本公開涉及植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法。

背景技術(shù)：

毛葉山桐子(idesiapolycarpamaxim.var.vestitadiels)是大風(fēng)子科山桐子屬的變種，為我國(guó)的一個(gè)鄉(xiāng)土樹種。為落葉喬木，具有速生、水土保持功能好，且果實(shí)產(chǎn)量大、含油率高、油質(zhì)好、可食用等特點(diǎn)，是一種較好的生態(tài)經(jīng)濟(jì)林木。

毛葉山桐子樹高達(dá)10～15m，樹皮平滑，葉互生，寬卵形至卵狀心形，端尖，長(zhǎng)8～20cm，寬6～20cm，邊緣有疏鋸齒，冠幅大，在自然生態(tài)中是中、低層植被的良好屏障。該樹種屬淺根性樹種，主根不明顯，但側(cè)根非常發(fā)達(dá)，成水平分布，根系密集層為20～60cm，根端根須密集成網(wǎng)，這一特點(diǎn)使其對(duì)土地表層水土的保持能力極強(qiáng)。同時(shí),毛葉山桐子產(chǎn)量高，單株產(chǎn)量高的可達(dá)200～300kg，產(chǎn)果的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)70～100年。毛葉山桐子果實(shí)含油率高，干果達(dá)36％～38％，油品質(zhì)量好，其中不飽和脂肪酸高達(dá)82％以上，亞油酸就高達(dá)68％以上，維生素e含量高達(dá)1‰以上，是良好的食用油、保健油和工業(yè)用油原料。

毛葉山桐子素有“綠蔭護(hù)夏，紅果迎秋”的美譽(yù)，可作為行道樹和觀賞樹種，其成片種植區(qū)具有旅游開發(fā)價(jià)值。此外,毛葉山桐子具有耐旱、耐貧瘠的特點(diǎn)，對(duì)種植土壤要求不高。由于毛葉山桐子的上述突出優(yōu)點(diǎn)，開發(fā)毛葉山桐子對(duì)生態(tài)建設(shè)、解決“三農(nóng)”問題，促進(jìn)農(nóng)業(yè)和林業(yè)的可持續(xù)發(fā)展都有十分重要的意義。

我國(guó)四川、甘肅、陜西、安徽、浙江、江西、湖南、湖北、貴州等地都曾經(jīng)有毛葉山桐子的分布，但由于種種原因，野生毛葉山桐子自然繁殖力十分低下，野生毛葉山桐子的數(shù)量已急劇減少。由于毛葉山桐子的種子極小，發(fā)芽困難，傳統(tǒng)育苗方法導(dǎo)致育苗苗情參差不齊，苗子質(zhì)量嚴(yán)重弱化，不利于產(chǎn)業(yè)化推廣。毛葉山桐子也是一種雌雄異株的速生落葉喬木，傳統(tǒng)種子育苗不能保證為雌性樹種，導(dǎo)致油料樹毛葉山桐子推廣困難。

因而，亟需要一種毛葉山桐子的人工培育新方法，開展毛葉山桐子良種選育和組培快繁研究，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段，在建立組培再生和遺傳轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)上，并使其大規(guī)模工程化應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為克服相關(guān)技術(shù)中存在的問題，本公開實(shí)施例提供一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法。

根據(jù)本公開實(shí)施例的第一方面，提供一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法，包括：

步驟1：將培養(yǎng)基注入玻璃瓶中，經(jīng)高溫高壓消毒待用；

步驟2：采用優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)乙醇-納米銀溶液消毒，用無菌水沖洗4-5次；

步驟3：無菌條件下，將消毒的外植體接種在含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，將其置于8℃低溫暗培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)為溫度23℃，日光為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日照光10小時(shí)，濕度為60％，培養(yǎng)30天，分化長(zhǎng)成單芽苗；

步驟4：將長(zhǎng)成的所述單芽苗，剪切成帶有隱芽的小段，接種于注入增殖培養(yǎng)基的所述玻璃瓶中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，得到試管芽苗；

步驟5：將培養(yǎng)的所述試管芽苗，對(duì)基部剪切去愈傷組織，接種于消毒的注入壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)30-35天；

步驟6：將試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3-5片葉片，接種于消毒的注入生根培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行生根培養(yǎng)10-15天；

步驟7：將生長(zhǎng)的帶有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有草炭和花生殼粉的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28℃，相對(duì)濕度80％以上，前10天遮光70％，后逐漸見光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。

