本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種香茅草組培快繁方法。

背景技術(shù)：

香茅草(Cymbopogon citratus)屬禾本科，多年生草本植物，原產(chǎn)于亞熱帶地區(qū)。其莖葉中含檸檬醛，具有檸檬香味，可提取香茅油。香茅油有消毒、殺菌、平喘、止咳，治療神經(jīng)痛、肌肉痛等醫(yī)療功效，廣泛應(yīng)用于日用化學(xué)和醫(yī)藥工業(yè)。此外，香茅草近年來被開發(fā)為茶飲和調(diào)味料，能提高消化機(jī)能，健胃消脂，同時(shí)，香茅草具有觀賞價(jià)值，可用來綠化、香化家居，而且其栽培容易，管理粗放，保水性能好，是一種具有發(fā)展前景的水土保持優(yōu)良草種，值得大力宣傳推廣。

香茅草一般采用分株繁殖，但這種方式繁殖效率很低，無法滿足生產(chǎn)與市場(chǎng)的需要，而且，長(zhǎng)期的無性繁殖容易積累和傳播病毒。利用組織培養(yǎng)及其配套育苗技術(shù)，通過外植體消毒、初代誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽等技術(shù)環(huán)節(jié)，以香茅草良種或無性系為材料，進(jìn)行組培苗工廠化生產(chǎn)可以穩(wěn)定并提高苗木生產(chǎn)效率和質(zhì)量，對(duì)香茅草的規(guī)?；a(chǎn)具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種育苗周期短、成活率高、苗木質(zhì)量好的香茅草組培快繁的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種香茅草組培快繁的方法，包括外植體選擇及處理、初代誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)基及煉苗移栽工序；修剪健壯的香茅草作為外植體，對(duì)外植體進(jìn)行滅菌消毒處理后接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中獲取初始芽，再將初始芽接種于繼代培養(yǎng)基中經(jīng)過15～20天繼代培養(yǎng)，形成叢生芽，將高≥3cm單芽剪掉上部葉片后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，最后進(jìn)行煉苗移栽獲得香茅草成活苗；主要操作步驟如下：

（1）外植體選擇及處理：于晴天選擇健壯的香茅草，剪去下部殘留根系及上部葉片，保留莖及部分葉鞘，剝掉外面1～3層葉鞘后作為外植體材料；用清水沖洗掉外植體表面泥土后放入去磷洗滌劑溶液中浸泡2min，同時(shí)用軟毛刷刷洗外植體，然后用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺(tái)上，將外植體放入體積濃度75%的酒精溶液中浸泡10 s后，用無菌水沖洗3~5次，再將其放入體積濃度0.1% HgCl₂溶液中浸泡8min～12 min，用無菌水沖洗3次～5次；

（2）初代誘導(dǎo)：用手術(shù)刀將步驟（1）得到的外植體剝掉1~2層葉鞘后垂直插入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，立穩(wěn)；

（3）繼代培養(yǎng)：待接入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的莖段生長(zhǎng)至5 cm以上時(shí)，剪切掉上部葉片，保持初始芽芽體高度為2.5～3.5cm，將修剪后的初始芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中，經(jīng)過15～20天培養(yǎng)，增殖形成叢芽，增殖系數(shù)3.0～5.0；在超凈臺(tái)上，將增殖芽分株為單芽或小叢，對(duì)單芽或小叢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）得到的高≥3cm單芽剪掉上部葉片，保持單芽芽體高度1.5～2.5cm，將修剪后的單芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，7～10天后，即可長(zhǎng)根；

（5）煉苗移栽：待步驟（4）生根培養(yǎng)后的單芽根系長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm 以上時(shí)移到室外育苗網(wǎng)室進(jìn)行煉苗，3~7d后打開培養(yǎng)瓶蓋，將生根培養(yǎng)基及組培苗倒出，輕輕擠壓生根培養(yǎng)基，取出已經(jīng)鍛煉的生根苗，放入清水中震蕩洗除殘留藥液；用木棍或其它工具在裝有育苗基質(zhì)的育苗容器中心鉆孔，將生根苗放入孔中，捏緊育苗容器，淋透水，之后進(jìn)行苗木管理。

