本發(fā)明涉及植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種椴樹的組織培養(yǎng)基及其快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
歐洲小葉鍛(tiliagreenspire)，屬于椴樹科椴樹屬，椴樹葉片能夠變色，比較粗糙，抗煙塵和有毒氣體能力強(qiáng)，木材優(yōu)良，是世界上最流行的庭蔭樹及行道樹之一，但是目前我國(guó)椴樹大多是野生的，椴樹作為行道樹仍處于起步階段，人工繁殖栽培很少，隨著城鎮(zhèn)園林業(yè)的發(fā)展，目前國(guó)內(nèi)椴樹苗木需求量大，供不應(yīng)求。
椴樹種子由于種皮硬骨質(zhì)不透性、胚休眠以及存在種子內(nèi)抑制物，造成椴樹種子發(fā)芽率很低、出苗不齊，同時(shí)椴樹花雄蕊先熟因而自花幾乎不育，異花授粉，結(jié)實(shí)率也較低，一般不超過(guò)10％。另外在國(guó)內(nèi)外，椴樹的組織培養(yǎng)研究較少，不能適應(yīng)工廠化大規(guī)模生產(chǎn)。
利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育椴樹種苗，繁殖周期短，效率高，成本低，可在短時(shí)間內(nèi)工廠化生產(chǎn)大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，因此通過(guò)選擇合適的培養(yǎng)基類型，搭配合理的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，確定適宜的培養(yǎng)溫度，光照等條件，對(duì)于椴樹組織培養(yǎng)與快速擴(kuò)繁體系的建立，具有重要意義。
目前，公開(kāi)號(hào)為cn105746106a的中國(guó)專利公開(kāi)了一種南京椴的繁殖方法，它包括五個(gè)步驟來(lái)完成繁育，步驟(一)：當(dāng)種子成熟時(shí)即可采集，種子采回后采用“推曬脫?！钡姆椒ㄟM(jìn)行處理；步驟(二)：種子的貯藏通常采用“通風(fēng)干藏”、“低溫貯藏”與“潤(rùn)砂貯藏”三種方法；步驟(三)：種子催芽處理，將種子浸在10到20℃的水中4到6小時(shí)，播種前利用0.5％含量的高錳酸鉀溶液浸泡1到2小時(shí)，然后通過(guò)條播的方式以30乘以15厘米為間距進(jìn)行播種；步驟(四)：將處理號(hào)的嫩枝利用現(xiàn)有技術(shù)扦插在插床中，插床呈弓形，用塑料膜釜蓋，采用棚外遮陰和噴水降溫，棚內(nèi)光強(qiáng)為全日照的20％到40％，棚內(nèi)相對(duì)濕度保持在80％到90％；步驟(五)：將生長(zhǎng)期滿半年的樹苗移栽到大田內(nèi)。
這種南京椴的繁殖方法雖然通過(guò)五個(gè)步驟來(lái)解決對(duì)南京椴進(jìn)行培育繁殖，但是依然無(wú)法解決種子在生長(zhǎng)過(guò)程中活力低，萌芽率低的問(wèn)題，因此應(yīng)當(dāng)需要有合適的培養(yǎng)基以及環(huán)境調(diào)節(jié)，從而可以使得椴樹可以快速繁殖生長(zhǎng)，來(lái)解決椴樹生長(zhǎng)過(guò)程繁殖育苗難，誘導(dǎo)難，生根難的問(wèn)題，從而可以進(jìn)行規(guī)?；⒐S化育苗。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種椴樹的組織培養(yǎng)基，其具有利用椴樹休眠腋芽誘導(dǎo)叢生芽的組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)椴樹進(jìn)行快速培養(yǎng)繁殖，增殖率較高，同時(shí)生根率較好，可以有效節(jié)約成本，進(jìn)行大規(guī)模的快速增殖，使得椴樹可以進(jìn)行大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4630～4640mg；塞苯隆tdz：0.001～0.010mg；赤霉素：2～3mg；瓊脂：5～8g；蔗糖：25～40g；肌醇：90～110mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4630～4640mg；塞苯隆tdz：0.001～0.010mg；赤霉素：2～3mg；瓊脂：5～8g；蔗糖：25～40g；肌醇：90～110mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2315～2320mg；吲哚丁酸iba：1.0mg～2.0mg；萘乙酸naa：1.0mg～2.0mg；瓊脂：5～8g；蔗糖：10～20g；加入水補(bǔ)足至1升。
