本發(fā)明涉及一種杉木種植
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種杉木莖連接處的明蘗組織培養(yǎng)繁殖方法。
背景技術(shù)：
：杉木，我國(guó)重要的用材林樹種，距史料記載，杉木栽培歷史已經(jīng)有100年有余，為我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出了突出的貢獻(xiàn)，其生長(zhǎng)快，材質(zhì)好，目前已被人工大量培育，目前，較為成熟的杉木快速繁殖方式較多，主要包括有性繁殖和無性繁殖兩種，在林木生產(chǎn)中，有性繁殖是指通過種實(shí)培育生苗，無性繁殖則包括通過插條、插根、壓條、埋條、根蘗、插葉、嫁接和組織培養(yǎng)方式培育營(yíng)養(yǎng)繁殖苗，在杉木組織培養(yǎng)過程中，目前技術(shù)并不十分成熟，因此培養(yǎng)成功率較低。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種杉木莖連接處的明蘗組織培養(yǎng)繁殖方法。本發(fā)明技術(shù)方案如下：一種杉木莖連接處的明蘗組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟：（1）外植體滅菌：選擇7-8年生杉木根莖連接處的明蘗作為外植體，將外植體浸漬于質(zhì)量濃度為4.5-5%的碘化銀水溶液中，在功率為160-180W的超聲波下處理8-10秒；（2）誘導(dǎo)形成愈傷組織：將滅菌后的外植體接種至愈傷組織培養(yǎng)基中，愈傷組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+辣木籽浸提液3-3.4mg/L；（3）芽組織誘導(dǎo)：將外植體接種至芽組織培養(yǎng)基中，芽組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+曼陀羅子浸提液1-1.2mg/L；芽組織誘導(dǎo)期間，先將外植體置于18-20℃下培養(yǎng)10-12小時(shí)，再置于28-30℃下培養(yǎng)30-40小時(shí)；（4）根誘導(dǎo)：將外植體人工固定接種至根組織培養(yǎng)基中，根組織培養(yǎng)基組成為濃度為3%的氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液；根組織誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中，保持水池內(nèi)的水慢慢流動(dòng)。其中，辣木籽浸提液，曼陀羅子浸提液均為醇提液，并經(jīng)濃縮至固形物含量在35-38%得到。本發(fā)明有益效果在于，本發(fā)明以杉木莖連接處的明蘗作為外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)杉木小苗，誘導(dǎo)成本低，誘導(dǎo)方法簡(jiǎn)單，可大量成批誘導(dǎo)，能使外植體快速形成帶根帶芽小苗，將外植體浸漬于碘化銀水溶液中并超聲波下處理，可快速充分滅除外植體表面及孔隙內(nèi)的一切微生物，降低培養(yǎng)過程中細(xì)菌和真菌的污染率；辣木籽浸提液能提高細(xì)胞分化活躍度，添加于MS培養(yǎng)基中可促使愈傷組織快速形成，形成大小適當(dāng)?shù)挠鷤M織，愈傷組織誘導(dǎo)率在99.95%以上，誘導(dǎo)形成的愈傷組織呈淡黃色且生長(zhǎng)旺盛；曼陀羅子浸提液能夠促進(jìn)外植體合成生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，添加于MS培養(yǎng)基中可促使外植體生成數(shù)量較多的不定芽，從芽誘導(dǎo)發(fā)芽率可達(dá)到99.2%以上；芽誘導(dǎo)期間先將外植體置于18-20℃下培養(yǎng)10-12小時(shí)，再置于28-30℃下培養(yǎng)30-40小時(shí)可有效縮短不定芽誘導(dǎo)所需時(shí)間；以3%的氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液作為營(yíng)養(yǎng)源誘導(dǎo)不定根生成效果較好，不定根誘導(dǎo)率在98.7%以上，誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中可加快不定根生成，并提高不定根生成數(shù)量，最終誘導(dǎo)不定根數(shù)量多，生長(zhǎng)快，粗壯。具體實(shí)施方式以下結(jié)合實(shí)例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。但本發(fā)明的保護(hù)范圍不應(yīng)局限于此。實(shí)施例1、一種杉木莖連接處的明蘗組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟：（1）外植體滅菌：選擇7-8年生杉木根莖連接處的明蘗作為外植體，將外植體浸漬于質(zhì)量濃度為4.5%的碘化銀水溶液中，在功率為160W的超聲波下處理8秒；（2）誘導(dǎo)形成愈傷組織：將滅菌后的外植體接種至愈傷組織培養(yǎng)基中，愈傷組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+辣木籽浸提液3mg/L；（3）芽組織誘導(dǎo)：將外植體接種至芽組織培養(yǎng)基中，芽組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+曼陀羅子浸提液1mg/L；芽組織誘導(dǎo)期間，先將外植體置于18℃下培養(yǎng)10小時(shí)，再置于28℃下培養(yǎng)30小時(shí)；（4）根誘導(dǎo)：將外植體人工固定接種至根組織培養(yǎng)基中，根組織培養(yǎng)基組成為濃度為3%的氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液；根組織誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中，保持水池內(nèi)的水慢慢流動(dòng)。