例1的荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽照片。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。如無(wú)特殊說(shuō)明，“％”為質(zhì)量百分比。

實(shí)施例1：一種高效快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率方法，具體步驟如下：

1)溫水浸種：將荒漠肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h，用濾紙吸干種子表面的水分；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在25℃下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡36h，然后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干種子表面水分備用；

3)配制培養(yǎng)基：配制大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基，包含組分為KNO₃、NH₄NO₃、MgSO₄·7H₂O和KH₂PO₄，其濃度分別為950mg/L、825mg/L、185mg/L、85mg/L，將上述四種組分按相應(yīng)濃度混合，調(diào)整pH值為5.8，加入占培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得大量元素專(zhuān)用培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝至已滅菌的培養(yǎng)皿中備用；

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的荒漠肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用；

5)種子置床：采用無(wú)菌操作技術(shù)將步驟4)消毒好的種子置于步驟3)已制備好的培養(yǎng)皿上，每個(gè)培養(yǎng)皿置50粒種子，種子之間間隔3mm左右，用石蠟封口膜封口；

6)發(fā)芽：將步驟5)種子已置床的培養(yǎng)皿置于25℃，黑暗條件下進(jìn)行發(fā)芽。

14天時(shí)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，發(fā)芽率達(dá)73％(見(jiàn)圖2)。

實(shí)施例2：檢測(cè)光照條件對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽的影響，具體步驟如下：

1)溫水浸種：將荒漠肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h，用濾紙吸干種子表面的水分；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在25℃下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡36h，然后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干種子表面水分備用；

3)配制培養(yǎng)基：配制1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基，采用MS培養(yǎng)基配方為基礎(chǔ)，將其中所有無(wú)機(jī)鹽的濃度都減半，配制出1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后加入占1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基重量3％的蔗糖，調(diào)整pH值為5.8，再加入占1/2MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基重量0.8％的瓊脂，攪拌均勻后高壓濕熱滅菌，獲得1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝至已滅菌的培養(yǎng)皿中備用；

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的荒漠肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用；

5)種子置床：采用無(wú)菌操作技術(shù)將步驟4)消毒好的種子置于步驟3)已制備好的培養(yǎng)皿上，每個(gè)培養(yǎng)皿置50粒種子，種子之間間隔3mm左右，用石蠟封口膜封口；

6)發(fā)芽：將步驟5)種子已置床的培養(yǎng)皿置于25℃，光照(1000lux)或黑暗條件下進(jìn)行發(fā)芽，20d統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。

光照條件下的荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率達(dá)53％，黑暗條件下荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率達(dá)51％，說(shuō)明荒漠肉蓯蓉種子屬于光不敏感種子，在光照和黑暗條件下都可以很好的發(fā)芽。

實(shí)施例3：檢測(cè)不同發(fā)芽床對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽的影響，步驟如下：

1)溫水浸種：將荒漠肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h，用濾紙吸干種子表面的水分；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在25℃下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡36h，然后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干種子表面水分備用；

3)發(fā)芽床的制備：1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基配制同實(shí)施例2；

A.紙床：以3層濾紙作發(fā)芽床，用蒸餾水完全潤(rùn)濕后備用；

B.脫脂棉：將脫脂棉鋪一薄層(3mm厚)于培養(yǎng)皿底部，壓平，用蒸餾水完全潤(rùn)濕后備用；

C.砂床：砂子直徑0.05～0.8mm，pH 6.0～7.5，洗凈后150℃消毒2h，無(wú)菌水拌成濕砂使用，手捏成團(tuán)，放手即散開(kāi))，在培養(yǎng)皿中鋪5mm厚的濕砂后，置床時(shí)將種子壓入砂內(nèi)即可。

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的荒漠肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用；

(5)種子置床：將消毒好的種子整齊的擺放在發(fā)芽床上，每個(gè)培養(yǎng)皿50粒，其中培養(yǎng)基發(fā)芽床采用無(wú)菌操作技術(shù)將種子置床，用石蠟封口膜封口。

(6)種子發(fā)芽條件：在20℃黑暗條件下進(jìn)行種子發(fā)芽。

20天統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，其中脫脂棉發(fā)芽床的發(fā)芽率為9％，砂床發(fā)芽床的發(fā)芽率為12％，紙床發(fā)芽床的發(fā)芽率為16％，培養(yǎng)基發(fā)芽床的發(fā)芽率為52.5％。由此看出，發(fā)芽床對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽至關(guān)重要，所有種子置床前先用溫水浸種，然后再用氟啶酮處理，但發(fā)芽床不同，種子發(fā)芽率差異顯著。用砂床、紙床和脫脂棉作發(fā)芽床，發(fā)芽率均很低，最高僅為16％，但以培養(yǎng)基作發(fā)芽床發(fā)芽率顯著升高，達(dá)到52.5％。由此可見(jiàn)，氟啶酮可以有效的打破沙漠肉蓯蓉種子休眠，但營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不可缺少，使用培養(yǎng)基可極大地促進(jìn)種子的萌發(fā)。

