本發(fā)明屬于農(nóng)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）和啶酰菌胺的組合物及其在防治草莓灰霉病方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

草莓果實(shí)鮮紅形美，柔軟多汁，香味濃郁，甜酸可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，是目前果品市場(chǎng)上的高檔水果之一，深受消費(fèi)者的喜愛(ài)，市場(chǎng)前景廣闊。近年來(lái)，我省各地種植面積迅速擴(kuò)大，在我國(guó)多個(gè)省市廣泛栽培，且種植面積呈逐年上升的趨勢(shì)。為提高草莓產(chǎn)品的產(chǎn)量和品質(zhì)，延長(zhǎng)市場(chǎng)供應(yīng)時(shí)間，目前我國(guó)大部地區(qū)均采用以大棚和日光溫室為主保護(hù)地栽培模式進(jìn)行種植。在這種栽培模式下，由于環(huán)境相對(duì)密閉，通風(fēng)透氣性差，溫度、濕度適宜，及化學(xué)肥料的過(guò)度施用，草莓極易產(chǎn)生各種病蟲害。

草莓灰霉病是草莓的主要病害之一，主要危害花器和果實(shí)，引起花器和果實(shí)腐爛，此病能迅速傳播，是造成草莓爛果的主要原因，一般使草莓減產(chǎn)10%-30%，嚴(yán)重時(shí)可造成草莓減產(chǎn)50%以上，嚴(yán)重影響草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。目前化學(xué)藥劑仍然是防治草莓灰霉病的主要措施，由于化學(xué)藥劑的多頻次、多劑量的使用，導(dǎo)致抗藥性增加、防治效果下降、環(huán)境污染及果實(shí)的農(nóng)藥殘留等一系列問(wèn)題更加突出，因此尋求一種高效安全的防治方法顯得尤為重要，對(duì)草莓產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）屬革蘭陽(yáng)性芽孢桿菌，是一種與枯草芽孢桿菌親緣性很高的細(xì)菌，在自然界中分布廣泛。解淀粉芽孢桿菌生長(zhǎng)過(guò)程中可以產(chǎn)生一系列具有廣泛地抑制真菌和細(xì)菌的活性的代謝產(chǎn)物，在生物防治方面具有廣闊的應(yīng)用前景，已逐步成為具有生物農(nóng)藥開(kāi)發(fā)潛力的微生物。解淀粉芽孢桿菌wh1g，抑菌譜較廣，對(duì)多種病原真菌和病原細(xì)菌均有很強(qiáng)的抑制作用，該菌株生長(zhǎng)速度快，適應(yīng)環(huán)境能力強(qiáng)，易于在植物表面定殖，并形成優(yōu)勢(shì)種群；誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生抗病性；分泌多種抗菌物質(zhì)；對(duì)多種植物病害均有較好的防效。該菌株對(duì)啶酰菌胺有天然抗性，在啶酰菌胺含量為5000ppm的na培養(yǎng)基中能正常生長(zhǎng)，該菌株與2015年04月15日保藏于在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為cgmccno.10722。該菌株命名為whig，分類命名：解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）。

啶酰菌胺屬于煙酰胺類新型殺菌劑，主要通過(guò)抑制線粒體琥珀酸酯脫氫酶阻礙三羧酸循環(huán)，使氨基酸和糖缺乏、能量減少，干擾細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)。該藥劑可用于控制草莓灰霉病，而且與多菌靈、速克靈等藥劑無(wú)交互抗藥性。目前在我國(guó)草莓病害防治上應(yīng)用的啶酰菌胺產(chǎn)品多數(shù)是單劑，僅有的少數(shù)復(fù)配劑也是與其它化學(xué)藥劑進(jìn)行復(fù)配，對(duì)于延緩和治理啶酰菌胺的抗藥性作用有限。至今還未發(fā)現(xiàn)啶酰菌胺與生防菌的復(fù)配劑型用于草莓病害的防治，而本發(fā)明利用解淀粉芽胞桿菌與啶酰菌胺的組合物在防治草莓灰霉病上的應(yīng)用還沒(méi)有公開(kāi)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于：針對(duì)目前利用現(xiàn)有的殺菌劑防治草莓灰霉病時(shí)出現(xiàn)的一系列問(wèn)題，提供一種高效、低毒、可延長(zhǎng)藥劑使用時(shí)間、降低成本、協(xié)同增效作用顯著，對(duì)草莓灰霉病有較好防治作用的，且環(huán)境友好、安全的農(nóng)用殺菌組合物。該組合物以解淀粉芽孢桿菌和啶酰菌胺為主要活性物質(zhì)，不僅極大的減少了化學(xué)殺菌劑的使用量，降低了現(xiàn)有病原菌對(duì)啶酰菌胺的潛在抗藥性的風(fēng)險(xiǎn)，還能發(fā)揮解淀粉芽孢桿菌wh1g有效控制草莓灰霉病的作用，彌補(bǔ)了解淀粉芽孢桿菌抑菌效果慢的缺點(diǎn)，綜合了生防菌和化學(xué)殺菌劑的優(yōu)點(diǎn)。本研究結(jié)果表明解淀粉芽孢桿菌whig與啶酰菌胺的組合對(duì)草莓灰霉病的防治具有明顯的增效作用。