作為優(yōu)選：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.5mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升；所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.0mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升；所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：1.5mg；萘乙酸naa：1.5mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，ms培養(yǎng)基是目前使用最普遍的培養(yǎng)基，其具有較高的無(wú)機(jī)鹽濃度，能夠保證組織生長(zhǎng)所需的礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長(zhǎng)。由于配方中的離子濃度高，在配制、貯存和消毒等過(guò)程中，即使有些成分略有出入，也不會(huì)影響離子間的平衡，而tdz作為一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有很強(qiáng)的細(xì)胞分裂素活性，它的細(xì)胞分裂素活性要比一般植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的細(xì)胞分裂素活性高幾十倍至幾百倍，因此可以促進(jìn)植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眼，促進(jìn)種子萌發(fā)，促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)，延緩植物衰老等。并且可以對(duì)其它的植物激素和生理活性物質(zhì)的作用來(lái)調(diào)節(jié)植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。而赤霉素主要用于加速細(xì)胞的生長(zhǎng)，提高植物體內(nèi)生長(zhǎng)素的含量，而生長(zhǎng)素直接調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞的分裂也有促進(jìn)作用，可以促進(jìn)細(xì)胞的擴(kuò)大，除此之外，赤霉素還有著抑制成熟，側(cè)芽休眠，衰老，塊莖形成的生理作用。瓊脂作為凝固劑來(lái)將液體培養(yǎng)基轉(zhuǎn)化為固體培養(yǎng)基或半固體培養(yǎng)基。加入瓊脂的固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比優(yōu)點(diǎn)在于操作簡(jiǎn)便，通氣問(wèn)題易于解決，便于經(jīng)常觀察研究，而蔗糖則作為培養(yǎng)基的標(biāo)準(zhǔn)碳源，供給細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的養(yǎng)分。吲哚丁酸iba主要用于促進(jìn)植物主根生長(zhǎng)，提高發(fā)芽率，成活率，用于促使外植體生根，而萘乙酸naa同樣作為一種激素可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，外植體啟動(dòng)生長(zhǎng)的關(guān)鍵主要是培養(yǎng)基的激素配比與濃度，一般應(yīng)使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和較低濃度的生長(zhǎng)素，能夠解除頂端優(yōu)勢(shì)的抑制作用，誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽。生長(zhǎng)素濃度過(guò)高容易產(chǎn)生愈傷組織；激素配比適當(dāng)，則莖尖向上生長(zhǎng)成無(wú)根苗。而通過(guò)誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)細(xì)胞愈傷組織再生，通過(guò)增殖培養(yǎng)基使得外植體生長(zhǎng)出頂芽，最后通過(guò)生根培養(yǎng)基使得頂芽生根從而保證成活。
本發(fā)明的另一目的是提供一種椴樹的快速繁殖方法，其具有利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育椴樹種苗，繁殖周期短，效率高，成本低，可在短時(shí)間內(nèi)工廠化生產(chǎn)大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的上述技術(shù)目的是通過(guò)以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
一種椴樹的快速繁殖方法，包括如下培養(yǎng)步驟：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹當(dāng)年生枝條、芽體飽滿飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h。培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，莖尖是植物組織培養(yǎng)常用的外植體。這是因?yàn)榍o尖不僅生長(zhǎng)速度快，繁殖率高，不易產(chǎn)生遺傳變異，而且是獲得脫病毒苗木的有效途徑，因此外植體選用健康椴樹當(dāng)年生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分。將選取好的外植體以及對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境和使用器具進(jìn)行有效的清潔消毒，減少空氣中的細(xì)菌、病毒以及操作時(shí)帶來(lái)的細(xì)菌感染外植體，從而影響實(shí)驗(yàn)的成功率，因此通過(guò)酒精以及消毒液的浸泡對(duì)外植體進(jìn)行有效的消毒，當(dāng)外植體出現(xiàn)新梢時(shí)將其放置入增殖培養(yǎng)基內(nèi)，進(jìn)行細(xì)胞的增殖，從而生長(zhǎng)出頂芽，經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的健壯椴樹組培苗，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基完成生根培養(yǎng)，由于通常植物的體液ph值在5.80左右，因此培養(yǎng)基調(diào)配時(shí)溶液ph值控制在5.80左右，而在這個(gè)ph值下加入的瓊脂成白色凝固性較好，若ph值過(guò)低培養(yǎng)基無(wú)法凝固了，過(guò)高則凝固過(guò)硬。
