本發(fā)明涉及一種種子萌發(fā)及育苗的方法領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法。
背景技術(shù)：
馬尾松是我國(guó)南方最重要的荒山綠化造林樹(shù)種之一，在我國(guó)分布范圍極為廣闊。其經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，用途廣，是工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的重要用材，不僅可用來(lái)生產(chǎn)三板、造紙及化纖工業(yè)制造，還可用來(lái)生產(chǎn)松香、松節(jié)油等工業(yè)原料。木材極耐水濕，有“水中千年松”之說(shuō)，特別適用于水下工程。馬尾松研究從上世紀(jì)80年代開(kāi)始，經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展，選育了大量的優(yōu)良無(wú)性系，并通過(guò)建立馬尾松初級(jí)種子園，生產(chǎn)了大量馬尾松良種。但是完成建園時(shí)間要2～4年時(shí)間，林地管理要2年時(shí)間，成本高。而通過(guò)嫁接苗的方法直接上山種植，一定程度能降低成本，但成活率低，達(dá)50％以上，給建園帶來(lái)很大困難。
馬尾松的無(wú)性繁殖難度較大，其中組織培養(yǎng)更加困難。但由于植物的組織培養(yǎng)具有繁殖系數(shù)大、苗木生長(zhǎng)整齊等優(yōu)點(diǎn)，攻克其組織培養(yǎng)技術(shù)意義重大。傳統(tǒng)的無(wú)菌培養(yǎng)多采用瓊脂粉(條)培養(yǎng)基，需要經(jīng)過(guò)瓊脂粉(條)加熱溶解、殺菌和冷卻凝結(jié)三個(gè)步驟，操作較為繁瑣；另外，無(wú)菌培養(yǎng)由于存在種子發(fā)芽率和污染等多種問(wèn)題，無(wú)菌苗的成苗率在20％以下，使80％以上的培養(yǎng)基成為廢棄物難以回收再利用而造成浪費(fèi)。
馬尾松是組織培養(yǎng)生根較為困難的樹(shù)種。以初代培養(yǎng)的馬尾松叢生芽生根生根率較為理想，但經(jīng)繼代培養(yǎng)后，其生根率明顯下降。吳小芹等(2009)和季孔庶等(2010)將經(jīng)過(guò)叢芽誘導(dǎo)和伸長(zhǎng)的初代培養(yǎng)后單芽直接進(jìn)行生根，其生根率分別為85％和92.5％；而薛鷹(2006)在經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)以后取單芽生根，其生根率僅為26.7％。要實(shí)現(xiàn)馬尾松組培苗工廠化生產(chǎn)，必須突破繼代芽生根困難瓶頸因素。
如何快速、低成本、高成活率地獲得馬尾松造林育苗是當(dāng)前亟待解決的重要問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種操作簡(jiǎn)便、成本低廉和成活率高的快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，為其荒山綠化造林提供良好的技術(shù)基礎(chǔ)。
為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種快速獲取馬尾松無(wú)繁性殖造林育苗的方法，包括以下步驟：
1)種子萌發(fā)
A、制作棉花培養(yǎng)基
將棉花用清水洗凈，擰干后放置于溶液a中浸泡30min，其中所述溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，然后將浸泡好的棉花放入培養(yǎng)瓶中，并將培養(yǎng)瓶置于冰箱中冰凍30min；再將無(wú)紡布洗凈，并浸泡于水中，10min后將無(wú)紡布覆蓋在培養(yǎng)瓶中棉花的上表面，擰緊瓶蓋，放入滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌條件為115℃，30min，備用，其中，所述無(wú)紡布上設(shè)置有彼此均勻間隔的孔徑為1cm的圓孔，相鄰兩個(gè)圓孔間距為0.4cm；
B、消毒處理
首先將馬尾松種子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4％的硫酸銅溶液中，超聲波處理；然后依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％酒精淋洗1min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％HgCl2溶液淋洗10min；最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水沖洗干凈，備用；
在培養(yǎng)室中將消毒處理好的馬尾松種子接種到棉花培養(yǎng)基中，每個(gè)無(wú)紡布的圓孔接種1粒種子，進(jìn)行種子萌發(fā)，得到馬尾松無(wú)菌芽Z；
2)切下長(zhǎng)度為4～6cm的馬尾松無(wú)菌芽Z的頂芽，作為外植體，置于培養(yǎng)基b中進(jìn)行培養(yǎng)，得到馬尾松叢生芽；其中所述培養(yǎng)基b由每1LMS培養(yǎng)基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g馬鈴薯和20g蔗糖混合而成；
