本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛的栽培方法，特別是一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法。

背景技術(shù)：

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內(nèi)障等方面均有良好療效。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強(qiáng)作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內(nèi)障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學(xué)成分較復(fù)雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯(lián)芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。石斛堿型倍半萜類生物堿為石斛屬植物特有，其中石斛堿是最早發(fā)現(xiàn)，研究最多的生物堿；金釵石斛堿與非甾體類抗炎藥藥理作用相似，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、擴(kuò)張血管等作用。

隨著鐵皮石斛的保健功效被人們廣泛的認(rèn)識和接受，野生鐵皮石斛已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。人們已經(jīng)開始采用人工栽培鐵皮石斛，鐵皮石斛的栽培方法中，培養(yǎng)基是鐵皮石斛賴以生存的條件，不同的培養(yǎng)原料和配方可對鐵皮石斛的生長、產(chǎn)量和活性成分等產(chǎn)生重要的影響?，F(xiàn)有技術(shù)中鐵皮石斛用的培養(yǎng)基及現(xiàn)有栽培方法，不利于產(chǎn)出的鐵皮石斛的品質(zhì)保證。特別是不能保證鐵皮石斛中石斛堿含量，使得最終得到的鐵皮石斛中石斛堿含量低。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的，是提供一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，本發(fā)明方法培養(yǎng)鐵皮石斛時，最終產(chǎn)出的鐵皮石斛品質(zhì)好，有效成分含量高，特別是石斛堿的含量的高。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。

一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，包括以下步驟：

(1)選苗：選擇肉質(zhì)莖有3～4個節(jié)間、長有4～5片葉，根長3cm以上，有4-5條根，根皮色白中帶綠，無黑色根，無畸形，無變異的鐵皮石斛幼苗；

(2)幼苗處理：將鐵皮石斛幼苗根部進(jìn)行清洗3-4次后，將幼苗根部置于1000mg/l的吲哚乙酸中浸泡20-30min后，得處理后的鐵皮石斛幼苗；

(3)大棚建設(shè)：搭建寬6-8米，長28-32米，棚肩高110-120米，棚頂高3-4min的種植大棚，棚頂覆蓋塑料無滴薄膜好70-80％遮陰度的遮陰網(wǎng)，棚內(nèi)安裝自來水管，大棚四周和入口裝有30-40目的防蟲網(wǎng)；棚內(nèi)搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設(shè)孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質(zhì)支撐面，畦底架空高度為30-50cm，然后在畦面上鋪設(shè)8-12cm的基質(zhì)；

(4)移栽：移栽時間為3月，在種植畦的基質(zhì)上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內(nèi)，然后用基質(zhì)蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)溫濕度控制：保證大棚內(nèi)溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后10-15天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)肥水管理：控制基質(zhì)正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10-15天噴1次水，可每15-20天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)病蟲害防治：每月用40％樂果乳油1000倍水溶液或50％馬拉硫磷1000倍水溶液噴施進(jìn)行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)；

(8)采收：11月至次年4月份間進(jìn)行采收，剪大留小，剪老留嫩。

前述的石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述步驟(3)中，所述基質(zhì)主要由按重量份計算的土豆泥10-20份、尿素1-5份、五氧化二磷1-5份、磷酸氫二胺1-5份、四硼酸鈉1-3份、肉桂10-20份、巴戟天10-20份、半邊蓮20-30份、姜夏15-25份、黃連15-25份、麥冬10-20份、生地10-20份、山茱萸15-25份、丹參15-25份、西洋參10-20份、桃仁20-30份、牡丹皮20-30份和葛根20-30份按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加8-12倍量的水煎煮3-5h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得。

前述的石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述基質(zhì)主要由按重量份計算的土豆泥12-18份、尿素2-4份、五氧化二磷2-4份、磷酸氫二胺2-4份、四硼酸鈉2-3份、肉桂12-18份、巴戟天12-18份、半邊蓮22-28份、姜夏17-23份、黃連17-23份、麥冬12-18份、生地12-18份、山茱萸17-23份、丹參17-23份、西洋參12-18份、桃仁23-27份、牡丹皮23-27份和葛根23-27份按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加8-12倍量的水煎煮3-5h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得。

前述的石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，所述基質(zhì)主要由按重量份計算的土豆泥15份、尿素3份、五氧化二磷3份、磷酸氫二胺3份、四硼酸鈉2.5份、肉桂15份、巴戟天15份、半邊蓮25份、姜夏20份、黃連20份、麥冬15份、生地15份、山茱萸20份、丹參20份、西洋參15份、桃仁25份、牡丹皮25份和葛根25份按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加8-12倍量的水煎煮3-5h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得。

申請人對本發(fā)明進(jìn)行了大量的實驗研究，部分實驗如下：

實驗例1石斛堿含量考察.

