本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥技術領域，具體涉及一種對節(jié)白蠟中具有殺菌活性的提取物及其殺菌組合物。

背景技術：

農(nóng)藥是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的重要生產(chǎn)資料，對于保證農(nóng)作物優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)具有不可或缺的作用。我國是農(nóng)業(yè)大國，如何利用我國僅占世界7％的耕地面積來養(yǎng)活我國占世界總?cè)丝?2％的人口，是我國國民經(jīng)濟的首要任務?；瘜W農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中起到重要作用，但由于長期不合理使用，致使出現(xiàn)3R(Resistance，Resurgence，Residue)現(xiàn)象，給生態(tài)環(huán)境和人類健康帶來隱患。當今人們對環(huán)境更高要求以及食品安全的迫切需求，使得合理使用農(nóng)藥，創(chuàng)制高效、低毒、環(huán)境友好的綠色農(nóng)藥成為人們關注的焦點。

植物源農(nóng)藥具有易分解、與環(huán)境相容性好、對非靶標生物相對安全等優(yōu)點，符合現(xiàn)代環(huán)保和人們健康的要求，因而越來越引起人們的高度重視。我國是利用植物資源防治病蟲害最早的國家。早在周朝的《周禮秋官》中就有芥草熏殺蠹物的記載。李時珍所著的《本草綱目》記錄了不少可以用來殺蟲的植物，如百部、苦參、川楝、巴豆等。我國植物源農(nóng)藥商品化生產(chǎn)則始于新中國成立初期，其標志性產(chǎn)品是除蟲菊素制劑、魚藤酮制劑及煙堿制劑。目前已有煙堿、除蟲菊素、百部堿、馬錢子堿、異羊角拗苷、茶皂素、蛇麻子素、莨菪烷類生物堿、瑞香狼毒等多種植物源殺蟲劑及苦參堿、黃苓苷及黃苓素、小檗堿、丁香酚、檸檬醛等植物源殺菌劑完成了登記或臨時登記。

對節(jié)白蠟(Fraxinus hupehensis)是湖北長江大學蘇丕林教授于1975年首次發(fā)現(xiàn)的白蠟屬新種，發(fā)現(xiàn)之初，僅分布于湖北省鐘祥京山大洪山南麓山丘地帶，因此又名：湖北梣、湖北白蠟、對節(jié)樹、望鄉(xiāng)樹。對節(jié)白蠟是我國二級珍稀保護植物，具有很好的應用價值：樹皮作為中藥秦皮的來源之一，具有重要的藥用價值；對節(jié)白蠟是世界僅存的木犀白蠟名貴樹種，是世界景點、盆景、根雕家族的極品；對節(jié)白蠟盆景被譽為“活化石”或“盆景之王”。目前關于對節(jié)白蠟的研究主要集中在園林、園藝及景觀領域；對其化學成分及提取物等相關研究，僅有華中科技大學的馬力等就對節(jié)白蠟中的秦皮甲(乙)素和黃酮總量的提取、分析進行過相關文章報道，且側(cè)重于醫(yī)藥用途。

特別引起我們注意的是，對節(jié)白蠟鮮有病蟲害，蚜蟲、螨蟲、線蟲、紅蜘蛛等均不會對其造成影響。僅是嫩芽剛出時，芽梢會偶受病蟲影響，數(shù)天后芽葉老化，危害會自動消除。白粉病、立枯病等均不對其造成危害。我們分析認為，對節(jié)白蠟很有可能自身能夠產(chǎn)生抗蟲、抗病的活性物質(zhì)，幫助其免于病蟲害的影響。而有關對節(jié)白蠟抗蟲抗病方面的研究目前尚無報道。

技術實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種對節(jié)白蠟中具有殺菌活性的提取物及其殺菌組合物，可作殺蟲、殺菌劑使用，用于防治農(nóng)作物病害。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案為：一種對節(jié)白蠟中具有殺菌活性的提取物，該提取物是由以下方法制備得到：將對節(jié)白蠟的根、莖、葉、花和/或種子進行粉碎處理后，在室溫下用浸出劑進行提取得到浸出物，將浸出物進行減壓濃縮至無溶劑得到粗提物，將粗提物用蒸餾水稀釋后用萃取劑進行多次萃取得到萃取液，將萃取液進行濃縮干燥處理后，得到對節(jié)白蠟殺菌活性提取物；其中，所述浸出劑選自水、醇、酯、酮、醚、氯代烷烴、芳烴或烷烴；所述萃取劑選自酯、酮、醚、氯代烷烴、芳烴或烷烴。

本發(fā)明還提供了一種殺菌組合物，所述殺菌組合物由用上述所述的提取物和載體組成。

本發(fā)明殺菌組合物中的載體系滿足下述條件的物質(zhì)：它與活性成分配制后便于施用于待處理的位點，例如可以是植物、種子或土壤；或者有利于貯存、運輸或操作。載體可以是固體或液體，包括通常為氣體但已壓縮成液體的物質(zhì)，通常在配制殺蟲、殺菌組合物中所用的載體均可使用。