其中，辣木籽浸提液，曼陀羅子浸提液均為醇提液，并經(jīng)濃縮至固形物含量在35%得到。實(shí)施例2、一種杉木莖連接處的明蘗組織培養(yǎng)繁殖方法，包括以下步驟：（1）外植體滅菌：選擇7-8年生杉木根莖連接處的明蘗作為外植體，將外植體浸漬于質(zhì)量濃度為5%的碘化銀水溶液中，在功率為160-180W的超聲波下處理10秒；（2）誘導(dǎo)形成愈傷組織：將滅菌后的外植體接種至愈傷組織培養(yǎng)基中，愈傷組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+辣木籽浸提液3.4mg/L；（3）芽組織誘導(dǎo)：將外植體接種至芽組織培養(yǎng)基中，芽組織培養(yǎng)基組成為MS培養(yǎng)基中+曼陀羅子浸提液1.2mg/L；芽組織誘導(dǎo)期間，先將外植體置于20℃下培養(yǎng)12小時(shí)，再置于30℃下培養(yǎng)40小時(shí)；（4）根誘導(dǎo)：將外植體人工固定接種至根組織培養(yǎng)基中，根組織培養(yǎng)基組成為濃度為3%的氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液；根組織誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中，保持水池內(nèi)的水慢慢流動(dòng)。其中，辣木籽浸提液，曼陀羅子浸提液均為醇提液，并經(jīng)濃縮至固形物含量在38%得到。以下結(jié)合具體誘導(dǎo)試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說明，誘導(dǎo)試驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組1、對(duì)照組2、對(duì)照組3四組，其中實(shí)驗(yàn)組按照實(shí)施例1方式進(jìn)行繁殖；對(duì)照組1在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上取消外植體滅菌工序；對(duì)照組2在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上取消加入辣木籽浸提液、曼陀羅子浸提液；對(duì)照組3在實(shí)施例1的基礎(chǔ)上取消芽組織誘導(dǎo)期間，先將外植體置于20℃下培養(yǎng)12小時(shí)，再置于30℃下培養(yǎng)40小時(shí)；根組織誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中，保持水池內(nèi)的水慢慢流動(dòng)；四組所用外植體均取自同一種植場(chǎng)內(nèi)7年生杉木根莖連接處的明蘗，外植體外觀與健康狀況差異極微，每組30個(gè)，各組誘導(dǎo)環(huán)境相同；其中，試驗(yàn)期間，除實(shí)驗(yàn)組按實(shí)施例1規(guī)定時(shí)間進(jìn)行誘導(dǎo)外，對(duì)照組3組根據(jù)外植體實(shí)際生長(zhǎng)情況進(jìn)行誘導(dǎo)；試驗(yàn)期間，對(duì)各組誘導(dǎo)期間污染率、愈傷組織誘導(dǎo)率、愈傷組織誘導(dǎo)所需時(shí)間、從芽誘導(dǎo)發(fā)芽率，從芽誘導(dǎo)所需時(shí)間、不定根誘導(dǎo)率，不定根誘導(dǎo)所需時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見下表1：組別污染率（%）愈傷組織誘導(dǎo)率（%）愈傷組織誘導(dǎo)所需時(shí)間從芽誘導(dǎo)發(fā)芽率（%）從芽誘導(dǎo)所需時(shí)間不定根誘導(dǎo)率（%）不定根誘導(dǎo)所需時(shí)間實(shí)驗(yàn)組099.9826小時(shí)99.540小時(shí)99.0228小時(shí)對(duì)照組192%------對(duì)照組2060.342小時(shí)38.865小時(shí)20.544小時(shí)對(duì)照組3099.9540小時(shí)99.9262小時(shí)98.943小時(shí)由表1可知，外植體經(jīng)實(shí)施例1方式滅菌后再進(jìn)行誘導(dǎo)，可顯著降低誘導(dǎo)污染率，向MS培養(yǎng)基中加入辣木籽浸提液可顯著提高愈傷組織誘導(dǎo)率，向MS培養(yǎng)基中加入曼陀羅子浸提液可顯著提高從芽誘導(dǎo)發(fā)芽率，濃度為3%的氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液誘導(dǎo)不定根生成率較高，芽組織誘導(dǎo)期間，先將外植體置于20℃下培養(yǎng)12小時(shí)，再置于30℃下培養(yǎng)40小時(shí)；根組織誘導(dǎo)期間，將小分子團(tuán)水與氧氣混合緩慢通入氨基葡萄糖鹽酸鹽水溶液中，保持水池內(nèi)的水慢慢流動(dòng)，能分別縮短愈傷組織誘導(dǎo)所需時(shí)間、從芽誘導(dǎo)所需時(shí)間。當(dāng)前第1頁1 2 3