本發(fā)明涉及殺蟲劑領(lǐng)域，特別涉及一種具有殺蟑作用的藜蘆提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：使用衛(wèi)生殺蟲劑進行蟑螂防治仍是目前市場上采用的主流方法，使用不同的劑型，不同的有效成分達到控制蟑螂的目的。我們常見的衛(wèi)生殺蟲劑劑型有膠餌、毒餌、懸浮劑、粉劑、乳劑，而大多數(shù)這些殺蟲劑的有效成分都是擬除蟲菊酯類，如溴氰菊酯、順勢氯氰菊酯和氯菊酯，膠餌則多以吡蟲啉、殘殺威、氟蟻腙為主。長期使用化學(xué)殺蟲劑會引起害蟲的抗藥性，同時化學(xué)殺蟲劑對人體及環(huán)境在一定程度上都有危害。根據(jù)市場發(fā)展行情來看，環(huán)境友好型，天然純植物性產(chǎn)品也越來越受歡迎，目前在市場上，植物源殺蟑比較空缺，這也是未來發(fā)展的主導(dǎo)方向。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明公開了一種具有殺蟑作用的藜蘆提取物及其制備方法，本發(fā)明還公開了種植物型殺蟑劑。本發(fā)明公開了一種具有殺蟑作用的藜蘆提取物，所述藜蘆提取物具有良好的殺蟑作用；所述藜蘆提取物的制備方法包括以下步驟：步驟1：取藜蘆的根和/或莖粉碎后，經(jīng)第一有機溶劑浸提、過濾，收集濾液調(diào)節(jié)pH值為2～3；步驟2：經(jīng)第二有機溶劑萃取后，收集水層調(diào)節(jié)pH值為8～10；步驟3：再經(jīng)第三有機溶劑萃取，收集有機溶劑層。優(yōu)選地，步驟1中所述第一有機溶劑為甲醇、乙醇、丙醇和乙二醇的一種或多種；步驟2中所述第二有機溶劑為乙酸乙酯；步驟3中所述第三有機溶劑為乙酸乙酯。優(yōu)選地，步驟1中所述浸提的次數(shù)為2次或3次。優(yōu)選地，步驟1中所述調(diào)節(jié)所用的酸堿調(diào)節(jié)劑為5％(v/v)的鹽酸。優(yōu)選地，步驟2中所述調(diào)節(jié)所用的酸堿調(diào)節(jié)劑為10％(v/v)的氨水。優(yōu)選地，步驟2或步驟3中所述萃取的次數(shù)為2或3次。優(yōu)選地，步驟3所述收集有機溶劑層之后還包括濃縮、干燥的步驟；所述干燥的溫度為50～60℃，所述干燥的時間為2～3h。本發(fā)明公開了所述藜蘆提取物在制備殺蟲劑中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述殺蟲劑為滅殺蟑螂制劑。本發(fā)明公開了一種藜蘆殺蟑劑，包括上述藜蘆提取物和可接受的助劑。優(yōu)選地，所述藜蘆提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5～15％。更優(yōu)選地，當(dāng)藜蘆提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5～3％時對成蟲具有最優(yōu)的殺蟑效果；當(dāng)藜蘆提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6～12％時對若蟲具有最優(yōu)的殺蟑效果。優(yōu)選地，所述助劑為二甲基亞砜。本發(fā)明公開的藜蘆提取物的制備方法能從藜蘆的根莖部位提取活性成份，實施例部分對藜蘆提取物進行殺蟑測試，測試結(jié)果顯示本發(fā)明公開的藜蘆提取物具有良好的殺蟑效果。實施例部分還使用所述藜蘆提取物分別對成蟲和若蟲進行了殺蟑測試，結(jié)果顯示本發(fā)明公開的藜蘆提取物對成蟲和若蟲均具有良好的殺蟑效果。乙酰膽堿酯酶是有機磷、氨基甲酸酯和擬除蟲菊酯類殺蟲劑的作用靶標(biāo)，也是蟑螂體內(nèi)重要的神經(jīng)介質(zhì)，當(dāng)神經(jīng)沖動沿軸突傳到突觸前膜時釋放乙酰膽堿，將神經(jīng)沖動傳遞下去，隨之乙酰膽堿脂酶將其分解。當(dāng)乙酰膽堿脂酶被抑制劑抑制時，乙酰膽堿脂酶失去活性，不能及時地將乙酰膽堿水解成膽堿和乙酸，造成乙酰膽堿的大量堆積，神經(jīng)沖動不能正常傳導(dǎo)而使神經(jīng)肌肉出現(xiàn)持續(xù)的興奮狀態(tài)，導(dǎo)致蟑螂死亡。本發(fā)明的實施例部分對所述藜蘆提取物進行了乙酰膽堿酯酶抑制試驗，結(jié)果顯示本發(fā)明公開的藜蘆提取物對乙酰膽堿酯酶具有很好的抑制效果。藜蘆提取物通過干擾膽堿脂酶的活性而引起神經(jīng)傳導(dǎo)發(fā)生障礙以達到殺蟲目的，最終阻斷突觸傳導(dǎo)。綜上所述，本發(fā)明公開的藜蘆提取物具有良好的殺蟑效果，對蟑螂的成蟲和若蟲均具有良好的殺蟑效果，且對乙酰膽堿酯酶具有良好的抑制作用。本發(fā)明公開的殺蟑劑為植物源殺蟑劑，對人體和環(huán)境無害。本發(fā)明公開的藜蘆提取物的制備方法簡單、成本低、利于推廣應(yīng)用。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發(fā)明實施例制備藜蘆提取物的流程圖；圖2為本發(fā)明實施例制備的藜蘆提取物對乙酰膽堿酯酶的半抑制時間的試驗結(jié)果圖。具體實施方式本發(fā)明公開了一種藜蘆提取物，所述藜蘆提取物具有良好的殺蟑作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。本實施例使用的原料和試劑均為自制或市售來源。