本發(fā)明所述的殺菌組合物可以用已知的方法加工成適合農(nóng)業(yè)使用的劑型，包括可濕性粉劑、懸浮劑、水乳劑等，本發(fā)明提供了所述殺菌劑的可濕性粉劑及水懸浮劑的制備方法。

本發(fā)明所述組合物中的助劑包括濕潤(rùn)劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑、消泡劑等各類助劑中的一種或幾種，具體成分和用量根據(jù)配方要求通過(guò)簡(jiǎn)單試驗(yàn)確定。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下措施達(dá)到:

一種含解淀粉芽孢桿菌whig與啶酰菌胺的組合物，該組合物以解淀粉芽孢桿菌whig和啶酰菌胺為活性成分，其質(zhì)量比為100：1~1:100，優(yōu)化為10:1~1:10，最優(yōu)選為4:1~1:4。本發(fā)明所采用的解淀粉芽孢桿菌活孢子數(shù)為1億/克~100億/克，最優(yōu)選為10億/克~100億/克。

本發(fā)明所述殺菌組合物中的解淀粉芽孢桿菌要先制成母粉，方法如下：首先將wh1g接入na培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)(180r/min,28℃)48h，80℃水浴處理15min，8000r/min離心15min，去上清液獲得細(xì)菌沉淀，加入10ml過(guò)濾除菌的mgso4溶液(0.lmol/l)和1ml無(wú)菌甘油，振蕩混勻后再加入lml濃度為1.5%(w/v)海藻酸鈉溶液，然后將上述混合液與50g滑石粉及4gca-lignosulphate充分混合，無(wú)菌條件下室溫保存。

所述組合物中解淀粉芽胞桿菌母粉的生存能力測(cè)定每隔30d,分別測(cè)定可濕性粉劑中生防菌的生存能力，方法是每次測(cè)定時(shí)，分別稱取0.5克可濕性粉劑，置于10ml無(wú)菌水中，制備懸浮液，經(jīng)倍比稀釋后，分別涂布于na平板上，28℃培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)生長(zhǎng)菌落，計(jì)算出單位重量可濕性粉劑中細(xì)菌的菌落形成單位。結(jié)果表明，生防菌劑中細(xì)菌的生存能力較強(qiáng)，室溫條件下保存120d細(xì)菌的存活數(shù)量仍能達(dá)到10¹⁰cfu/g，150d能達(dá)到10⁸cfu/g，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)菌數(shù)量不斷下降，至180d僅能達(dá)到10⁷cfu/g。

所述的殺菌組合物向活性成分解淀粉芽孢桿菌和啶酰菌胺中加入農(nóng)藥助劑和填料后即可配得可濕性粉劑和懸浮劑，其中有效成分占?xì)⒕M合物總重量的20%~60%，助劑占?xì)⒕M合物總重量的10%~30%,其余為填料。啶酰菌胺可以采用原藥，解淀粉芽孢桿菌采用原粉，助劑可以選用濕潤(rùn)劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑等各類助劑中的一種或幾種。

當(dāng)所述殺菌組合物的劑型為可濕性粉劑時(shí)，由下述質(zhì)量百分含量的組分組成：

解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）5%~50%,

啶酰菌胺5%~40%,

載體30%~65%，

分散劑3%~8%,

潤(rùn)濕劑2%~5%，

滲透劑3%~5%

其特征是所述載體優(yōu)選為白炭黑、高嶺土，所述分散劑優(yōu)選為木質(zhì)素磺酸鈉，所述潤(rùn)濕劑優(yōu)選為十二烷基苯磺酸，所述滲透劑優(yōu)選為jfc。

當(dāng)所述殺菌組合物的劑型為水懸浮劑時(shí)，由下述質(zhì)量百分含量的組分組成：

解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）5%~50%,

啶酰菌胺5%~45%,

分散劑2%~8%，

潤(rùn)濕劑2%~4%，

增稠劑0.1%~2%

增效劑2%~5%

防凍劑2%~4%

消泡劑1%~3%

余量加水至100%，

其特征是所述分散劑優(yōu)選為木質(zhì)素磺酸鈣，潤(rùn)濕劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉，增稠劑優(yōu)選為黃原膠，所選防凍劑優(yōu)選為乙二醇；消泡劑優(yōu)選為有機(jī)硅消泡劑，水優(yōu)選為自來(lái)水。

本發(fā)明的殺菌組合物用于防治草莓炭疽病、白粉病及灰霉病，在病害初步發(fā)生時(shí)進(jìn)行施藥，連續(xù)施用3次，間隔期為10d，以噴霧法均勻施藥為宜。

本發(fā)明的組合物降低了草莓灰霉病菌對(duì)啶酰菌胺和解淀粉芽孢桿菌的潛在抗藥性風(fēng)險(xiǎn)，將解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺組合后，二者之間具有明顯的增效作用，可以顯著提高對(duì)草莓灰霉病的防治效果，同時(shí)減少了化學(xué)農(nóng)藥使用量，從而使該組合物可以廣泛的應(yīng)用于草灰霉病的防治。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡釋本發(fā)明，但本發(fā)明的實(shí)質(zhì)并不限于下述實(shí)施例。