以上步驟（1）所述的外植體材料保留莖的長(zhǎng)度為2.5cm~3cm。

以上所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：WPM＋BA 0.3mg/L～1.0 mg/L＋白糖 30g/L＋瓊脂 4.5 g/L，pH=5.8。

以上所述的繼代培養(yǎng)基配方為：WPM＋BA 2.0mg/L～3.0 mg/L＋NAA 0.2mg/L～0.5 mg/L＋白糖3％＋瓊脂 5.5 g/L，pH =5.8。

以上所述的生根培養(yǎng)基配方為：1/2WPM＋I(xiàn)BA 0.8mg/L～1.0 mg/L＋I(xiàn)AA1.2mg/L～1.5 mg/L＋白糖1.5％＋瓊脂 6.0 g/L，pH =5.8。

以上步驟（2）所述的初代誘導(dǎo)、步驟（3）所述的繼代培養(yǎng)、步驟（4）所述的生根培養(yǎng)的培育控制條件均為：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度2000Lx～8000Lx，光照時(shí)間12h/d～16h/d。

以上步驟（5）所述的育苗基質(zhì)為椰糠；所述的育苗容器規(guī)格為直徑5cm，高10cm的無紡布杯；移栽前，用體積濃度0.5%高錳酸鉀或800倍甲基托布津溶液對(duì)育苗基質(zhì)淋透消毒，1d后再用清水淋灑洗去藥液。

以上步驟（5）所述的苗木管理方法為：每日噴淋1次～2次水；移栽后一周內(nèi)，透光度保持在30%，一周后逐漸增加光照，移栽一個(gè)月透光度增至60～80%；待組培苗恢復(fù)生長(zhǎng)后，用質(zhì)量濃度0.2％復(fù)合肥水溶液或者質(zhì)量濃度0.1％尿素和質(zhì)量濃度0.2％磷肥的混合水溶液噴施葉面，施肥后立即用清水沖洗葉面，每月施肥1次，且施肥宜在傍晚進(jìn)行，不應(yīng)在午間高溫時(shí)施肥；其中所述的復(fù)合肥的N:P:K=15:15:15。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及積極效果：

1、本發(fā)明通過對(duì)香茅草外植體消毒，初代誘導(dǎo)，繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)等各項(xiàng)因素及培養(yǎng)方式的篩選，并采用適宜的煉苗、育苗措施，建立了香茅草組培快繁技術(shù)體系，種苗性狀穩(wěn)定，為香茅草組培工廠化育苗提供了技術(shù)支撐，對(duì)于推動(dòng)香茅草產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

2、本發(fā)明以健壯的香茅草作為外植體，經(jīng)過初代誘導(dǎo)，初始芽萌動(dòng)率85-90%；經(jīng)過15-20天繼代培養(yǎng)，形成叢生芽，繼代芽增殖系數(shù)高，可達(dá)3.0～5.0；將高≥3cm的單芽經(jīng)過修剪后插入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，最后進(jìn)行煉苗移栽獲得香茅草成活苗，生根率和移栽成活率高達(dá)99%，從而縮短了香茅草的育苗周期，可在短期內(nèi)獲得大量脫毒組培苗，提高了香茅草的生產(chǎn)效率和質(zhì)量。

3、本發(fā)明根據(jù)香茅草組培的不同階段的生長(zhǎng)情況，在WPM基本培養(yǎng)基上添加相應(yīng)激素和藥液，使得培養(yǎng)基更科學(xué)，更有針對(duì)性，更易促使香茅草組培快繁，效果顯著。

4、本發(fā)明的在特定的光溫條件下培養(yǎng)，適應(yīng)香茅草組培苗的生長(zhǎng)特性，促進(jìn)苗木的生長(zhǎng)。

5、本發(fā)明將獲得的香茅草組培苗移栽裝有椰糠的基質(zhì)容器中育苗，育苗材料簡(jiǎn)單易得，且足以提供充足的營(yíng)養(yǎng)促使組培苗生長(zhǎng)，提高移栽成活率。