1材料與方法

1.1材料

1.1.1鐵皮石斛1：按實施例1進(jìn)行栽培，采收得到鐵皮石斛1。

1.1.2鐵皮石斛2：栽培時，基質(zhì)中不含肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，其余方法同實施例1進(jìn)行栽培后，采收得到鐵皮石斛2。

1.2儀器和試劑

石斛堿標(biāo)準(zhǔn)品：成都曼思特生物技術(shù)有限公司，must-12080608。ae240電子天平：瑞士meitler；hh-s數(shù)控恒溫水浴鍋：金華市文華科教實驗儀器廠；bm510旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：日本yamato公司；6890n氣相色譜儀：美國安捷倫公司；uv-2450紫外分光光度計：日本島津公司；甲醇(色譜純)：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；其余試劑均為分析純；苯酚：上海凌峰化學(xué)試劑有限公司；硫酸：上海凌峰化學(xué)試劑有限公司。

2方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.1供試品溶液1的制備：

取本發(fā)明鐵皮石斛(鐵皮石斛1)樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末3.34g，加200ml90％乙醇，回流1小時，過濾，傾出上清液，再加100ml90％乙醇，回流1小時，傾出上清液，合并上述2次上清液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，水浴鍋50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25ml，即得供試品溶液1。

2.1.2供試品溶液2的制備

取鐵皮石斛2樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末3.34g，加200ml90％乙醇，回流1小時，過濾，傾出上清液，再加100ml90％乙醇，回流1小時，傾出上清液，合并上述2次上清液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，水浴鍋50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25ml，即得供試品溶液2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取石斛堿對照品50.01lmg至100ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得500.1mg/l石斛堿對照品母液。50.01mg/l溶液，作為對照品溶液，備用。

2.3色譜條件

色譜柱：db-1毛細(xì)管柱(30mm×0.25mm，0.25um)；程序升溫：初始溫度為80℃，以10℃/min的速率升溫至250℃，保持5分鐘；進(jìn)樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃，進(jìn)樣量10ul，理論塔板數(shù)按石斛堿計，不低于10000。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定。以峰面積積分為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為a＝0.7522c-0.0252，r＝0.9997，表明石斛堿在0.10-2.00ug范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗

精密吸取石斛堿對照品溶液l0ul，連續(xù)6次進(jìn)樣，記錄峰面積，石斛堿峰面積的rsd為1.58％，表明儀器精密度良好。

2.6重復(fù)性試驗

按上述方法制備6份供試品溶液1和供試品溶液2，按上述色譜條件進(jìn)行測定。石斛堿峰面積的rsd分別為2.05％和2.06％。

2.7穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液1，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、l2小時進(jìn)樣，記錄石斛堿峰面積，rsd為2.88％。結(jié)果表明，供試品溶液1在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

取同一供試品溶液2，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、l2小時進(jìn)樣，記錄石斛堿峰面積，rsd為2.89％。結(jié)果表明，供試品溶液2在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8回收率試驗

取已知含量0.46mg/g)的鐵皮石斛粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準(zhǔn)確加入石斛堿對照品母液2ml，按上述方法制備供試品溶液1和供試品溶液2，在上述色譜條件下進(jìn)行測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率為97.1％和96.8％，rsd分別為2.5％和2.6％。

2.9樣品含量測定

按上述供試品溶液1和供試品溶液2的制備方法和測定條件，分成6份，測定6份鐵皮石斛1樣品和6份鐵皮石斛2樣品中石斛堿的含量，記錄結(jié)果，結(jié)果取平均值，結(jié)果見表1。

表1石斛堿含量測定結(jié)果

由表可知，本發(fā)明方法栽培得到的鐵皮石斛，最終采收的鐵皮石斛中石斛堿的含量較高。鐵皮石斛的品質(zhì)好。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法培養(yǎng)鐵皮石斛時，最終產(chǎn)出的鐵皮石斛品質(zhì)好，有效成分含量高，特別是石斛堿的含量的高。

具體實施方式

實施例1。

一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，包括以下步驟：

(1)選苗：選擇肉質(zhì)莖有3～4個節(jié)間、長有4～5片葉，根長3cm以上，有4-5條根，根皮色白中帶綠，無黑色根，無畸形，無變異的鐵皮石斛幼苗；

(2)幼苗處理：將鐵皮石斛幼苗根部進(jìn)行清洗3次后，將幼苗根部置于1000mg/l的吲哚乙酸中浸泡25min后，得處理后的鐵皮石斛幼苗；

(3)大棚建設(shè)：搭建寬6-8米，長30米，棚肩高115米，棚頂高3.5min的種植大棚，棚頂覆蓋塑料無滴薄膜好75％遮陰度的遮陰網(wǎng)，棚內(nèi)安裝自來水管，大棚四周和入口裝有40目的防蟲網(wǎng)；棚內(nèi)搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設(shè)孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質(zhì)支撐面，畦底架空高度為30-50cm，然后在畦面上鋪設(shè)8-12cm的基質(zhì)；所述基質(zhì)由土豆泥15kg、尿素3kg、五氧化二磷3kg、磷酸氫二胺3kg、四硼酸鈉2.5kg、肉桂15kg、巴戟天15kg、半邊蓮25kg、姜夏20kg、黃連20kg、麥冬15kg、生地15kg、山茱萸20kg、丹參20kg、西洋參15kg、桃仁25kg、牡丹皮25kg和葛根25kg按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加10倍量的水煎煮4h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得；

(4)移栽：移栽時間為3月，在種植畦的基質(zhì)上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.4％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內(nèi)，然后用基質(zhì)蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)溫濕度控制：保證大棚內(nèi)溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后13天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)肥水管理：控制基質(zhì)正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10-15天噴1次水，可每15-20天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)病蟲害防治：每月用40％樂果乳油1000倍水溶液噴施進(jìn)行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)；

(8)采收：11月至次年4月份間進(jìn)行采收，剪大留小，剪老留嫩。

實施例2.

