本發(fā)明涉及植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體說是一種大蘆薈的原種制作方法。

背景技術(shù)：

大蘆薈，別名龍角花、龍角蘆薈、鹿角蘆薈、蜈蚣掌，百合科，喜溫暖干燥和陽光充足環(huán)境，不耐寒，生長適溫20～30℃，冬季不低于5℃，低溫能促進(jìn)花芽形成，耐旱力強(qiáng)。可用分株、扦插繁殖或組織培養(yǎng)法(即組培法)繁殖。分株繁殖于3～4月份結(jié)合換盆進(jìn)行。取下母株周圍的幼株，按其大小分別上盆，如幼株帶根太少，可先在沙床中培養(yǎng)，待生根后上盆。扦插繁殖于5～6月開花后進(jìn)行，插條約15cm，除去基部兩片側(cè)葉，晾置一天后插于細(xì)沙或珍珠巖中，約20天可生根。

目前，大蘆薈的組培工藝通常包括：母本——原種制作——初代培養(yǎng)——初代切割與細(xì)菌檢測——增殖切割——過渡培養(yǎng)——生根培養(yǎng)——出貨。其中，原種制作是組培工藝中非常關(guān)鍵的一步?，F(xiàn)有的大蘆薈原種制作方法，通常采用以下步驟：

1、預(yù)處理：將選擇好的母株置于干燥、通風(fēng)良好的溫室苗床上，制種前10～15d停止?jié)菜⑹┓?，使其自然干燥，干燥程度由兩個(gè)方面判斷：1)基質(zhì)土層干燥，用手捏呈散沙狀，不粘手；2)植株萎蔫程度：整株呈重度萎蔫狀。

2、采種：將整株植株取出，剝下葉片，將頂芽處理為約15～20mm大?。蝗缓笥妹藁ㄕ礋o菌水(加洗潔精)擦洗葉片表面，特別葉片著生部位擦干凈；擦完再同頂芽用無菌水清洗一遍。

3、消毒：按葉片及頂芽的大小及老嫩程度進(jìn)行分類，放置于無菌空瓶中，每瓶5～8個(gè)外植體，用濃度為1wt‰的升汞水溶液進(jìn)行消毒(消毒時(shí)間：頂芽：15min；葉片：20min)，然后用無菌水清洗3～5遍(每次3～5min)，直至沒有泡沫。

4、培養(yǎng)：切去頂芽兩端被升汞腐蝕而變色部分(葉片不切)，接入培養(yǎng)基中(1個(gè)芽/瓶)進(jìn)行培養(yǎng)。

采用上述的大蘆薈原種制作方法，葉片經(jīng)過培養(yǎng)后并沒有芽的形成，說明該方法并不適合采用葉片作為外植體，而頂芽的成活率也只能達(dá)到80％左右，20％以上的頂芽在培養(yǎng)過程中會(huì)受到真、細(xì)菌污染而死亡，而且整個(gè)制作周期通常在3個(gè)月以上。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種適于采用葉片和頂芽作為外植體，無真、細(xì)菌污染，頂芽成活率可達(dá)100％，而且制作周期短的大蘆薈的原種制作方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

大蘆薈的原種制作方法，其特征在于，包括：

預(yù)處理：將母株置于20～30℃、相對濕度為15～20％、通風(fēng)良好的環(huán)境中晾3～8天，期間停止?jié)菜⑹┓剩?/p>

采種：將母株頂芽切下，剝除葉片，留頂芽15～20mm，得到的葉片和頂芽作為外植體用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水沖洗干凈，所述洗衣粉溶液由0.5～1重量份的洗衣粉與1000重量份的無菌水混合配制而成；

消毒：將外植體用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體被升汞腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上；

培養(yǎng)：控制培養(yǎng)時(shí)的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。

本發(fā)明的有益效果在于：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明加強(qiáng)了對母本的預(yù)處理和外植體的消毒，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝，整個(gè)制作周期可大大縮短至50～60天，頂芽萌動(dòng)時(shí)間僅需5～8天，葉片長芽時(shí)間只需8～13天，頂芽和葉片均無真、細(xì)菌污染現(xiàn)象，頂芽的成活率為100％，葉片的成活率可達(dá)50％以上。

具體實(shí)施方式

為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式予以說明。

本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于：加強(qiáng)對母本的預(yù)處理和外植體的消毒，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝。

