本發(fā)明屬于植物種子保存及萌發(fā)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種促進(jìn)低溫(-18℃至-20℃)保存后白楸種子萌發(fā)的方法。
背景技術(shù)：
白楸(mallotuspaniculatus(lam.)muell.arg.)是大戟科(euphorbiaceae)野桐屬(mallotuslour.)灌木或喬木樹種。主要分布于云南、貴州、廣西、廣東、海南、福建和臺灣等省。以根入藥，味微苦、澀，性平，具有消熱利濕、止痛、解毒等功效，廣西民間常用于治療痢疾、子宮脫垂、中耳炎等；其樹皮纖維可制麻繩和麻布袋，從果實(shí)提煉出來的油則可作工業(yè)用途。目前未見其種子萌發(fā)及種子儲藏特性方面的報道。
將正常型種子干燥后低溫(-18℃至-20℃)保藏可以極大的延長其壽命，這在國際上已經(jīng)形成共識，并且基于這一理論建立了多個農(nóng)作物及野生植物種子庫；但一些植物的種子在干燥和/或冷藏后萌發(fā)特性會發(fā)生變化，如本發(fā)明所涉及的白楸種子低溫(-18℃至-20℃)保存一段時間后則幾乎完全不能萌發(fā)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中在低溫(-18℃至-20℃)保存一段時間后的白楸種子幾乎完全不能萌發(fā)的技術(shù)難題，提供一種簡便高效萌發(fā)低溫保存后白楸種子的方法。為實(shí)現(xiàn)該物種的長期有效保存及利用提供技術(shù)支持。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
一種促進(jìn)低溫保存后白楸種子萌發(fā)的方法，包括如下步驟：
(1)將在-18℃至-20℃冷藏保存后的種子連同其密閉容器取出，在溫度為15℃、相對濕度15％的環(huán)境中放置24小時回溫；
(2)將回溫后的種子從密閉容器中取出，放置在溫度為60℃的培養(yǎng)箱中，熱處理6小時后取出；
(3)將步驟(2)處理后的種子放置在室溫下，待種子溫度恢復(fù)到室溫后播種于含200毫克/升赤霉素的1％瓊脂培養(yǎng)基中，放置于20℃下萌發(fā)，光照強(qiáng)度為1000勒克斯，光周期為12小時光照/12小時黑暗。
根據(jù)所述的一種促進(jìn)低溫保存后白楸種子萌發(fā)的方法，其中所述步驟(1)在-18℃至-20℃冷藏保存的種子是采集成熟飽滿的種子，先將種子置于溫度為15℃、相對濕度15％的環(huán)境中直到種子的平衡相對濕度達(dá)到15％(此時種子的含水量通常低于10％)，然后再將種子放入密閉容器中，保存于-18℃至-20℃。
本發(fā)明為一種促進(jìn)低溫保存后白楸種子萌發(fā)的方法，更具體的步驟是：
采集成熟飽滿的種子，將種子置于溫度為15℃、相對濕度15％的環(huán)境中，至種子的平衡相對濕度達(dá)到15％時，將種子放入密閉容器，保存于-18℃至-20℃中，以上為國際通用的正常型種子保存方法。種子保存一段時間后，根據(jù)需要，將裝有種子的密閉容器取出，在溫度為15℃、相對濕度15％的環(huán)境中；隨后將種子從容器中取出，放置在溫度為60℃的培養(yǎng)箱中，熱處理6小時后取出；待種子恢復(fù)到室溫后播種于含200毫克/升赤霉素的1％瓊脂培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基放置于20℃下萌發(fā)，光照強(qiáng)度為1000勒克斯，光周期為12小時光照/12小時黑暗。
具體實(shí)施方式
下面用本發(fā)明實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。
實(shí)施例1：
1.材料和方法：
1.1研究材料：
2014年1月，云南普洱思茅區(qū)大開河村采集成熟的新鮮白楸(mallotuspaniculatus)種子。采集后運(yùn)回昆明植物研究所西南野生生物種質(zhì)資源庫種子保藏中心。
1.2研究方法：
1.2.1干燥冷藏及冷藏后的回溫：將1.1步驟采集到的種子置于15℃，15％相對濕度的干燥間中干燥。定期以rotronicltd.公司生產(chǎn)的hygrolabc1unit相對濕度測定儀結(jié)合同一公司生產(chǎn)的rotronichc2-aw探頭對種子相對濕度進(jìn)行測定，待平衡相對濕度達(dá)到15％后裝入密閉的容器中。2014年12月將裝有種子的密閉容器放入-18℃至-20℃冷藏。冷藏處理2年2個月后將裝有種子的密閉容器取出。放入15℃，15％相對濕度的干燥間中回溫24小時后打開裝有種子的容器，隨機(jī)取出實(shí)驗(yàn)所需種子。
1.2.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：將種子分為2組處理，分別為對照組和熱處理組；熱處理溫度設(shè)置45、60、和70℃三個梯度，處理時間均為6小時。每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)20粒種子。
1.2.3熱處理方法：將種子放入培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱溫度設(shè)定為45、60、和70℃。處理6小時后取出60粒種子用于萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。