附圖說明

圖1為本發(fā)明香茅草組培繼代瓶苗。

圖2為本發(fā)明香茅草組培生根瓶苗。

圖3為本發(fā)明香茅草成活苗。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：

一種香茅草組培快繁的方法，主要操作步驟如下：

（1）外植體選擇及處理：于晴天選擇健壯的香茅草，剪去下部殘留根系及上部葉片，保留莖及部分葉鞘，保留莖的長(zhǎng)度為2.5cm~3cm，剝掉外面1～3層葉鞘后作為外植體材料；用清水沖洗掉外植體表面泥土后放入去磷洗滌劑溶液中浸泡2min，同時(shí)用軟毛刷刷洗外植體，然后用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺(tái)上，將外植體放入體積濃度75%的酒精溶液中浸泡10 s后，用無菌水沖洗3~5次，再將其放入體積濃度0.1% HgCl₂溶液中浸泡8min，用無菌水沖洗3次；

（2）初代誘導(dǎo)：用手術(shù)刀將步驟（1）得到的外植體剝掉1~2層葉鞘后垂直插入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，立穩(wěn)；所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：WPM＋BA 0.3mg/L＋白糖 30g/L＋瓊脂 4.5 g/L，pH=5.8；初代誘導(dǎo)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間16h/d；初始芽萌動(dòng)率為80%；

（3）繼代培養(yǎng)：待接入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的莖段生長(zhǎng)至5 cm以上時(shí)，剪切掉上部葉片，保持初始芽芽體高度為2.5～3.5cm，將修剪后的初始芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中，經(jīng)過15～20天培養(yǎng)，增殖形成叢芽，增殖系數(shù)3.0～5.0；在超凈臺(tái)上，將增殖芽分株為單芽或小叢，對(duì)單芽或小叢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)；所述的繼代培養(yǎng)基配方為：WPM＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.2mg/L～0.5 mg/L＋白糖3％＋瓊脂 5.5 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的3％；繼代培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間16h/d；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）得到的高≥3cm單芽剪掉上部葉片，保持單芽芽體高度1.5～2.0cm，將修剪后的單芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，7～10天后，即可長(zhǎng)根；所述的生根培養(yǎng)基配方為：1/2WPM＋I(xiàn)BA 0.8mg/L＋I(xiàn)AA1.2mg/L＋白糖1.5％＋瓊脂 6.0 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的1.5％；生根培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度2000Lx，光照時(shí)間16h/d；生根率為99%；

（5）煉苗移栽：待步驟（4）生根培養(yǎng)后的單芽根系長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm 以上時(shí)移到室外育苗網(wǎng)室進(jìn)行煉苗，3~7d后打開培養(yǎng)瓶蓋，將生根培養(yǎng)基及組培苗倒出，輕輕擠壓生根培養(yǎng)基，取出已經(jīng)鍛煉的生根苗，放入清水中震蕩洗除殘留藥液；用木棍或其它工具在裝有椰糠的直徑5cm，高10cm的無紡布杯的中心鉆孔，將生根苗放入孔中，捏緊無紡布杯，淋透水，之后進(jìn)行苗木管理。移栽前，用體積濃度0.5%高錳酸鉀或800倍甲基托布津溶液對(duì)椰糠淋透消毒，1d后再用清水淋灑洗去藥液。移栽成活率為99%。

所述的苗木管理方法為：每日噴淋1次～2次水；移栽后一周內(nèi)，透光度保持在30%，一周后逐漸增加光照，移栽一個(gè)月透光度增至60%；待組培苗恢復(fù)生長(zhǎng)后，用質(zhì)量濃度0.2％復(fù)合肥水溶液噴施葉面，施肥后立即用清水沖洗葉面，每月施肥1次，且施肥宜在傍晚進(jìn)行，不應(yīng)在午間高溫時(shí)施肥；其中所述的復(fù)合肥的N:P:K=15:15:15。