具體的，本發(fā)明提供的大蘆薈的原種制作方法，包括：

預(yù)處理：將母株置于20～30℃、相對濕度為15～20％、通風(fēng)良好的環(huán)境中晾3～8天，期間停止?jié)菜?、施肥?/p>

采種：將母株頂芽切下，剝除葉片，留頂芽15～20mm，得到的葉片和頂芽作為外植體用洗衣粉溶液漂洗5～6min，然后用清水沖洗干凈，所述洗衣粉溶液由0.5～1重量份的洗衣粉與1000重量份的無菌水混合配制而成；

消毒：將外植體用升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用無菌水清洗干凈，然后切除外植體被升汞腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上；

培養(yǎng)：控制培養(yǎng)時(shí)的溫度為26±1℃，光照度為300～500lx。

其中，所述升汞水溶液的濃度為1～1.5wt‰。

其中，用升汞水溶液消毒25～30min后，用無菌水清洗3～5次，每次3～5min。

其中，所述培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中還加入有6ba，所述6ba的含量為0.8mg/l。

其中，所述培養(yǎng)基中還加入有zt，所述zt的含量為0.2mg/l。

其中，所述培養(yǎng)基中還加入有naa，所述naa的含量為0.3mg/l。

其中，所述培養(yǎng)基的ph值為6.0。

從上述描述可知，本發(fā)明的有益效果在于：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明加強(qiáng)了對母本的預(yù)處理和外植體的消毒，并優(yōu)化培養(yǎng)工藝，整個(gè)制作周期可大大縮短至50～60天，頂芽萌動(dòng)時(shí)間僅需5～8天，葉片長芽時(shí)間只需8～13天，頂芽和葉片均無真、細(xì)菌污染現(xiàn)象，頂芽的成活率為100％，葉片的成活率可達(dá)50％以上。

實(shí)施例1

1、材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

選取無病蟲害，植株比較鍵壯，發(fā)育成熟，無變異同時(shí)具有母本基本生長性狀的大蘆薈作為母本。經(jīng)預(yù)處理后，選取母株上出現(xiàn)輕度萎焉現(xiàn)象的頂芽和葉片作為外植體。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1試驗(yàn)步驟

制種前將引種的母本植株置于20～30℃、相對濕度為15～20％、通風(fēng)良好的環(huán)境中晾3～8天，期間停止?jié)菜?、施肥，待其植株葉片呈現(xiàn)萎蔫狀并且老葉出現(xiàn)黃化時(shí)便可進(jìn)行原種制作。將母株頂芽切下，剝除葉片，留頂芽15～20mm左右，用質(zhì)量濃度為0.5wt‰的洗衣粉溶液漂洗頂芽和葉片5～6分鐘，清水沖洗干凈，切口平滑。然后用質(zhì)量濃度為1.5wt‰的升汞水溶液消毒25～30min，消毒后用無菌水沖洗3～5次，每次3～5min，然后切除外植體被升汞腐蝕的部分，使外植體露出新鮮組織再接種到培養(yǎng)基上，1個(gè)/瓶。

1.2.2培養(yǎng)基

ms+6ba0.8mg/l+zt0.2mg/l+naa0.3mg/lph6.0

1.2.3培養(yǎng)條件

26±1℃300～500lx

1.2.4調(diào)查指標(biāo)

頂芽萌動(dòng)時(shí)間；葉片長芽時(shí)間；真、細(xì)菌污染率及死亡率；成活率

2結(jié)果與分析

2.1結(jié)果

該品種采用頂芽和葉片作為外植體，消毒時(shí)間為30min全部為頂芽，一共4個(gè)，無真、細(xì)菌污染以及死亡現(xiàn)象，成活率為100％；消毒時(shí)間為25min的全部為葉片，總共15個(gè)，無真、細(xì)菌污染，死亡5個(gè)，成活10個(gè)，成活率為67％。(具體見下表1)。

表1大蘆薈原種制作試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)表

從表1的記載可知，采用本發(fā)明的大蘆薈的原種制作方法，頂芽萌動(dòng)時(shí)間僅需5～8天，葉片長芽時(shí)間僅需8～13天，頂芽和葉片均無真、細(xì)菌污染現(xiàn)象，頂芽的成活率為100％，葉片的成活率為67％。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運(yùn)用在相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。