3)切下伸長(zhǎng)至4～6cm長(zhǎng)的馬尾松叢生芽的頂芽或者嫩莖，種植于培養(yǎng)基c中進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)后，得伸長(zhǎng)芽；切下長(zhǎng)度4～6cm的伸長(zhǎng)芽的頂芽或者嫩莖接種到培養(yǎng)基d中進(jìn)行增殖，獲得繼代芽；
其中所述培養(yǎng)基c由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg瓊脂混合而成；所述培養(yǎng)基d由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g瓊脂混合而成；
4)切下生長(zhǎng)健壯、高3～4cm的繼代芽，用液體培養(yǎng)基e浸泡25～35min，取出后用液體培養(yǎng)基f浸泡15～25min，移植于育苗器中，熒光照射處理，獲得馬尾松無(wú)性繁殖苗；
其中所述液體培養(yǎng)基e由每1LDCR培養(yǎng)基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液體培養(yǎng)基f由每1LGD培養(yǎng)基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；
其中所述熒光照射具體為：①將熒光粉裝入透明塑料袋中，裝滿(mǎn)整個(gè)塑料袋，并封口；其中塑料袋為長(zhǎng)5～10cm，寬2～4cm的長(zhǎng)方形結(jié)構(gòu)；②將塑料袋黏貼在育苗器外側(cè)，塑料袋下邊緣與育苗器內(nèi)生根基質(zhì)上表面邊緣齊平；
5)移栽苗圃：將生長(zhǎng)良好的馬尾松無(wú)性繁殖苗移栽到苗圃。
優(yōu)選的是，所述快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，步驟(1)中所述溶液a的配置方法：首先將蔗糖與水先溶解均勻，再加入魔芋粉，待魔芋粉吸水膨脹完全。
優(yōu)選的是，所述快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，步驟(1)中所述棉花平鋪在培養(yǎng)瓶的瓶底，厚度為1.8～3.0cm。
優(yōu)選的是，所述快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，步驟(1)中所述超聲波處理的方法為：先用頻率為40KHz超聲波處理20min，靜置10min，再用頻率為80KHz超聲波處理20min，靜置10min，最后用頻率為40KHz超聲波處理20min。
優(yōu)選的是，所述快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，步驟(3)中所述培養(yǎng)基c和培養(yǎng)基d中的熒光粉是在其它原料混合均勻后，最后加入熒光粉。
優(yōu)選的是，所述快速獲取馬尾松無(wú)性繁殖造林育苗的方法，步驟(4)中所述育苗器中裝有固體培養(yǎng)基，所述固體培養(yǎng)基包括河沙、蛭石、苔蘚和紅土以5:2:1:2的比例混合均勻后裝填于育苗器中；在所述育苗器的培養(yǎng)基中淋入100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的Ca(H2PO4)2溶液和100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的尿素溶液。
本發(fā)明至少包括以下有益效果：
第一，針對(duì)目前無(wú)菌苗培養(yǎng)采用瓊脂作為培養(yǎng)基存在的問(wèn)題，本發(fā)明采用具有良好吸水和保水性能的棉花，輔于具有強(qiáng)吸水性，吸水后體積可膨脹80～100倍的魔芋粉，利用用冰箱冰凍技術(shù)和無(wú)紡布對(duì)其外形進(jìn)行固定，消毒后的馬尾松種子放入棉花培養(yǎng)基中培養(yǎng)即可獲得生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，無(wú)菌苗成苗率在30～45％，同時(shí)可簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，提高培養(yǎng)效率，且棉花和無(wú)紡布可重復(fù)利用，可降低成本又保護(hù)環(huán)境。
第二，將種子放入0.4％的硫酸銅溶液中，利用超聲波使硫酸銅溶液內(nèi)部振動(dòng)，促進(jìn)其硫酸銅溶液的殺菌作用，同是可解除種子的休眠，促進(jìn)了種子的萌發(fā)，8～18d可獲得生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗。
第三，利用馬鈴薯自身營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)優(yōu)勢(shì)與6-BA和NAA聯(lián)合作用促進(jìn)誘導(dǎo)愈傷組織和叢生芽的形成。