本發(fā)明還提供了一種如上述所述的殺菌組合物的應用，殺菌組合物通常加工成濃縮物的形式并以此用于運輸，在施用之前由使用者將其稀釋。所述殺菌組合物的劑型為可濕性粉劑、顆粒劑、泡騰片劑、可乳化的濃縮劑、水乳劑、懸浮濃縮劑、氣霧劑或煙霧劑。

本發(fā)明還提供了一種如上述所述的殺菌組合物的用途，作為殺蟲劑、殺菌劑使用，用于防治小麥赤霉病、水稻紋枯病、棉花紅腐病、核桃根腐病、馬鈴薯早疫病、蘋果斑點落葉病、人參黑斑、棉花立枯等病蟲害。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明的對節(jié)白蠟中提取的活性成分具有廣譜的殺菌活性，可作為殺蟲、殺菌劑使用，對小麥赤霉病、水稻紋枯病、棉花紅腐病、核桃根腐病、馬鈴薯早疫病、蘋果斑點落葉病、人參黑斑、棉花立枯等具有較顯著的殺菌抑制作用。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細描述，本部分的描述僅是示范性和解釋性，不應對本發(fā)明的保護范圍有任何的限制作用。

本發(fā)明的一種對節(jié)白蠟中具有殺菌活性的提取物，其特征在于：該提取物是由以下方法制備得到：將對節(jié)白蠟的根、莖、葉、花和/或種子進行粉碎處理后，在室溫下用浸出劑進行提取得到浸出物，可進行多次提取以提高提出效率，將浸出物進行減壓濃縮至無溶劑得到粗提物，將粗提物用蒸餾水稀釋后用萃取劑進行多次萃取得到萃取液，將萃取液進行濃縮干燥處理后，得到對節(jié)白蠟殺菌活性提取物；其中，所述浸出劑選自水、醇、酯、酮、醚、氯代烷烴、芳烴或烷烴；所述萃取劑選自酯、酮、醚、氯代烷烴、芳烴或烷烴。

作為進一步優(yōu)選的，所述浸出劑為甲醇和乙醇的混合物。

作為進一步優(yōu)選的，所述萃取劑選自石油醚、氯仿或乙酸乙酯。

作為進一步優(yōu)選的，所述浸出劑的與對節(jié)白蠟粉末體積比為1～10:1，優(yōu)選2～8倍，特別是4～5倍。

本發(fā)明還提供了一種殺菌組合物，所述殺菌組合物由用上述所述的提取物和載體組成。

本發(fā)明殺菌組合物中的載體系滿足下述條件的物質(zhì)：它與活性成分配制后便于施用于待處理的位點，例如可以是植物、種子或土壤；或者有利于貯存、運輸或操作。載體可以是固體或液體，包括通常為氣體但已壓縮成液體的物質(zhì)，通常在配制殺蟲、殺菌組合物中所用的載體均可使用。

固體載體包括：天然或合成的粘土和硅酸鹽，其中粘土中較佳為硅藻土、滑石、硅鎂土或高嶺土；硅酸鹽中較佳為碳酸鈣、硫酸鈣、氧化硅、硅酸鈣、硅酸鋁、蒙脫石或云母；元素如碳或硫；天然的或合成的樹脂如苯并呋喃樹脂；聚氯乙烯和苯乙烯聚合物或共聚物；固體多氯苯酚；瀝青；蠟如蜂蠟或石蠟。

液體載體包括：水；醇類化合物如乙醇或異丙醇；酮類化合物如丙酮、甲基乙基酮、甲基異丙基酮或環(huán)己酮；醚；芳香烴化合物如苯、甲苯、二甲苯或溶劑油；石油餾分如煤油或礦物油；生物材油；通常，這些液體的混合物也是合適的。

作為進一步優(yōu)選的，所述載體為粘土、硅酸鹽、醇類化合物、酮類化合物、樹脂、聚氯乙烯和苯乙烯聚合物或共聚物、多氯苯酚、芳香烴化合物、石油餾分、生物柴油中的一種或多種的混合物。

作為進一步優(yōu)選的，所述粘土為硅藻土、滑石、硅鎂土或高嶺土；所述硅酸鹽為碳酸鈣、硫酸鈣、氧化硅、硅酸鈣、硅酸鋁、蒙脫石或云母。

作為進一步優(yōu)選的，所述醇類化合物為乙醇或異丙醇；所述酮類化合物為丙酮、甲基乙基酮、甲基異丙基酮、環(huán)己酮、苯、甲苯或二甲苯。

作為進一步優(yōu)選的，所述載體中還可添加表面活性劑，少量表面活性劑的存在有助于稀釋過程。

本發(fā)明還提供了一種如上述所述的殺菌組合物的應用，殺菌組合物通常加工成濃縮物的形式并以此用于運輸，在施用之前由使用者將其稀釋。所述殺菌組合物的劑型為可濕性粉劑、顆粒劑、泡騰片劑、可乳化的濃縮劑、水乳劑、懸浮濃縮劑、氣霧劑或煙霧劑。