所述步驟1具體包括：

將培養(yǎng)基配好調(diào)節(jié)ph值，加熱溶解后分裝注入玻璃瓶中，經(jīng)115℃高壓消毒15min后凝固待用。

所述步驟2具體包括：

采用優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)0.5％乙醇-納米銀溶液消毒15min，用無菌水沖洗4-5次放于無菌0.1％pvp水中保存待用。

所述步驟3具體包括：

無菌條件下，將消毒的外植體用手術(shù)刀斜切成帶有隱芽的1cm-2cm長(zhǎng)莖段。接種在步驟1的含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，將其置于8℃低溫暗培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)為溫度23℃-25℃，日光為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日照光10小時(shí)，濕度為60％，培養(yǎng)30天，在莖段隱芽出分化長(zhǎng)成單芽苗。

所述步驟7具體包括：

將步驟6中生長(zhǎng)的帶有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有體積比為：草炭∶花生殼粉＝1∶1的基質(zhì)中，噴施多菌靈后澆透水，保持溫度25-28℃，相對(duì)濕度80％以上，前10天遮光70％，后逐漸見光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。

所述培養(yǎng)基成分配比包括：

硝酸鉀80，抗壞血酸2.0，硝酸鈣287.0，硫酸鎂738.0，硫酸鈉53.0，氯化鉀65.0，磷酸二氫鈉19.1，鹽酸硫胺素(維b1)0.2，鹽酸吡哆素(維b6)0.1，肌醇100，煙酸1.0，甘氨酸3.0，蔗糖20000，硫酸錳6.6，硫酸鋅2.7，碘化鉀0.75，氯化鈷0.025，硼酸1.5，鉬酸鈉0.025，edta-鐵30，卡拉膠6.5g；其中，ph值為5.7，配比單位為mg/l。

所述步驟3中含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基，還包括：

所述培養(yǎng)基中添加tdz0.02-0.1mg/l、6-ba0.5-1.0mg/l和α-naa0.05-0.15mg/l。

所述步驟4中的增殖培養(yǎng)基，還包括：

所述培養(yǎng)基添加tdz0.02-0.1mg/l、6-ba0.8-1.5mg/l和α-naa0.05-0.15mg/l。

所述步驟5中的壯苗培養(yǎng)基，還包括：

所述培養(yǎng)基添加tdz0.02-0.05mg/l、6-ba0.8-1.5mg/l和α-naa0.1-0.5mg/l。

所述步驟6中的生根培養(yǎng)基，還包括：

所述培養(yǎng)基添加α-naa0.1-0.3mg/l和iaa0.3-0.9mg/l。

本公開的實(shí)施例提供的技術(shù)方案可以包括以下有益效果：

以優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)過培養(yǎng)基的篩選，制成誘導(dǎo)的專用培養(yǎng)基，成功的建立了毛葉山桐子樹組織培養(yǎng)育苗的全套體系，為毛葉山桐子樹大量組織培養(yǎng)快速繁殖提供了一條可靠的技術(shù)和方法。

采用組織培養(yǎng)方法，繁殖系數(shù)高，在短期內(nèi)能提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗，加快了毛葉山桐子樹推廣應(yīng)用的速度。與同類方法相比，本方案具有很大優(yōu)勢(shì)，如根插育苗雖然比較容易操作，但是會(huì)嚴(yán)重?fù)p害母株，枝插繁殖生根困難，成活率低；種籽育苗方法中由于毛葉山桐子樹種子非常小，且種皮堅(jiān)硬，常規(guī)田間發(fā)芽率不足4％，造成種子的大量浪費(fèi)和造林中毛葉山桐子樹種苗的缺乏。所以本方案具有很強(qiáng)的實(shí)用意義，采用組織培養(yǎng)法繁育種苗，實(shí)現(xiàn)矮、密、早、豐栽種管理技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)一年種樹，第二年見成效，為大規(guī)模毛葉山桐子樹育種提供了快速有效途徑。

本公開的方案，通過對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理獲得低本底污染材料。經(jīng)過消毒和脫酚化處理減少外植體的褐變，通過降低培養(yǎng)基鹽濃度和添加還原性物質(zhì)來減輕褐變提高了外植體的存活。

本公開的方案，利用組培技術(shù)使得毛葉山桐子組培外植體可以在30天獲得建立無菌系，并通過增值培養(yǎng)基獲得4倍的增值率，通過生根培養(yǎng)基可以獲得80％的生根苗，苗高5-15cm，新根5條以上。移栽練苗成活率達(dá)到90％。可以支持實(shí)現(xiàn)毛葉山桐子的工廠化生產(chǎn)育苗需要。