實(shí)施例2：

一種香茅草組培快繁的方法，主要操作步驟如下：

（1）外植體選擇及處理：于晴天選擇健壯的香茅草，剪去下部殘留根系及上部葉片，保留莖及部分葉鞘，保留莖的長(zhǎng)度為2.5cm~3cm，剝掉外面1～3層葉鞘后作為外植體材料；用清水沖洗掉外植體表面泥土后放入去磷洗滌劑溶液中浸泡2min，同時(shí)用軟毛刷刷洗外植體，然后用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺(tái)上，將外植體放入體積濃度75%的酒精溶液中浸泡10 s后，用無菌水沖洗3~5次，再將其放入體積濃度0.1% HgCl₂溶液中浸泡10 min，用無菌水沖洗4次；

（2）初代誘導(dǎo)：用手術(shù)刀將步驟（1）得到的外植體剝掉1~2層葉鞘后垂直插入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，立穩(wěn)；所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：WPM＋BA 0.5 mg/L＋白糖 30g/L＋瓊脂 4.5 g/L，pH=5.8；初代誘導(dǎo)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度4000Lx，光照時(shí)間14h/d；初始芽萌動(dòng)率為85%；

（3）繼代培養(yǎng)：待接入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的莖段生長(zhǎng)至5 cm以上時(shí)，剪切掉上部葉片，保持初始芽芽體高度為2.5～3.0cm，將修剪后的初始芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中，經(jīng)過15～20天培養(yǎng)，增殖形成叢芽，增殖系數(shù)3.0～5.0；在超凈臺(tái)上，將增殖芽分株為單芽或小叢，對(duì)單芽或小叢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)；所述的繼代培養(yǎng)基配方為：WPM＋BA 2.5 mg/L＋NAA 0.2mg/L～0.5 mg/L＋白糖3％＋瓊脂 5.5 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的3％；繼代培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度4000Lx，光照時(shí)間14h/d；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）得到的高≥3cm單芽剪掉上部葉片，保持單芽芽體高度1.5～2.0cm，將修剪后的單芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，7～10天后，即可長(zhǎng)根；所述的生根培養(yǎng)基配方為：1/2WPM＋I(xiàn)BA 0.8mg/L＋I(xiàn)AA1.4 mg/L＋白糖1.5％＋瓊脂 6.0 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的1.5％；生根培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度4000Lx，光照時(shí)間14h/d；生根率為99%；

（5）煉苗移栽：待步驟（4）生根培養(yǎng)后的單芽根系長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm 以上時(shí)移到室外育苗網(wǎng)室進(jìn)行煉苗，3~7d后打開培養(yǎng)瓶蓋，將生根培養(yǎng)基及組培苗倒出，輕輕擠壓生根培養(yǎng)基，取出已經(jīng)鍛煉的生根苗，放入清水中震蕩洗除殘留藥液；用木棍或其它工具在裝有椰糠的直徑5cm，高10cm的無紡布杯的中心鉆孔，將生根苗放入孔中，捏緊無紡布杯，淋透水，之后進(jìn)行苗木管理。移栽前，用體積濃度0.5%高錳酸鉀或800倍甲基托布津溶液對(duì)椰糠淋透消毒，1d后再用清水淋灑洗去藥液。移栽成活率為99%。

所述的苗木管理方法為：每日噴淋1次～2次水；移栽后一周內(nèi)，透光度保持在30%，一周后逐漸增加光照，移栽一個(gè)月透光度增至70%；待組培苗恢復(fù)生長(zhǎng)后，用者質(zhì)量濃度0.1％尿素和質(zhì)量濃度0.2％磷肥的混合水溶液噴施葉面，施肥后立即用清水沖洗葉面，每月施肥1次，且施肥宜在傍晚進(jìn)行，不應(yīng)在午間高溫時(shí)施肥；其中所述的復(fù)合肥的N:P:K=15:15:15。