第四，利用熒光粉可吸收儲(chǔ)存光能，并在黑暗條件下緩慢釋放弱光的性能，配合2，4-D、6-BA、KT和NAA的聯(lián)合作用，使繼代芽的伸長(zhǎng)更加均衡，叢生芽繼代培養(yǎng)5代，平均增殖系數(shù)7.2。
第五、利用IBA、NAA、ABT6和滑石粉，促進(jìn)繼代芽不定根的表達(dá)和伸長(zhǎng)，根系多而粗壯，利用熒光粉可吸收儲(chǔ)存光能，并在黑暗條件下緩慢釋放弱光的性能，促進(jìn)馬尾松無(wú)性繁殖育苗的生長(zhǎng)，生根率達(dá)95％以上。
本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù)以實(shí)施。
需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。
實(shí)施例1：
1)種子萌發(fā)
A、制作棉花培養(yǎng)基
將棉花用清水洗凈，擰干后放置于溶液a中浸泡30min，然后將浸泡好的棉花鋪在培養(yǎng)瓶的瓶底，厚度為1.8cm，并將培養(yǎng)瓶置于冰箱中冰凍30min；再將無(wú)紡布洗凈，并浸泡于水中，10min后將無(wú)紡布覆蓋在培養(yǎng)瓶中棉花的上表面，擰緊瓶蓋，放入滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌條件為115℃，30min，備用；
其中，所述無(wú)紡布上設(shè)置有彼此均勻間隔的孔徑為1cm的圓孔，相鄰兩個(gè)圓孔間距為0.4cm；
其中所述溶液a的配置方法：溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，首先將蔗糖與水先溶解均勻，再加入魔芋粉，待魔芋粉吸水膨脹完全；
B、消毒處理
首先將馬尾松種子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4％的硫酸銅溶液中，超聲波處理；然后依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％酒精淋洗1min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％HgCl2溶液淋洗10min；最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水沖洗干凈，備用；
其中所述超聲波處理的方法為：先用頻率為40KHz超聲波處理20min，靜置10min，再用頻率為80KHz超聲波處理20min，靜置10min，最后用頻率為40KHz超聲波處理20min；
在培養(yǎng)室中將消毒處理好的馬尾松種子接種到棉花培養(yǎng)基中，每個(gè)無(wú)紡布的圓孔接種1粒種子，進(jìn)行種子萌發(fā)，培養(yǎng)18d后，得到馬尾松無(wú)菌芽Z，萌發(fā)成苗率為40％；
2)切下長(zhǎng)度為4cm的馬尾松無(wú)菌芽Z的頂芽，作為外植體，置于培養(yǎng)基b中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)25d后，得到馬尾松叢生芽；其中所述培養(yǎng)基b由每1LMS培養(yǎng)基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g馬鈴薯和20g蔗糖混合而成；
3)切下伸長(zhǎng)至5cm長(zhǎng)的馬尾松叢生芽的頂芽或者嫩莖，種植于培養(yǎng)基c中進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)后，培養(yǎng)24d后得伸長(zhǎng)芽；切下長(zhǎng)度5cm的伸長(zhǎng)芽的頂芽或者嫩莖接種到培養(yǎng)基d中進(jìn)行增殖，培養(yǎng)24d后獲得繼代芽，繼代培養(yǎng)繁殖5代，平均增殖系數(shù)為7.0；
其中所述培養(yǎng)基c由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg瓊脂混合而成；所述培養(yǎng)基d由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g瓊脂混合而成；熒光粉是在其它原料混合均勻后，最后加入；
4)切下生長(zhǎng)健壯、高3cm的繼代芽，用液體培養(yǎng)基e浸泡25min，取出后用液體培養(yǎng)基f浸泡15min，移植于育苗器中，熒光照射處理，培養(yǎng)24d后，獲得馬尾松無(wú)性繁殖苗，生根率為96％；
其中所述液體培養(yǎng)基e由每1LDCR培養(yǎng)基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液體培養(yǎng)基f由每1LGD培養(yǎng)基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；
其中育苗器中裝有固體培養(yǎng)基，所述固體培養(yǎng)基包括河沙、蛭石、苔蘚和紅土以5:2:1:2的比例混合均勻后裝填于育苗器中；再在育苗器的培養(yǎng)基中淋入100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的Ca(H2PO4)2溶液和100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的尿素溶液。