應(yīng)當(dāng)理解的是，以上的一般描述和后文的細(xì)節(jié)描述僅是示例性和解釋性的，并不能限制本公開。

附圖說明

此處的附圖被并入說明書中并構(gòu)成本說明書的一部分，示出了符合本公開的實(shí)施例，并與說明書一起用于解釋本公開的原理。

圖1是根據(jù)一示例性實(shí)施例示出的一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法原理示意圖；

圖2是根據(jù)另一示例性實(shí)施例示出的一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法原理示意圖。

具體實(shí)施方式

這里將詳細(xì)地對(duì)示例性實(shí)施例進(jìn)行說明，其示例表示在附圖中。下面的描述涉及附圖時(shí)，除非另有表示，不同附圖中的相同數(shù)字表示相同或相似的要素。以下示例性實(shí)施例中所描述的實(shí)施方式并不代表與本公開相一致的所有實(shí)施方式。相反，它們僅是與如所附權(quán)利要求書中所詳述的、本公開的一些方面相一致的裝置和方法的例子。

圖1是根據(jù)一示例性實(shí)施例示出的一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法原理示意圖，包括：

步驟1：將培養(yǎng)基注入玻璃瓶中，經(jīng)高溫高壓消毒待用。

步驟2：采用優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)乙醇-納米銀溶液消毒，用無菌水沖洗4-5次。

步驟3：無菌條件下，將消毒的外植體接種在步驟1的含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，將其置于8℃低溫暗培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)為溫度23℃，日光為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日照光10小時(shí)，濕度為60％，培養(yǎng)30天，分化長(zhǎng)成單芽苗。

步驟4：將從步驟3中長(zhǎng)成的芽苗，剪切成帶有隱芽的小段，按步驟3的方法接種于按步驟1的方法消毒的注入增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)需要到500瓶時(shí)，進(jìn)入下一步。

步驟5：將步驟4中培養(yǎng)的試管芽苗，對(duì)基部剪切去愈傷組織，按步驟3的方法接種于按步驟1的方法消毒的注入壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30-35天后進(jìn)入下一步。

步驟6：將步驟5中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3-5片葉片，接種于按步驟1的方法消毒的注入生根培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行生根培養(yǎng)10-15天。

步驟7：將步驟6中生長(zhǎng)的帶有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有體積比為草炭∶花生殼粉＝1∶1的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28℃，相對(duì)濕度80％以上，前10天遮光70％，后逐漸見光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。該方法可以滿足優(yōu)良品系的毛葉山桐子工業(yè)化育苗，具有出苗率高苗情一致，苗勢(shì)旺盛，移栽定植成活率可達(dá)90％以上。

具體來說，本實(shí)施例中各個(gè)步驟的具體實(shí)現(xiàn)過程如下：

步驟1：將培養(yǎng)基配好調(diào)節(jié)ph值，加熱溶解后分裝注入玻璃瓶中，經(jīng)115℃高壓消毒15min后凝固待用。

步驟2：采用優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)0.5％乙醇-納米銀溶液消毒15min，用無菌水沖洗4-5次放于無菌0.1％pvp水中保存待用。

步驟3：無菌條件下，將消毒的外植體用手術(shù)刀斜切成帶有隱芽的1cm長(zhǎng)莖段。接種在步驟1的含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，將其置于8℃低溫暗培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)為溫度23℃，日光為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日照光10小時(shí)，濕度為60％，培養(yǎng)30天，在莖段隱芽出分化長(zhǎng)成單芽苗。

步驟4：將從步驟3中長(zhǎng)成的芽苗，剪切成帶有隱芽的小段，按步驟3的方法接種于按步驟1的方法消毒的注入增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)需要到500瓶時(shí)，進(jìn)入下一步。

步驟5：將步驟4中培養(yǎng)的試管芽苗，對(duì)基部部剪切去愈傷組織，按步驟3的方法接種于按步驟1的方法消毒的注入壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30-35天后進(jìn)入下一步。

步驟6：將步驟5中的試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3-5片葉片，接種于按步驟1的方法消毒的注入生根培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行生根培養(yǎng)10-15天。

步驟7：將步驟6中生長(zhǎng)的帶有完整根的小苗，取出清洗，移栽前根部沾有5406菌劑作為接菌保護(hù)劑，假植到含有體積比為草炭∶花生殼粉＝1∶1的基質(zhì)中，噴施多菌靈后澆透水，保持溫度25℃，相對(duì)濕度80％，前10天遮光70％，后逐漸見光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。移栽練苗成活率達(dá)到91％。