實(shí)施例3：

一種香茅草組培快繁的方法，主要操作步驟如下：

（1）外植體選擇及處理：于晴天選擇健壯的香茅草，剪去下部殘留根系及上部葉片，保留莖及部分葉鞘，保留莖的長(zhǎng)度為2.5cm~3cm，剝掉外面1～3層葉鞘后作為外植體材料；用清水沖洗掉外植體表面泥土后放入去磷洗滌劑溶液中浸泡2min，同時(shí)用軟毛刷刷洗外植體，然后用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺(tái)上，將外植體放入體積濃度75%的酒精溶液中浸泡10 s后，用無菌水沖洗3~5次，再將其放入體積濃度0.1% HgCl₂溶液中浸泡12 min，用無菌水沖洗5次；

（2）初代誘導(dǎo)：用手術(shù)刀將步驟（1）得到的外植體剝掉1~2層葉鞘后垂直插入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，立穩(wěn)；所述的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為：WPM＋BA 1.0 mg/L＋白糖 30g/L＋瓊脂 4.5 g/L，pH=5.8；初代誘導(dǎo)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度8000Lx，光照時(shí)間12h/d；初始芽萌動(dòng)率為90%；

（3）繼代培養(yǎng)：待接入初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的莖段生長(zhǎng)至5 cm以上時(shí)，剪切掉上部葉片，保持初始芽芽體高度為3.0～3.5cm，將修剪后的初始芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中，經(jīng)過15～20天培養(yǎng)，增殖形成叢芽，增殖系數(shù)3.0～5.0；在超凈臺(tái)上，將增殖芽分株為單芽或小叢，對(duì)單芽或小叢繼續(xù)進(jìn)行繼代培養(yǎng)；所述的繼代培養(yǎng)基配方為：WPM＋BA 3.0 mg/L＋NAA 0.2mg/L～0.5 mg/L＋白糖3％＋瓊脂 5.5 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的3％；繼代培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度8000Lx，光照時(shí)間12h/d；

（4）生根培養(yǎng)：將步驟（3）得到的高≥3cm單芽剪掉上部葉片，保持單芽芽體高度2.0～2.5cm，將修剪后的單芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，7～10天后，即可長(zhǎng)根；所述的生根培養(yǎng)基配方為：1/2WPM＋I(xiàn)BA 1.0 mg/L＋I(xiàn)AA1.5 mg/L＋白糖1.5％＋瓊脂 6.0 g/L，pH =5.8，其中所加入的白糖的量為培養(yǎng)基質(zhì)量的1.5％；生根培養(yǎng)的培育環(huán)境：溫度為25±3℃，光照強(qiáng)度8000Lx，光照時(shí)間12h/d；生根率為99%；

（5）煉苗移栽：待步驟（4）生根培養(yǎng)后的單芽根系長(zhǎng)度達(dá)到1.0cm 以上時(shí)移到室外育苗網(wǎng)室進(jìn)行煉苗，3~7d后打開培養(yǎng)瓶蓋，將生根培養(yǎng)基及組培苗倒出，輕輕擠壓生根培養(yǎng)基，取出已經(jīng)鍛煉的生根苗，放入清水中震蕩洗除殘留藥液；用木棍或其它工具在裝有椰糠的直徑5cm，高10cm的無紡布杯的中心鉆孔，將生根苗放入孔中，捏緊無紡布杯，淋透水，之后進(jìn)行苗木管理。移栽前，用體積濃度0.5%高錳酸鉀或800倍甲基托布津溶液對(duì)椰糠淋透消毒，1d后再用清水淋灑洗去藥液。移栽成活率為99%。

所述的苗木管理方法為：每日噴淋1次～2次水；移栽后一周內(nèi)，透光度保持在30%，一周后逐漸增加光照，移栽一個(gè)月透光度增至80%；待組培苗恢復(fù)生長(zhǎng)后，用者質(zhì)量濃度0.1％尿素和質(zhì)量濃度0.2％磷肥的混合水溶液噴施葉面，施肥后立即用清水沖洗葉面，每月施肥1次，且施肥宜在傍晚進(jìn)行，不應(yīng)在午間高溫時(shí)施肥；其中所述的復(fù)合肥的N:P:K=15:15:15。