一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，包括以下步驟：

(1)選苗：選擇肉質(zhì)莖有3～4個節(jié)間、長有4～5片葉，根長3cm以上，有4-5條根，根皮色白中帶綠，無黑色根，無畸形，無變異的鐵皮石斛幼苗；

(2)幼苗處理：將鐵皮石斛幼苗根部進(jìn)行清洗4次后，將幼苗根部置于1000mg/l的吲哚乙酸中浸泡30min后，得處理后的鐵皮石斛幼苗；

(3)大棚建設(shè)：搭建寬8米，長32米，棚肩高120米，棚頂高4min的種植大棚，棚頂覆蓋塑料無滴薄膜好80％遮陰度的遮陰網(wǎng)，棚內(nèi)安裝自來水管，大棚四周和入口裝有40目的防蟲網(wǎng)；棚內(nèi)搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設(shè)孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質(zhì)支撐面，畦底架空高度為30-50cm，然后在畦面上鋪設(shè)8-12cm的基質(zhì)；所述基質(zhì)由土豆泥18kg、尿素4kg、五氧化二磷4kg、磷酸氫二胺4kg、四硼酸鈉3kg、肉桂18kg、巴戟天18kg、半邊蓮28kg、姜夏23kg、黃連23kg、麥冬18kg、生地18kg、山茱萸23kg、丹參23kg、西洋參18kg、桃仁27kg、牡丹皮27kg和葛根27kg按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加8-12倍量的水煎煮3-5h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得；

(4)移栽：移栽時間為3月，在種植畦的基質(zhì)上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內(nèi)，然后用基質(zhì)蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)溫濕度控制：保證大棚內(nèi)溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后15天噴施0.6％尿素水溶液；

(6)肥水管理：控制基質(zhì)正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10-15天噴1次水，可每20天噴1次0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)病蟲害防治：每月50％馬拉硫磷1000倍水溶液噴施進(jìn)行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)；

(8)采收：11月至次年4月份間進(jìn)行采收，剪大留小，剪老留嫩。

實施例3.

一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法，包括以下步驟：

(1)選苗：選擇肉質(zhì)莖有3～4個節(jié)間、長有4～5片葉，根長3cm以上，有4-5條根，根皮色白中帶綠，無黑色根，無畸形，無變異的鐵皮石斛幼苗；

(2)幼苗處理：將鐵皮石斛幼苗根部進(jìn)行清洗3次后，將幼苗根部置于1000mg/l的吲哚乙酸中浸泡20min后，得處理后的鐵皮石斛幼苗；

(3)大棚建設(shè)：搭建寬6米，長28米，棚肩高110米，棚頂高3min的種植大棚，棚頂覆蓋塑料無滴薄膜好70％遮陰度的遮陰網(wǎng)，棚內(nèi)安裝自來水管，大棚四周和入口裝有30目的防蟲網(wǎng)；棚內(nèi)搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設(shè)孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質(zhì)支撐面，畦底架空高度為30-50cm，然后在畦面上鋪設(shè)8-12cm的基質(zhì)；所述基質(zhì)由土豆泥12kg、尿素2kg、五氧化二磷2kg、磷酸氫二胺2kg、四硼酸鈉2kg、肉桂12kg、巴戟天12kg、半邊蓮22kg、姜夏17kg、黃連17kg、麥冬12kg、生地12kg、山茱萸17kg、丹參17kg、西洋參12kg、桃仁23kg、牡丹皮23kg和葛根23kg按下述方法制備：取肉桂、巴戟天、半邊蓮、姜夏、黃連、麥冬、生地、山茱萸、丹參、西洋參、桃仁、牡丹皮和葛根，加8倍量的水煎煮3h后，過濾，取濾渣，干燥后，粉碎成粗顆粒，粗顆粒與土豆泥、尿素、五氧化二磷、磷酸氫二胺和四硼酸鈉混勻，即得；

(4)移栽：移栽時間為3月，在種植畦的基質(zhì)上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內(nèi)，然后用基質(zhì)蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)溫濕度控制：保證大棚內(nèi)溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后10天噴施0.4％尿素水溶液；

(6)肥水管理：控制基質(zhì)正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10天噴1次水，可每15天噴1次0.5％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)病蟲害防治：每月用40％樂果乳油1000倍水溶液噴施進(jìn)行葉面防治，防蟲采用防蟲網(wǎng)；

(8)采收：11月至次年4月份間進(jìn)行采收，剪大留小，剪老留嫩。