實施例1制備藜蘆提取物稱取藜蘆根莖1kg，粉粹后加入5L甲醇浸提3次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無甲醇；加入體積分?jǐn)?shù)為5％的稀鹽酸水，調(diào)pH至2；用等體積的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯后水層用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)pH至10；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)3次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，55℃干燥3h后稱重得藜蘆總生物堿35g。制備流程如圖1所示。實施例2制備藜蘆提取物稱取藜蘆根莖1kg，粉粹后加入5L甲醇浸提2次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無甲醇；加入體積分?jǐn)?shù)為5％的稀鹽酸水，調(diào)pH至3；用等體積的乙酸乙酯萃取2次，回收乙酸乙酯后水層用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)pH至8；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)3次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，60℃干燥2h后稱重得藜蘆總生物堿35g。制備流程如圖1所示。實施例3制備藜蘆提取物稱取干燥的藜蘆根4kg，粉碎后用15L丙醇浸提3次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無丙醇；將濃縮液用水?dāng)U容至1L后用體積分?jǐn)?shù)為1％的鹽酸將pH調(diào)至3；用等體積的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯后用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水將水層的pH調(diào)至9；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)2次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，50℃干燥2h后稱重得藜蘆總生物堿為69g。制備流程如圖1所示。實施例4制備藜蘆提取物稱取藜蘆根莖1kg，粉粹后加入5L乙醇浸提3次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無乙醇；加入體積分?jǐn)?shù)為5％的稀鹽酸水，調(diào)pH至2；用等體積的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯后水層用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)pH至9；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)3次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，55℃干燥2h后稱重得藜蘆總生物堿35g。制備流程如圖1所示。實施例5制備藜蘆提取物稱取藜蘆根莖1kg，粉粹后加入5L乙二醇浸提2次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無乙二醇；加入體積分?jǐn)?shù)為5％的稀鹽酸水，調(diào)pH至2；用等體積的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯后水層用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)pH至9；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)3次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，55℃干燥2h后稱重得藜蘆總生物堿35g。制備流程如圖1所示。實施例6制備藜蘆提取物稱取藜蘆根莖1kg，粉粹后加入2L丙醇和3L乙二醇浸提3次，過濾后減壓濃縮溶劑，蒸至無醇類溶劑；加入體積分?jǐn)?shù)為5％的稀鹽酸水，調(diào)pH至2；用等體積的乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯后水層用體積分?jǐn)?shù)為10％的氨水調(diào)pH至9；上述乙酸乙酯的萃取步驟重復(fù)3次，萃取完成后減壓濃縮乙酸乙酯層，55℃干燥2h后稱重得藜蘆總生物堿35g。制備流程如圖1所示。實施例7殺蟑測試1試驗方法依據(jù)國標(biāo)GB/T26352-2010，選用點滴法進行測試，試蟲為德國小蠊。將實施例1制備的藜蘆提取物用二甲基亞砜(DMSO)進行溶解配制成藜蘆殺蟑劑，并使殺蟑劑中藜蘆提取物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.5％、5％和15％。