1.2.4萌發(fā)：將種子播種于含有200毫克每升赤霉素的1％瓊脂培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基裝入透明自封袋中防止水分散失，然后置于于20℃的光照培養(yǎng)箱中，光照強(qiáng)度為1000勒克斯，光周期為12小時光照/12小時黑暗。每間隔2-3天檢查一次萌發(fā)，胚根伸長超過5mm即認(rèn)為種子萌發(fā)，將萌發(fā)種子取出，并記錄萌發(fā)數(shù)量；實(shí)驗(yàn)開始4周后連續(xù)2周無萌發(fā)即結(jié)束實(shí)驗(yàn)。
1.2.5數(shù)據(jù)分析：利用spss16.0軟件對萌發(fā)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用one-wayanova進(jìn)行方差分析，并用s-n-k法對不同處理的萌發(fā)率做多重比較。
2.結(jié)果
2.1不同熱處理穩(wěn)定對冷藏后云南普洱白楸種子萌發(fā)的影響。
表1不同熱處理溫度對冷藏后云南普洱白楸種子萌發(fā)率(％)的影響
注：數(shù)字為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，不同字母表示不同處理間的萌發(fā)率具有顯著差異
由表1可以看出，-20℃下冷藏2年2個月的白楸種子，未經(jīng)熱處理的萌發(fā)率為0；45℃的熱處理沒有效果，60℃熱處理6小時后萌發(fā)率得到顯著提高，可達(dá)26.7％，70℃處理后萌發(fā)率下降為0。因此60℃處理6小時是比較好的處理方法,在以下具體實(shí)施例2中采用60℃處理6小時的方法。
實(shí)施例2：
1.材料和方法：
1.1研究材料：
2007年12月07日，云南文山麻栗坡南溫河鎮(zhèn)采集成熟的新鮮白楸(mallotuspaniculatus)種子。采集后運(yùn)回昆明植物研究所西南野生生物種質(zhì)資源庫種子保藏中心。
1.2研究方法：
1.2.1干燥冷藏及冷藏后的回溫：將1.1采集到的種子置于15℃，15％相對濕度的干燥間中干燥。定期以rotronicltd.公司生產(chǎn)的hygrolabc1unit相對濕度測定儀結(jié)合同一公司生產(chǎn)的rotronichc2-aw探頭對種子相對濕度進(jìn)行測定，待平衡相對濕度達(dá)到15％后裝入密閉的容器中。2009年9月將裝有種子的密閉容器放入-18℃至-20℃冷藏。冷藏7年零5個月后將裝有種子的容器取出。放入15℃，15％相對濕度的干燥間中回溫24小時后打開裝有種子的容器，隨機(jī)取出實(shí)驗(yàn)所需種子。
1.2.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：將種子分為2組處理，分別為對照組和熱處理組；熱處理溫度設(shè)置60℃，處理時間為6小時。每個處理3個重復(fù)，每個重復(fù)20粒種子。
1.2.3熱處理方法：將種子放入培養(yǎng)箱，培養(yǎng)箱溫度設(shè)定為60℃。處理6小時后取出60粒種子用于萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。
1.2.4萌發(fā)：將種子播種于含有200毫克每升赤霉素的1％瓊脂培養(yǎng)基上，將培養(yǎng)基裝入透明自封袋中防止水分散失，然后置于20℃的光照培養(yǎng)箱中，光照強(qiáng)度為1000勒克斯，光周期為12小時光照/12小時黑暗。每間隔2-3天檢查一次萌發(fā)，胚根伸長超過5mm即認(rèn)為種子萌發(fā)，將萌發(fā)種子取出，并記錄萌發(fā)數(shù)量；實(shí)驗(yàn)開始4周后連續(xù)2周無萌發(fā)即結(jié)束實(shí)驗(yàn)。
1.2.5數(shù)據(jù)分析：利用spss16.0軟件對萌發(fā)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用one-wayanova進(jìn)行方差分析。
2.結(jié)果
2.1熱處理方法對冷藏后云南文山麻栗坡白楸種子萌發(fā)的影響。
表2熱處理對冷藏后云南麻栗坡白楸種子萌發(fā)率(％)的影響
注：數(shù)字為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，不同字母表示不同處理間的萌發(fā)率具有顯著差異
由表2可以看出，-20℃下冷藏7年零5個月的白楸種子，未經(jīng)熱處理的萌發(fā)率為0；經(jīng)60℃熱處理后，萌發(fā)率達(dá)6.7％；該份種子儲存時間較長(冷藏超過7年，采集到實(shí)驗(yàn)相隔超過9年)，活力可能已比較低，因此萌發(fā)率也較低；雖然效果不甚理想，但與完全不能萌發(fā)的對照相比也有顯著差異；因此該方法對白楸種質(zhì)資源的保存和利用有積極的意義。
3、本發(fā)明的積極效果如下：
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明顯著提高了不同產(chǎn)地(云南普洱及文山)，干燥后低溫(-18℃至-20℃)下儲存不同時間(2年2個月及7年5個月)的白楸種子的萌發(fā)。較好的解決了白楸種子低溫保藏后不能萌發(fā)的問題。且處理方法簡便易行，60℃處理6小時即有顯著效果，而且無任何危險性及毒副作用。