本發(fā)明屬于牧草生產(chǎn)與加工領(lǐng)域，具體涉及一種快速降低紅三葉中異黃酮含量的方法。

背景技術(shù)：

紅三葉是一種重要的豆科牧草，在全世界均有大面積種植。而且，紅三葉中富含異黃酮成分，具有多種藥用價(jià)值。然而作為牧草飼料，是牛、羊等反芻動(dòng)物的主要食糧，也常常被用來(lái)飼喂豬和家禽等，但過(guò)高的異黃酮攝入會(huì)引起采食動(dòng)物的激素水平紊亂，帶來(lái)一系列的副作用，進(jìn)而影響到食品安全。在生產(chǎn)實(shí)踐中，目前尚未見(jiàn)到有效降低其中異黃酮含量方法的報(bào)道。

UV-C射線是太陽(yáng)光譜的一部分，在日常生活中已被廣泛利用于殺菌、消毒、滅蚊等方面。本專(zhuān)利利用UV-C可快速降低紅三葉中異黃酮含量，工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，對(duì)紅三葉的產(chǎn)量影響不大，且易于產(chǎn)業(yè)化。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種快速降低紅三葉中異黃酮含量的方法。紅三葉作為豆科主要牧草之一，在全球分布廣泛，該方法可直接應(yīng)用于紅三葉牧草生產(chǎn)，提高其牧草的安全性。該方法工藝簡(jiǎn)單，環(huán)保，易于大規(guī)模推廣。

快速降低紅三葉中異黃酮含量的方法，其關(guān)鍵步驟如下：

將紅三葉植株置于UV-C紫外照射裝置中，照射功率5-150W，照射時(shí)間10-180分鐘，采用間隔照射方式。其中的間隔時(shí)間建議為0-120小時(shí)。

UV-C紫外波長(zhǎng)范圍200-270nm，其中最常用的是254nm。

異黃酮含量測(cè)定的方法：

收集紅三葉地上部分，自然風(fēng)干，粉碎，將其置于乙醇水溶液中超聲提取。取上清液，通過(guò)0.45微米有機(jī)膜過(guò)濾，制備待測(cè)液。待測(cè)液用HPLC檢測(cè)。

優(yōu)選的，所述乙醇水溶液，加入量是干粉體積的5-150倍，乙醇水溶液濃度為20-100wt％；超聲提取時(shí)間為10-90分鐘。

HPLC檢測(cè)方法為：

流動(dòng)相A為0.2％醋酸水，流動(dòng)相B為色譜純甲醇。

色譜條件如下：0-5min 40％B；10-20min 70％B；35min 85％B；40min 100％B。

對(duì)紅三葉中的主要異黃酮成分紫檀苷、山槐素、芒柄花素和鷹嘴豆素等化合物進(jìn)行分析檢測(cè)。

本發(fā)明的工藝簡(jiǎn)單，而且所用的材料和配套技術(shù)均成熟可靠，成本較低，容易在生產(chǎn)實(shí)踐中所大規(guī)模采用。此外，本方法處理的同時(shí)，大大降低牧草產(chǎn)品中病菌的含量，有利于后期貯存加工，并提高飼料的安全性。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明去除防紫外面料層和反光層后的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為除防紫外面料層和反光層的局部剖視圖，

圖中：1、紫外光裝置；2、燈架；3、腔體；4、滾輪；5、敞開(kāi)部；6、防紫外面料層；7、反光層；8、支腿。

具體實(shí)施方式

以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。

實(shí)施例1短期用UV-C處理紅三葉植株

1、紅三葉植株的處理：已培育8天紅三葉幼苗，利用15w的紫外燈(254nm)照射。單次照射時(shí)間30min/天，分別處理1、2次，處理之間間隔24小時(shí)。照射功率20w。紫外線照射時(shí)間：上午9:30-10:00；苗處理時(shí)間：18:00。

2、紅三葉異黃酮成分的分析檢測(cè)：取自然風(fēng)干的紅三葉葉片0.1g，粉碎，用2mL乙醇浸泡，超聲波提取30分鐘。取上清液，通過(guò)0.45微米有機(jī)膜過(guò)濾，制備待測(cè)液。待測(cè)液用HPLC檢測(cè)。

HPLC檢測(cè)方法為：

流動(dòng)相A為0.2％醋酸水，流動(dòng)相B為色譜純甲醇。

色譜條件如下：0-5min 40％B；10-20min 70％B；35min 85％B；40min 100％B。

通過(guò)對(duì)四種主要的異黃酮成分進(jìn)行定量分析，比較處理1天和兩天的變化情況。其中變化幅度(％)＝(對(duì)照組-處理組)/對(duì)照組*100。

通過(guò)測(cè)定，紅三葉的株高和地上生物量沒(méi)有明顯變化。

照射1次后，除了了山槐素有少量的增加以外，其它異黃酮成分均有明顯降低，而且其中以鷹嘴豆素降幅為最大。在紅三葉異黃酮成分中芒柄花素和鷹嘴豆素含量較高，因此整體呈現(xiàn)出明顯的降幅。照射2次后，所有的異黃酮成分均有顯著降低，仍是鷹嘴豆素對(duì)UV-C響應(yīng)最為敏感，其含量降幅接近50％。