試蟲用乙醚麻醉，用微量點滴器將1微升殺蟲劑藥液點滴于雄性成蟲第2、3對足基節(jié)間的胸部腹板上，以點滴等量的二甲基亞砜溶劑為對照組。試驗重復(fù)3次，將處理后的試蟲轉(zhuǎn)入清潔容器內(nèi)，供給水和食物。24h后記錄死亡數(shù)。試蟲死亡的判定方法：試蟲不能正常爬行或完全不動視為死亡。點滴法結(jié)果以死亡率表述，計算方法見以下公式：M＝Nm/N×100％式中：M—死亡率；Nm—死亡蟲數(shù)；N—試蟲數(shù)。死亡率結(jié)果統(tǒng)計如表1所示：表1死亡率結(jié)果試驗結(jié)果表明，濃度0.5％的藜蘆提取物有80％的殺蟑效果，5％的藜蘆提取物有著85.71％較好的殺蟑效果，15％的藜蘆提取物達到100％的殺蟑效果，溶劑二甲基亞砜對試蟲沒有滅殺效果，說明實施例1制備的藜蘆提取物具有良好的殺蟑效果。用實施例2至6制備的藜蘆提取物重復(fù)上述試驗，得到同樣的結(jié)論。實施例8殺蟑測試2本實施例將試蟲分為兩組，每組20只，其中一組為雄性成蟲，另一組為四齡若蟲。試蟲用乙醚進行麻醉。將實施例1制備的藜蘆提取物用二甲基亞砜溶解，配制不同濃度的藜蘆殺蟑劑，用微量點滴器點滴于試蟲的腹部。其中，點滴雄性成蟲的藜蘆殺蟑劑中的藜蘆提取物的濃度梯度為0.375％、0.75％、1.5％和3％，點滴四齡若蟲的藜蘆殺蟑劑中的藜蘆提取物的濃度梯度為1.5％、3％、6％和12％。點滴量為1ul。另分別設(shè)置雄性成蟲和四齡若蟲的對照組，每組同樣20只試蟲，點滴等量的二甲基亞砜溶劑。將處理后的試蟲轉(zhuǎn)入200ml的玻璃瓶中，使溫度維持在26±1℃，濕度保持在75±10％RH，同時供給水和食物。24小時和48小時后測定試蟲的死亡率，用Abbott公式進行校正。試驗結(jié)果如表2所示：表2成蟲和四齡若蟲死亡率結(jié)果同一列中不同的上標(biāo)說明有顯著性差異(P<0.05)。試驗結(jié)果顯示，實施例1制備的藜蘆提取物對成蟲和幼蟲均有良好的滅殺作用，用實施例2至6制備的藜蘆提取物重復(fù)上述試驗，得到同樣的結(jié)論。實施例9乙酰膽堿酯酶試驗取10只蟑螂雄性成蟲和10只蟑螂四齡若蟲，分別用預(yù)冷的20mM磷酸鹽緩沖液(pH7，含有0.5％的TritonX-100)使用玻璃組織勻漿機在冰浴條件下勻漿，制成勻漿液，勻漿液在4℃、12000g條件下離心15分鐘，取上清液即為雄性成蟲和四齡若蟲的乙酰膽堿酯酶粗酶提取液。測定半抑制濃度(IC50)：分別往100μl雄性成蟲和四齡若蟲的粗酶提取液加入6個濃度的實施例1制備的藜蘆提取液100μl，濃度依次為0.375mg/ml、0.75mg/ml、1.5mg/ml、3mg/ml、6mg/ml和12mg/ml。在25℃預(yù)孵育5min后加入1.3ml20mM的Ellman溶液(含1mM碘化硫代乙酰膽堿、5’-5’-二硫基(2-硝基苯甲酸)和0.45mMNaHCO3)，25℃孵育20min，用100μl10mM絲氨酸終止反應(yīng)，在412nm下檢測其吸光值，試驗重復(fù)5次。試驗結(jié)果如表3所示：表3半抑制濃度年齡半抑制濃度IC50(mg/ml)(±SD)95％置信度斜率(±SD)成蟲5.68±0.47a4.22-8.061.04±0.13四齡若蟲3.86±0.49b2.36-6.891.25±0.07試驗結(jié)果顯示，實施例1制備的藜蘆提取物能有效抑制乙酰膽堿酯酶，對成蟲的半抑制濃度為5.68mg/ml，對四齡若蟲的半抑制濃度為3.86mg/ml。測定半抑制時間(IT50)：分別取100μl雄性成蟲和四齡若蟲的乙酰膽堿酯酶粗酶提取液，分別加入100μl實施1制備的藜蘆提取液(濃度為1mg/ml)，并在25℃預(yù)孵育6個不同的時間段(0.5min、1min、5min、10min、15min和20min)。預(yù)孵育完后加入1.3ml20mM的Ellman溶液(含1mM碘化硫代乙酰膽堿、5’-5’-二硫基(2-硝基苯甲酸)和0.45mMNaHCO3)，25℃孵育20min，用100μl10mM絲氨酸終止反應(yīng)，在412nm下檢測其吸光值，試驗重復(fù)5次。試驗結(jié)果如表4和圖2所示，圖2的橫坐標(biāo)為抑制時間(Inhibitiontime(min))，圖2的縱坐標(biāo)為剩余活性(Residualactivity(％))，圖例分別為成蟲(Adult)和幼蟲(nymph)。試驗結(jié)果顯示，實施例1制備的藜蘆提取物對乙酰膽堿酯酶的抑制效果與抑制時間成正比，當(dāng)藜蘆提取物的濃度為1mg/ml時，對四齡若蟲和成蟲的半抑制時間分別為16.75min和8.34min，幼蟲對藜蘆提取物比成蟲要敏感。表4乙酰膽堿酯酶抑制試驗結(jié)果用實施例2至6制備的藜蘆提取物重復(fù)上述試驗，得到同樣的結(jié)論。以上實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細(xì)的介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的原理及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想，包括最佳方式，并且也使得本領(lǐng)域的任何技術(shù)人員都能夠?qū)嵺`本發(fā)明，包括制造和使用任何裝置或系統(tǒng)，和實施任何結(jié)合的方法。應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3