本發(fā)明還提供了一種如上述所述的殺菌組合物的用途，作為殺蟲劑、殺菌劑使用，用于防治小麥赤霉病、水稻紋枯病、棉花紅腐病、核桃根腐病、馬鈴薯早疫病、蘋果斑點落葉病、人參黑斑、棉花立枯等病蟲害。

實施例1

準確稱取1000g粉碎后的對節(jié)白蠟根、莖、葉、花和/或種子樣本，在室溫下，依次用1500mL無水甲醇和乙醇的混合液冷浸提取3天、2天、1天，將對節(jié)白蠟樹葉中的提取物充分提取出來，提取液減壓濃縮至無溶劑蒸出，得對節(jié)白蠟粗提物，將對節(jié)白蠟粗提物用蒸餾水溶解稀釋，然后采用“液-液萃取法”，先用石油醚萃取三次，再用氯仿萃取三次，最后用乙酸乙酯萃取三次，將最后的萃取液減壓濃縮至無溶劑蒸出，真空干燥，得到對節(jié)白蠟具有殺菌活性的提取物。

實施例2

準確稱取1000g粉碎后的對節(jié)白蠟樣本，在室溫下，依次用1500mL無水甲醇和95％的乙醇冷浸提取3天、2天、1天，將對節(jié)白蠟樹葉中的提取物充分提取出來，提取液減壓濃縮至無溶劑蒸出，得對節(jié)白蠟粗提物。將對節(jié)白蠟粗提物用蒸餾水溶解，用乙酸乙酯萃取三次，將最后的萃取液經(jīng)D101大孔樹脂吸附，然后用30％的乙醇洗脫至無色，搜集30％的乙醇洗脫液，濃縮干燥得色素，再用95％的乙醇洗脫至無色，搜集95％的乙醇洗脫液，濃縮干燥得到對節(jié)白蠟具有殺菌活性的提取物。

實施例3

可濕性粉劑按重量百分數(shù)計由以下成份組成：

各組分混合在一起，在粉碎機中粉碎，直到顆粒達到標準。

實施例4

乳油按重量百分數(shù)計由以下成份組成：

將對節(jié)白蠟殺菌活性提取物、PEO-10及乙氧基化甘油三酸酯溶于生物柴油中，得到透明的溶液。

實施例5

水懸浮劑按重量百分數(shù)計由以下成份組成：

對節(jié)白蠟殺菌活性提取物與70％的應加入水量以及十二烷基苯磺酸鈉在球磨機中粉碎，其他組分溶解在其余水中，攪拌加入，混合均勻得水懸浮劑。

以下以實施例1為例，對對節(jié)白蠟提取物對多種真菌病害進行殺菌活性測定：

實驗方法如下：將對節(jié)白蠟殺菌活性提取物用丙酮或二氯甲烷或DMSO溶解制備成一定濃度的母液，在無菌操作條件下，把配制好的母液用培養(yǎng)基稀釋10倍制成的含毒培養(yǎng)基平板，實驗設不含藥劑處理的空白對照，各重復3次。

按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準(NY/T 1156.2-2006)，采用菌絲生長速率法進行測定。將培養(yǎng)好的各種病原菌，在無菌操作條件下用直徑5mm的滅菌打孔器，自菌落邊緣切取菌餅，用接種器將菌餅接種于含藥平板中央，菌絲面向下，蓋上皿蓋，置于25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

根據(jù)空白對照培養(yǎng)皿中菌落的生長情況調(diào)查病原菌菌絲生長情況，待空白對照中的菌落充分生長后，以十字交叉法測量各處理的菌落直徑，采用下面公式計算菌落增長直徑，取其平均值。

菌落增長直徑＝菌落直徑-菌餅直徑

測定結(jié)果用下列方法計算，以空白對照菌落增長直徑和藥劑處理的菌落增長直徑計算各藥劑處理對各種病原菌的菌絲增長抑制率(參見下面公式)。

菌絲生長抑制率(％)＝[(對照菌落增長直徑-藥劑處理菌落增長直徑)/空白對照菌落增長直徑]×100

殺菌活性測試結(jié)果如表1所示：

表1殺菌活性測試結(jié)果

由表1可知，通過本發(fā)明的對節(jié)白蠟中制備得到的提取物對小麥赤霉病、水稻紋枯病、棉花紅腐病、核桃根腐病、馬鈴薯早疫病、蘋果斑點落葉病、人參黑斑、棉花立枯等具有較明顯的殺菌抑制效果。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例，并非對本發(fā)明的技術范圍作出任何限制，故凡是依據(jù)本發(fā)明的技術實質(zhì)對以上實施例所作的任何細微修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明的技術方案范圍內(nèi)。