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      一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存及保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法與流程

      文檔序號(hào):12667219閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,從文心蘭新生長(zhǎng)的假鱗莖上剝?nèi)∏o尖,將其置于VW培養(yǎng)基輔以0.5~1mg/L 6-芐基腺嘌呤的原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)成原球莖,將原球莖進(jìn)行反復(fù)切割和繼代培養(yǎng),所采用的繼代培養(yǎng)基為VW培養(yǎng)基輔以0.2~0.4mg/L 6-芐基腺嘌呤,從而繁殖出所需數(shù)量的原球莖,然后采用VW培養(yǎng)基輔以2.5mg/L多效唑的離體保存培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),待原球莖進(jìn)入發(fā)育生長(zhǎng)階段后,在0~5℃條件下暗培養(yǎng)。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,所述莖尖的剝?nèi)》椒ㄈ缦拢哼x擇長(zhǎng)度為5~7cm的假鱗莖,用自來(lái)水清洗表面塵土,剝?nèi)プ钔鈱拥?~2個(gè)葉片,用體積濃度75%的酒精擦洗3~4秒,放入質(zhì)量濃度0.1%的升汞溶液中滅菌20分鐘,無(wú)菌水沖洗3~4次,晾干或用濾紙吸干表面水分,在顯微鏡下剝?nèi)〈笮〖s為0.5mm的莖尖。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,將莖尖置于試管或培養(yǎng)瓶中原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面,輕壓莖尖以接觸到原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的表面為宜,避免埋入,進(jìn)而引起窒息死亡,及時(shí)密封并做好標(biāo)記。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,原球莖的培養(yǎng)方法是:將莖尖在25℃,光照2000lux,每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)15天后,出現(xiàn)明顯膨大,30天后出現(xiàn)若干個(gè)白色突起,45天后,所述突起體積增大形成原球莖。

      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,反復(fù)切割和繼代培養(yǎng)的具體方法是:將生長(zhǎng)為4~6mg的原球莖切割成4塊,然后置于繼代培養(yǎng)基中繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng),建立無(wú)性繁殖系,反復(fù)切割和繼代培養(yǎng),從而短時(shí)間繁殖出所需數(shù)量的原球莖。

      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,所述發(fā)育生長(zhǎng)階段是選擇發(fā)育健壯、大小均勻的原球莖,置于離體保存培養(yǎng)基中,在25℃,光照2000lux,每天光照10小時(shí)的條件下培養(yǎng)7天。

      7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,暗培養(yǎng)階段應(yīng)當(dāng)定期觀察生長(zhǎng)情況,隨時(shí)剔除有污染的培養(yǎng)瓶。

      8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種文心蘭種質(zhì)資源離體保存方法,其特征在于,暗培養(yǎng)階段所使用的離體保存培養(yǎng)基,厚度約為4cm,并且,用于放置離體保存培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶應(yīng)當(dāng)密閉良好,以減少離體保存培養(yǎng)基中水分的揮發(fā)。

      9.權(quán)利要求1~8所述離體保存方法保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法,其特征在于,將暗培養(yǎng)中的原球莖轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上,由原球莖分化產(chǎn)生幼苗;所述分化培養(yǎng)基為KC培養(yǎng)基輔以質(zhì)量濃度10%的香蕉汁,培養(yǎng)溫度25℃,光照強(qiáng)度2000lux,每天光照時(shí)間為10小時(shí)。

      10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的保存后恢復(fù)生長(zhǎng)的方法,其特征在于,原球莖在分化培養(yǎng)基上接種30天后,在原球莖頂端部分出現(xiàn)由葉原基發(fā)育成的幼葉,隨后幼葉迅速生長(zhǎng),待出現(xiàn)第2~3片葉時(shí),原球莖向下伸長(zhǎng),并且有第1條根生出;50天后,等到幼苗有2~3條根,5~6片葉,生長(zhǎng)到10cm左右,發(fā)育成完整的植株,將試管苗移栽在育苗基質(zhì)中,在自然條件下生長(zhǎng)成正常植株。

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