實(shí)施例4：檢測(cè)不同發(fā)芽溫度對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽的影響，步驟如下：

1)溫水浸種：將荒漠肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h，用濾紙吸干種子表面的水分；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在25℃下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡36h，然后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干種子表面水分備用；

3)培養(yǎng)基的制備：1/2MS(無(wú)機(jī)鹽減半)專(zhuān)用培養(yǎng)基配制同實(shí)施例2；

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的荒漠肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用；

5)種子置床：采用無(wú)菌操作技術(shù)將種子置于培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿50粒種子，種子之間間隔3mm左右，用石蠟封口膜封口。

6)種子發(fā)芽條件：將置床后的種子分別置于變溫(15℃～25℃)、15℃、20℃、25℃和30℃黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

20天統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，變溫(15℃～25℃)發(fā)芽率為15％，15℃發(fā)芽率為1％，20℃發(fā)芽率為53％，25℃發(fā)芽率為61.76％，30℃發(fā)芽率為48.33％。由此6可知，變溫和15℃低溫不利于荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽，隨著溫度的升高種子發(fā)芽率顯著升高，25℃發(fā)芽率最高，達(dá)61.76％，當(dāng)溫度升高到30℃發(fā)芽率降低為48.33％。因此，25℃是荒漠肉蓯蓉種子適宜的發(fā)芽溫度。

實(shí)施例5：檢測(cè)不同營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽的影響，步驟如下：

1)溫水浸種：將荒漠肉蓯蓉種子在30℃溫水中浸泡4h，用濾紙吸干種子表面的水分；

2)氟啶酮處理：將步驟1)所得肉蓯蓉種子在25℃下，用10mg/L氟啶酮溶液浸泡36h，然后蒸餾水沖洗2遍，用濾紙吸干種子表面水分備用；

3)不同營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的制備：1/2MS(無(wú)機(jī)鹽減半)專(zhuān)用培養(yǎng)基配制同實(shí)施例2；大量元素、鈣鹽、微量元素、鐵鹽、有機(jī)和蔗糖培養(yǎng)基，指的是培養(yǎng)基中分別只含有大量元素、鈣鹽、微量元素、鐵鹽、有機(jī)或蔗糖，其物質(zhì)含量同1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基，pH5.8，瓊脂0.8％。

4)種子消毒：在超凈工作臺(tái)上將經(jīng)氟啶酮處理并沖洗干凈的荒漠肉蓯蓉種子先用75％的乙醇漂洗10s，將乙醇傾倒干凈，然后倒入0.1％的HgCl₂浸泡2min，其間震蕩多次，將HgCl₂傾倒干凈，再用2％的NaClO浸泡5min，其間震蕩多次，將NaClO傾倒干凈，最后用無(wú)菌蒸餾水沖洗3次，將無(wú)菌蒸餾水傾倒干凈后備用；

5)種子置床：采用無(wú)菌操作技術(shù)將種子置于培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)皿50粒種子，種子之間間隔3mm左右，用石蠟封口膜封口。

6)種子發(fā)芽條件：在25℃黑暗條件下，進(jìn)行種子發(fā)芽。

14天統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率，培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分組成不同，荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率差異顯著，當(dāng)培養(yǎng)基中僅含有蔗糖、有機(jī)或微量元素時(shí)，各組發(fā)芽率均低于10％，與只含水的對(duì)照相比差異不顯著，因此，這幾種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽沒(méi)有促進(jìn)作用；當(dāng)培養(yǎng)基中僅含有鈣鹽和鐵鹽時(shí)，發(fā)芽率分別為17.5％和18.67％，較對(duì)照有所升高，但沒(méi)有進(jìn)步意義；當(dāng)培養(yǎng)基為1/2MS專(zhuān)用培養(yǎng)基和僅含大量元素的培養(yǎng)基作發(fā)芽床時(shí)發(fā)芽率顯著升高，分別為60.7％和73.1％。因此，促進(jìn)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要是大量元素。

經(jīng)過(guò)系列試驗(yàn)確定了實(shí)施例1所述高效快速檢驗(yàn)荒漠肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法為最優(yōu)操作方法。

本發(fā)明的研究結(jié)果可為肉蓯蓉人工栽培提供一定的理論依據(jù)和技術(shù)支撐，本發(fā)明的高效快速的肉蓯蓉種子發(fā)芽方法，可用于荒漠肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉的任一種。

以上對(duì)本發(fā)明所提供的一種高效快速檢驗(yàn)肉蓯蓉種子發(fā)芽率的方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹。本文通過(guò)具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的原理和實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。