其中所述熒光照射具體為：①將熒光粉裝入透明塑料袋中，裝滿(mǎn)整個(gè)塑料袋，并封口；其中塑料袋為長(zhǎng)5cm，寬2cm的長(zhǎng)方形結(jié)構(gòu)；②將塑料袋黏貼在育苗器外側(cè)，塑料袋下邊緣與育苗器內(nèi)生根基質(zhì)上表面邊緣齊平；
5)移栽苗圃：將生長(zhǎng)良好的馬尾松無(wú)性繁殖苗移栽到苗圃。
實(shí)施例2：
1)種子萌發(fā)
A、制作棉花培養(yǎng)基
將棉花用清水洗凈，擰干后放置于溶液a中浸泡30min，然后將浸泡好的棉花鋪在培養(yǎng)瓶的瓶底，厚度為3cm，并將培養(yǎng)瓶置于冰箱中冰凍30min；再將無(wú)紡布洗凈，并浸泡于水中，10min后將無(wú)紡布覆蓋在培養(yǎng)瓶中棉花的上表面，擰緊瓶蓋，放入滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌條件為115℃，30min，備用；
其中，所述無(wú)紡布上設(shè)置有彼此均勻間隔的孔徑為1cm的圓孔，相鄰兩個(gè)圓孔間距為0.4cm；
其中所述溶液a的配置方法：溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，首先將蔗糖與水先溶解均勻，再加入魔芋粉，待魔芋粉吸水膨脹完全；
B、消毒處理
首先將馬尾松種子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4％的硫酸銅溶液中，超聲波處理；然后依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％酒精淋洗1min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％HgCl2溶液淋洗10min；最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水沖洗干凈，備用；
其中所述超聲波處理的方法為：先用頻率為40KHz超聲波處理20min，靜置10min，再用頻率為80KHz超聲波處理20min，靜置10min，最后用頻率為40KHz超聲波處理20min；
在培養(yǎng)室中將消毒處理好的馬尾松種子接種到棉花培養(yǎng)基中，每個(gè)無(wú)紡布的圓孔接種1粒種子，進(jìn)行種子萌發(fā)，培養(yǎng)8d后，得到馬尾松無(wú)菌芽Z，萌發(fā)成苗率為45％；
2)切下長(zhǎng)度為5cm的馬尾松無(wú)菌芽Z的頂芽，作為外植體，置于培養(yǎng)基b中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)23d后，得到馬尾松叢生芽；其中所述培養(yǎng)基b由每1LMS培養(yǎng)基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g馬鈴薯和20g蔗糖混合而成；
3)切下伸長(zhǎng)至4cm長(zhǎng)的馬尾松叢生芽的頂芽或者嫩莖，種植于培養(yǎng)基c中進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)后，培養(yǎng)23d后得伸長(zhǎng)芽；切下長(zhǎng)度4cm的伸長(zhǎng)芽的頂芽或者嫩莖接種到培養(yǎng)基d中進(jìn)行增殖，培養(yǎng)22d后獲得繼代芽，繼代培養(yǎng)繁殖5代，平均增殖系數(shù)為7.5；
其中所述培養(yǎng)基c由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg瓊脂混合而成；所述培養(yǎng)基d由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g瓊脂混合而成；熒光粉是在其它原料混合均勻后，最后加入；
4)切下生長(zhǎng)健壯、高4cm的繼代芽，用液體培養(yǎng)基e浸泡35min，取出后用液體培養(yǎng)基f浸泡20min，移植于育苗器中，熒光照射處理，培養(yǎng)22d后，獲得馬尾松無(wú)性繁殖苗，生根率為98％；
其中所述液體培養(yǎng)基e由每1LDCR培養(yǎng)基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液體培養(yǎng)基f由每1LGD培養(yǎng)基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；
其中育苗器中裝有固體培養(yǎng)基，所述固體培養(yǎng)基包括河沙、蛭石、苔蘚和紅土以5:2:1:2的比例混合均勻后裝填于育苗器中；再在育苗器的培養(yǎng)基中淋入100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的Ca(H2PO4)2溶液和100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的尿素溶液。
其中所述熒光照射具體為：①將熒光粉裝入透明塑料袋中，裝滿(mǎn)整個(gè)塑料袋，并封口；其中塑料袋為長(zhǎng)6cm，寬3cm的長(zhǎng)方形結(jié)構(gòu)；②將塑料袋黏貼在育苗器外側(cè)，塑料袋下邊緣與育苗器內(nèi)生根基質(zhì)上表面邊緣齊平；