進(jìn)一步設(shè)置：所述消毒液包括如下組分：漂白水1份及3份無(wú)菌水。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，通過(guò)使用白貓漂白水制作的消毒液，可以有效的對(duì)外植體進(jìn)行消毒殺菌。
進(jìn)一步設(shè)置：所述s3中培養(yǎng)環(huán)境為在光照強(qiáng)度1500lx，溫度為25℃，光照時(shí)間16小時(shí)，在黑暗條件，溫度為23℃，放置時(shí)間8小時(shí)。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，光周期實(shí)行連續(xù)16h光照、8h黑暗，有利于莖尖培養(yǎng)和芽的分化與增殖。增強(qiáng)光照有利于試管苗生根，且對(duì)于試管苗移栽有良好的作用，但不可光照強(qiáng)度過(guò)強(qiáng)，一旦長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)光直接照射根部，會(huì)抑制根的生長(zhǎng)。
進(jìn)一步設(shè)置：所述培養(yǎng)基均經(jīng)過(guò)滅菌處理，將配置好的培養(yǎng)基放置在滅菌鍋內(nèi)，在0.105mpa壓力，溫度為121℃的情況下，滅菌15～30min
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，不僅需要對(duì)外植體進(jìn)行有效的滅菌處理，更需要針對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理，減少由于操作過(guò)程中沾染的細(xì)菌污染培養(yǎng)基。
進(jìn)一步設(shè)置：所述培養(yǎng)基內(nèi)還添加有抗氧化劑，所述抗氧化劑為半胱氨酸或抗壞血酸。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。
進(jìn)一步設(shè)置：所述培養(yǎng)基內(nèi)還添加有0.1～0.5g的活性炭。
通過(guò)采用上述技術(shù)方案設(shè)置，活性炭由于其本身為吸附性較強(qiáng)的吸附劑，可以更好的減輕外植體的褐變現(xiàn)象。
綜上所述，本發(fā)明具有以下有益效果：使用本方法消毒，具有較好的消毒成功率，同時(shí)配合誘導(dǎo)培養(yǎng)基，外植體萌芽成功率較高，可以有效的建立起無(wú)菌再生體系，而使用該方法最終獲得的椴樹組培苗增殖成功率較高，根系發(fā)達(dá)。
附圖說(shuō)明
圖1是椴樹的快速繁殖方法流程示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，如圖1所示，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4630mg；塞苯隆tdz：0.001mg；赤霉素：2g；瓊脂：5g；蔗糖：25g；肌醇：90mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4630mg；塞苯隆tdz：0.001mg；赤霉素：2mg；瓊脂：5g；蔗糖：25g；肌醇：90mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2315mg；吲哚丁酸iba：1.0mg；萘乙酸naa：1.0mg；瓊脂：5g；蔗糖：10g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例2：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4640mg；塞苯隆tdz：0.010mg；赤霉素：3mg；瓊脂：8g；蔗糖：40g；肌醇：110mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4640mg；塞苯隆tdz：0.010mg；赤霉素：3mg；瓊脂：8g；蔗糖：40g；肌醇：110mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2320mg；吲哚丁酸iba：2.0mg；萘乙酸naa：2.0mg；瓊脂：8g；蔗糖：20g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例3：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.5mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.0mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：1.5mg；萘乙酸naa：1.5mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例4：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