表1利用UV-C處理后紅三葉異黃酮成分含量變化情況

實(shí)施例2較長(zhǎng)時(shí)間UV-C處理紅三葉植株

1、紅三葉植株的處理：已培育8天紅三葉幼苗，利用15w的紫外燈(254nm)照射。每天照射時(shí)間15min/天，連續(xù)處理21天，處理之間間隔24小時(shí)。照射功率15w。紫外線照射時(shí)間：上午9:30-10:00；苗處理時(shí)間：18:00。

2、紅三葉異黃酮成分的分析檢測(cè)方法同實(shí)施例1。

表2利用UV-C處理21天后紅三葉異黃酮成分含量變化情況

表2利用UV-C處理21天后紅三葉生物量變化情況

利用UV-C長(zhǎng)時(shí)間照射紅三葉，雖然異黃酮含量有大幅度的下降，但是地上生物量有非常明顯的損失，加之時(shí)間延長(zhǎng)帶來(lái)的能量消耗和成本的增加，因此本專(zhuān)利建議最佳照射時(shí)間為1-3天，每次照射時(shí)間為10-30分鐘。

實(shí)施例3

處理紅三葉幼苗時(shí)，使用如圖1-3所示的一種用于快速降低紅三葉異黃酮的裝置，包括發(fā)出紫外光線的紫外光裝置1和用于支撐所述紫外光裝置1的燈架2，所述燈架2內(nèi)還設(shè)置有與所述紫外光裝置1相對(duì)應(yīng)腔體3，所述腔體3至少具有一與燈架2外圍空間連通敞開(kāi)部5，所述紫外光裝置1啟動(dòng)時(shí)，所述紫外光的光線穿過(guò)所述腔體3射向所述敞開(kāi)部5，所述敞開(kāi)部5的尺寸保證紅三葉植物能夠順利穿過(guò)。

在實(shí)際種植過(guò)程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用紫外光線照射紅三葉，紅三葉中異黃酮的含量顯著的降低，所以，在本申請(qǐng)中，通過(guò)設(shè)置燈架2，并在燈架2上設(shè)置紫外光裝置1，紫外光裝置1發(fā)出的紫外光線照射在腔體3內(nèi)，在使用時(shí)，紅三葉通過(guò)敞開(kāi)部5、或者置于腔體3時(shí)，使紅三葉受到紫外光線的照射，如此，實(shí)現(xiàn)紅三葉中異黃酮含量的降低，采用本申請(qǐng)的裝置，不僅能夠顯著并快速的降低紅三葉中異黃酮的含量，而且，還不會(huì)在紅三葉上殘留化學(xué)藥物，不僅有利環(huán)保，也能夠提高紅三葉作為飼料和牧草的品質(zhì)。

作為其中一種實(shí)施方式，所述敞開(kāi)部5位于所述腔體3的下側(cè)。將敞開(kāi)部5設(shè)置在下側(cè)，在種植場(chǎng)或者收集場(chǎng)中，紅三葉為鋪開(kāi)狀態(tài)，可以拖動(dòng)本申請(qǐng)的裝置即可，在拖動(dòng)本申請(qǐng)的裝置過(guò)程中，紅三葉逐步經(jīng)過(guò)腔體3被紫外光線照射，進(jìn)而使得紫外光線能夠快速的照射紅三葉，如此，提高照射效率。

所述燈架2外圍包覆有防紫外面料層6。通過(guò)設(shè)置防紫外面料層6，能夠有效的防止紫外光溢出。

作為其中一種實(shí)施方式，所述防紫外面料層6為尼龍防紫外面料層6或滌綸防紫外面料層6。尼龍防紫外面料層6或滌綸防紫外面料層6重量輕，并且質(zhì)地柔軟，方便裝置的制造和使用。

作為其中一種實(shí)施方式，所述防紫外面料層6與所述燈架2之間還設(shè)置有反光層7，所述反光層7將照射在其上的紫外光束朝敞開(kāi)部5反射。如此，提高紫外光線的利用率，進(jìn)一步提高了紅三葉被照射的效率。

作為其中一種實(shí)施方式，所述燈架2底部還設(shè)置有至少三個(gè)用于支撐起燈架2的支腿8，所述支腿8的高度與紅三葉植物的高度相對(duì)應(yīng)。保證本裝置拖動(dòng)時(shí)，紅三葉植物能夠順利經(jīng)過(guò)敞開(kāi)部5被紫外光線照射。

作為其中一種實(shí)施方式，每一個(gè)所述支腿8的底部都設(shè)置有滾輪4。方便本裝置的拖動(dòng)，也進(jìn)一步的提高了照射效率。

作為其中一種實(shí)施方式，至少有一個(gè)所述滾輪4為萬(wàn)向輪。方便本裝置拖動(dòng)過(guò)程中，方向的控制。

作為其中一種實(shí)施方式，所述紫外光裝置1為若干并排設(shè)置的紫外光管。

作為其中一種實(shí)施方式，所述紫外光管的功率為2瓦-100瓦。

作為其中一種實(shí)施方式，所述紫外光裝置1與所述燈架2之間為可拆卸的連接。通過(guò)可拆卸的設(shè)置多根紫外光管，能夠有效保證紫外光照射強(qiáng)度，提高照射效率。

本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，所利用的配套技術(shù)均成熟可靠，開(kāi)發(fā)成本低，易于實(shí)現(xiàn)，而且效果明顯，對(duì)環(huán)境友好，具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。