5)移栽苗圃：將生長(zhǎng)良好的馬尾松無(wú)性繁殖苗移栽到苗圃。
實(shí)施例3：
1)種子萌發(fā)
A、制作棉花培養(yǎng)基
將棉花用清水洗凈，擰干后放置于溶液a中浸泡30min，然后將浸泡好的棉花鋪在培養(yǎng)瓶的瓶底，厚度為3cm，并將培養(yǎng)瓶置于冰箱中冰凍30min；再將無(wú)紡布洗凈，并浸泡于水中，10min后將無(wú)紡布覆蓋在培養(yǎng)瓶中棉花的上表面，擰緊瓶蓋，放入滅菌鍋內(nèi)滅菌，滅菌條件為115℃，30min，備用；
其中，所述無(wú)紡布上設(shè)置有彼此均勻間隔的孔徑為1cm的圓孔，相鄰兩個(gè)圓孔間距為0.4cm；
其中所述溶液a的配置方法：溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，首先將蔗糖與水先溶解均勻，再加入魔芋粉，待魔芋粉吸水膨脹完全；
B、消毒處理
首先將馬尾松種子置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.4％的硫酸銅溶液中，超聲波處理；然后依次用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75％酒精淋洗1min，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％HgCl2溶液淋洗10min；最后用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水沖洗干凈，備用；
其中所述超聲波處理的方法為：先用頻率為40KHz超聲波處理20min，靜置10min，再用頻率為80KHz超聲波處理20min，靜置10min，最后用頻率為40KHz超聲波處理20min；
在培養(yǎng)室中將消毒處理好的馬尾松種子接種到棉花培養(yǎng)基中，每個(gè)無(wú)紡布的圓孔接種1粒種子，進(jìn)行種子萌發(fā)，培養(yǎng)15d后，得到馬尾松無(wú)菌芽Z萌發(fā)成苗率為30％；
2)切下長(zhǎng)度為6cm的馬尾松無(wú)菌芽Z的頂芽，作為外植體，置于培養(yǎng)基b中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)20d后，得到馬尾松叢生芽；其中所述培養(yǎng)基b由每1LMS培養(yǎng)基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g馬鈴薯和20g蔗糖混合而成；
3)切下伸長(zhǎng)至6cm長(zhǎng)的馬尾松叢生芽的頂芽或者嫩莖，種植于培養(yǎng)基c中進(jìn)行伸長(zhǎng)培養(yǎng)后，培養(yǎng)22d后得伸長(zhǎng)芽；切下長(zhǎng)度6cm的伸長(zhǎng)芽的頂芽或者嫩莖接種到培養(yǎng)基d中進(jìn)行增殖，培養(yǎng)20d后獲得繼代芽，直至得到繼代芽5，繼代培養(yǎng)繁殖5代，平均增殖系數(shù)為7.2；
其中所述培養(yǎng)基c由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg瓊脂混合而成；所述培養(yǎng)基d由每1LMS培養(yǎng)基中加入20mg熒光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g瓊脂混合而成；熒光粉是在其它原料混合均勻后，最后加入；
4)切下生長(zhǎng)健壯、高3.5cm的繼代芽，用液體培養(yǎng)基e浸泡25min，取出后用液體培養(yǎng)基f浸泡25min，移植于育苗器中，熒光照射處理，培養(yǎng)28d后，獲得馬尾松無(wú)性繁殖苗，生根率為95％；
其中所述液體培養(yǎng)基e由每1LDCR培養(yǎng)基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液體培養(yǎng)基f由每1LGD培養(yǎng)基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；
其中育苗器中裝有固體培養(yǎng)基，所述固體培養(yǎng)基包括河沙、蛭石、苔蘚和紅土以5:2:1:2的比例混合均勻后裝填于育苗器中；再在育苗器的培養(yǎng)基中淋入100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的Ca(H2PO4)2溶液和100g質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％的尿素溶液。
其中所述熒光照射具體為：①將熒光粉裝入透明塑料袋中，裝滿(mǎn)整個(gè)塑料袋，并封口；其中塑料袋為長(zhǎng)10cm，寬4cm的長(zhǎng)方形結(jié)構(gòu)；②將塑料袋黏貼在育苗器外側(cè)，塑料袋下邊緣與育苗器內(nèi)生根基質(zhì)上表面邊緣齊平；
5)移栽苗圃：將生長(zhǎng)良好的馬尾松無(wú)性繁殖苗移栽到苗圃。
盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書(shū)和實(shí)施方式中所列運(yùn)用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于特定的細(xì)節(jié)。