.008mg；赤霉素：2.9g；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.008mg；赤霉素：2.9mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：1.8mg；萘乙酸naa：1.8mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例5：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.002mg；赤霉素：2.1g；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.002mg；赤霉素：2.1mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：1.1mg；萘乙酸naa：1.1mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例6：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.0g；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.0mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：1.5mg；萘乙酸naa：2mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
實(shí)施例7：一種椴樹的組織培養(yǎng)基，包括誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基，
所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.5g；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述增殖培養(yǎng)基包括如下組份：ms培養(yǎng)基：4636.43mg；塞苯隆tdz：0.005mg；赤霉素：2.0mg；瓊脂：6g；蔗糖：30g；肌醇：100mg，加入水補(bǔ)足至1升，所述生根培養(yǎng)基包括如下組份：2318.22mg；吲哚丁酸iba：：2mg；萘乙酸naa：1.5mg；瓊脂：6g；蔗糖：15g；加入水補(bǔ)足至1升。
一種椴樹的快速繁殖方法，如圖1所示：
s1：選用外植體，外植體選用健康椴樹生枝芽飽滿的半木質(zhì)化枝條莖尖部分；
s2：消毒及初代培養(yǎng)，將椴樹外植體葉片剪去，清水沖洗干凈，在工作臺(tái)上把沖洗過(guò)的外植體放入濃度為75％的酒精中消毒30秒，再用無(wú)菌水沖洗3～4次，將外植體放置在消毒液中浸泡60分鐘，完成消毒后，將外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)；在光照強(qiáng)度1500lx條件下，溫度16℃，暗光培養(yǎng)1周，后轉(zhuǎn)溫度23℃，光照時(shí)間16h，培養(yǎng)6周。
s3：繼代培養(yǎng)：在誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)30～40天內(nèi)，外植體莖尖出現(xiàn)新梢時(shí)將外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基內(nèi)，在一定的培養(yǎng)環(huán)境下，每隔四周轉(zhuǎn)接到新的增殖培養(yǎng)基內(nèi)；
s4：生根培養(yǎng)：經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)的椴樹組培苗，外植體出現(xiàn)頂芽時(shí)，取2～3cm的頂芽，放入生根培養(yǎng)基，直至生根完成培養(yǎng)。
將上述實(shí)施例1至實(shí)施例7在對(duì)外植體消毒后進(jìn)行病毒檢測(cè)，同時(shí)觀察外植體放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基后新梢生長(zhǎng)情況，放入增殖培養(yǎng)基后增殖倍率，放入生根培養(yǎng)基后的頂芽的生根率及生根系數(shù)進(jìn)行分析對(duì)比，結(jié)果如下表所示：
從上表可以得出，通過(guò)較為合適的配比誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基，可以快速繁殖椴樹，椴樹的生根率達(dá)到90％以上，同時(shí)生根系數(shù)達(dá)到4根以上，同時(shí)通過(guò)觀察可以發(fā)現(xiàn)根系都較為發(fā)達(dá)，健壯，同時(shí)增殖倍率在3～5倍左右，完全適合椴樹的工廠化生產(chǎn)，有利于大規(guī)模生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)椴樹種苗。
本具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的解釋，其并不是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完本說(shuō)明書后可以根據(jù)需要對(duì)本實(shí)施例做出沒(méi)有創(chuàng)造性貢獻(xiàn)的修改，但只要在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)都受到專利法的保護(hù)。