本公開實(shí)施例以優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)過培養(yǎng)基的篩選，制成了誘導(dǎo)的專用培養(yǎng)基，成功的建立了毛葉山桐子樹組織培養(yǎng)育苗的全套體系，為毛葉山桐子樹大量組織培養(yǎng)快速繁殖提供了一條可靠的技術(shù)和方法。本公開實(shí)施例的積極效果是采用組織培養(yǎng)方法，繁殖系數(shù)高，在短期內(nèi)能提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗，加快了毛葉山桐子樹推廣應(yīng)用的速度。與同類方法相比具有很大優(yōu)勢(shì)。如根插育苗雖然比較容易操作，但是會(huì)嚴(yán)重?fù)p害母株，枝插繁殖生根困難，成活率低；種籽育苗方法中由于毛葉山桐子樹種子非常小，且種皮堅(jiān)硬，常規(guī)田間發(fā)芽率不足4％，造成種子的大量浪費(fèi)和造林中毛葉山桐子樹種苗的缺乏。所以本公開實(shí)施例具有很強(qiáng)的實(shí)用意義，采用組織培養(yǎng)法繁育種苗，實(shí)現(xiàn)矮、密、早、豐栽種管理技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)一年種樹，第二年見成效，為大規(guī)模毛葉山桐子樹育種提供了快速有效途徑。

本公開實(shí)施例通過對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理獲得低本底污染材料。經(jīng)過消毒和脫酚化處理減少外植體的褐變，通過降低培養(yǎng)基鹽濃度和添加還原性物質(zhì)來減輕褐變提高了外植體的存活。

本公開實(shí)施例利用組培技術(shù)使得毛葉山桐子組培外植體可以在30天獲得建立無菌系，并通過增值培養(yǎng)基獲得4倍的增值率，通過生根培養(yǎng)基可以獲得80％的生根苗，苗高5-15cm，新根5條以上。移栽練苗成活率達(dá)到90％。可以支持實(shí)現(xiàn)毛葉山桐子的工廠化生產(chǎn)育苗需要。

進(jìn)一步的，上述各階段用基本的培養(yǎng)基如下成分：?jiǎn)挝?mg/l)

硝酸鉀80，抗壞血酸2.0，硝酸鈣287.0，硫酸鎂738.0，硫酸鈉53.0，氯化鉀65.0，磷酸二氫鈉19.1，鹽酸硫胺素(維b1)0.2，鹽酸吡哆素(維b6)0.1，肌醇100，煙酸1.0，甘氨酸3.0，蔗糖20000，硫酸錳6.6，硫酸鋅2.7，碘化鉀0.75，氯化鈷0.025，硼酸1.5，鉬酸鈉0.025，edta-鐵30，卡拉膠6.5g；ph5.7。

上述各階段培養(yǎng)基添加植物生長(zhǎng)激素如下：

啟動(dòng)培養(yǎng)基：添加tdz0.02-0.1mg/l、添加6-ba0.5-1.0mg/l和添加α-naa0.05-0.15mg/l。

增殖培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基添加tdz0.02-0.1mg/l、添加6-ba0.8-1.5mg/l和添加α-naa0.05-0.15mg/l。

壯苗培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基添加tdz0.02-0.05mg/l、添加6-ba0.8-1.5mg/l和添加α-naa0.1-0.5mg/l。

生根培養(yǎng)基：基本培養(yǎng)基添加α-naa0.1-0.3mg/l和添加iaa0.3-0.9mg/l。

圖2是根據(jù)另一示例性實(shí)施例示出的一種毛葉山桐子的組織培養(yǎng)育苗方法原理示意圖，包括：

步驟11，材料的處理，采來的優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)過無菌處理后進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)。

步驟12，芽的誘導(dǎo)，經(jīng)表面滅菌處理好的材料接種在誘導(dǎo)啟動(dòng)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，每瓶接種一個(gè)腋芽，30天后得到芽苗。

步驟13，增殖培養(yǎng)，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行芽苗增殖培養(yǎng)，增殖一段時(shí)間后得到大量芽苗。

步驟14，壯苗培養(yǎng)，將增殖后的芽苗移入壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。

步驟15，根誘導(dǎo)培養(yǎng)，將壯苗移入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行根的誘導(dǎo)培養(yǎng)。

步驟16，移栽，誘導(dǎo)出根的小苗，移栽到草炭與花生殼粉混合培養(yǎng)基質(zhì)中，栽培煉苗，然后移栽到室外大田上。四周后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。