實(shí)施例1：35%可濕性粉劑的制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）7

啶酰菌胺28

十二烷基硫酸鈉2

木質(zhì)素磺酸鈉4

滲透劑jfc4

白炭黑補(bǔ)足至100（調(diào)ph值5~7）

實(shí)施例2：40%可濕性粉劑的制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）30

啶酰菌胺10

十二烷基硫酸鈉2

木質(zhì)素磺酸鈉4.5

滲透劑jfc4.5

白炭黑補(bǔ)足至100（調(diào)ph值5~7）

實(shí)施例3：42%可濕性粉劑制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）28

啶酰菌胺14

十二烷基硫酸鈉2

木質(zhì)素磺酸鈉4.5

滲透劑jfc4.5

白炭黑30

高嶺土補(bǔ)足至100（調(diào)ph值5~7）

實(shí)施例4：50%可濕性粉劑制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）25

啶酰菌胺25

十二烷基硫酸鈉3

木質(zhì)素磺酸鈉5

滲透劑jfc5

白炭黑20

高嶺土補(bǔ)足至100（調(diào)ph值5~7）

按照實(shí)施例1、2、3、4的配方，將有效成分、助劑、填料加在一起，經(jīng)氣流粉碎后，在錐形混合機(jī)內(nèi)攪拌30分鐘，即可制得解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌可濕性粉劑。

實(shí)施例5:30%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）10

啶酰菌胺20

木質(zhì)素磺酸鈣5

十二烷基硫酸鈉2

有機(jī)硅2

黃原膠0.3

乙二醇2

自來(lái)水補(bǔ)足至100

實(shí)施例6:55%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）44

啶酰菌胺11

木質(zhì)素磺酸鈣5

十二烷基硫酸鈉2

有機(jī)硅2

黃原膠0.2

乙二醇3.5

自來(lái)水補(bǔ)足至100

實(shí)施例7:60%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）

解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）15

啶酰菌胺45

木質(zhì)素磺酸鈣7

十二烷基硫酸鈉4

有機(jī)硅2

黃原膠0.2

乙二醇3.5

自來(lái)水補(bǔ)足至100

按照實(shí)施例5、6、7的配方，將有效成分、分散劑、潤(rùn)濕劑等各組分裝入帶高剪切攪拌的反應(yīng)釜中，粉碎混合，直到混合體均勻后將攪拌粉碎的物料通入砂磨機(jī)中，通冷卻循環(huán)水進(jìn)行砂磨超微粉碎，終點(diǎn)粒徑小于3微米。即可制得解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌水懸浮劑。

實(shí)施例8用實(shí)施例1-實(shí)施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌組合物防治草莓灰霉病的田間效果。

本發(fā)明試驗(yàn)作物為草莓，品種為：紅顏；共設(shè)置實(shí)施例1-實(shí)施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與啶酰菌胺的殺菌組合物、100億cfu/g解淀粉芽孢桿菌母粉、50%啶酰菌胺水分散粒劑和空白對(duì)照共10個(gè)處理，每個(gè)處理4次重復(fù)，小區(qū)面積20㎡，于病害發(fā)生初期開(kāi)始第一次噴藥，每畝兌水50公斤均勻噴霧，連續(xù)噴灑2次，間隔期為10d，最后一次防治后10d調(diào)查各處理草莓灰霉病的病情指數(shù)，并以對(duì)照區(qū)的病情指數(shù)計(jì)算相對(duì)防治效果，調(diào)查結(jié)果如表1。

表1解淀粉芽孢桿菌﹒啶酰菌胺對(duì)草莓灰霉病的田間小區(qū)試驗(yàn)的防效（%）

^注：a:理論防效%=（實(shí)施例中芽孢桿菌單劑防效×所占比例＋啶酰菌胺防效×所占比例）×100

b:增效效果%=（實(shí)施例防治效果—理論防效）/理論防效×100

從表1可以看出當(dāng)草莓灰霉病初見(jiàn)病斑時(shí)就開(kāi)始用本發(fā)明的組合物進(jìn)行施藥，每間隔10d噴施一次，連續(xù)噴灑2次后，本發(fā)明組合物的7個(gè)制劑實(shí)施例對(duì)草莓灰霉病的防效較好，除了實(shí)施例2，防效均在85%以上，特別是實(shí)施例7防效達(dá)到93.10%，明顯高于對(duì)照藥劑，防效顯著；本發(fā)明組合物和單劑相比，均有增效效果，特別是實(shí)施例2、3和實(shí)施例6增效效果高達(dá)20%以上，增效作用明顯，可顯著提高防治效果；本發(fā)明組合物對(duì)草莓生長(zhǎng)安全，田間未發(fā)現(xiàn)任何不良反應(yīng)，所以該組合物在生產(chǎn)上可以廣泛的用于田間草莓灰霉病的防治。