本實(shí)施例中，將培養(yǎng)基注入玻璃瓶中，經(jīng)高溫高壓消毒待用；采用優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)乙醇-納米銀溶液消毒，用無菌水沖洗4-5次；無菌條件下，將消毒的外植體接種在含有抗褐變成分的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，將其置于8℃低溫暗培養(yǎng)7天，然后轉(zhuǎn)為溫度23℃，日光為光源、光照強(qiáng)度為1500-20001x下，每日照光10小時(shí)，濕度為60％，培養(yǎng)30天，分化長(zhǎng)成單芽苗；將長(zhǎng)成的芽苗，剪切成帶有隱芽的小段，接種于消毒的注入增殖培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不斷增殖，視繁殖生產(chǎn)需要到500瓶時(shí)，將培養(yǎng)的試管芽苗，對(duì)基部剪切去愈傷組織，接種于消毒的注入壯苗培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30-35天后，將試管壯苗，去掉基部愈傷組織和部分葉片，留3-5片葉片，接種于消毒的注入生根培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行生根培養(yǎng)10-15天；將生長(zhǎng)的帶有完整根的小苗，取出清洗，移栽到含有體積比為草炭∶花生殼粉＝1∶1的基質(zhì)中，澆透水，保持溫度25-28℃，相對(duì)濕度80％以上，前10天遮光70％，后逐漸見光，20天后生根成活，35-45天后，全光照。該方法可以滿足優(yōu)良品系的毛葉山桐子工業(yè)化育苗，具有出苗率高苗情一致，苗勢(shì)旺盛，移栽定植成活率可達(dá)90％以上。

本公開各個(gè)實(shí)施例，以優(yōu)良野生或馴化單株的腋芽莖段為外植體，經(jīng)過培養(yǎng)基的篩選，制成誘導(dǎo)的專用培養(yǎng)基，成功的建立了毛葉山桐子樹組織培養(yǎng)育苗的全套體系，為毛葉山桐子樹大量組織培養(yǎng)快速繁殖提供了一條可靠的技術(shù)和方法。

采用組織培養(yǎng)方法，繁殖系數(shù)高，在短期內(nèi)能提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗，加快了毛葉山桐子樹推廣應(yīng)用的速度。與同類方法相比，本方案具有很大優(yōu)勢(shì)，如根插育苗雖然比較容易操作，但是會(huì)嚴(yán)重?fù)p害母株，枝插繁殖生根困難，成活率低；種籽育苗方法中由于毛葉山桐子樹種子非常小，且種皮堅(jiān)硬，常規(guī)田間發(fā)芽率不足4％，造成種子的大量浪費(fèi)和造林中毛葉山桐子樹種苗的缺乏。所以本方案具有很強(qiáng)的實(shí)用意義，采用組織培養(yǎng)法繁育種苗，實(shí)現(xiàn)矮、密、早、豐栽種管理技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)一年種樹，第二年見成效，為大規(guī)模毛葉山桐子樹育種提供了快速有效途徑。

本公開的方案，通過對(duì)外植體進(jìn)行預(yù)處理獲得低本底污染材料。經(jīng)過消毒和脫酚化處理減少外植體的褐變，通過降低培養(yǎng)基鹽濃度和添加還原性物質(zhì)來減輕褐變提高了外植體的存活。

本公開的方案，利用組培技術(shù)使得毛葉山桐子組培外植體可以再30天獲得建立無菌系，并通過增值培養(yǎng)基獲得4倍的增值率，通過生根培養(yǎng)基可以獲得80％的生根苗，苗高5-15cm，新根5條以上。移栽練苗成活率達(dá)到90％。可以支持實(shí)現(xiàn)毛葉山桐子的工廠化生產(chǎn)育苗需要。

本領(lǐng)域技術(shù)人員在考慮說明書及實(shí)踐這里公開的公開后，將容易想到本公開的其它實(shí)施方案。本申請(qǐng)旨在涵蓋本公開的任何變型、用途或者適應(yīng)性變化，這些變型、用途或者適應(yīng)性變化遵循本公開的一般性原理并包括本公開未公開的本技術(shù)領(lǐng)域中的公知常識(shí)或慣用技術(shù)手段。說明書和實(shí)施例僅被視為示例性的，本公開的真正范圍和精神由下面的權(quán)利要求指出。

應(yīng)當(dāng)理解的是，本公開并不局限于上面已經(jīng)描述并在附圖中示出的精確結(jié)構(gòu)，并且可以在不脫離其范圍進(jìn)行各種修改和改變。本公開的范圍僅由所附的權(quán)利要求來限制。