本技術涉及植物基因工程，特別涉及一種番茄的組培方法及應用。

背景技術：

1、番茄(solanum?lycopersicum?mill.)是全球普遍栽培的蔬菜農作物之一，具有重要經濟和研究價值。番茄圣尼斯紅果(san?marzano)是一種意大利番茄品種，以其優(yōu)美的外觀、濃郁的口感和多樣的用途而聞名，是一種備受追捧的番茄品種。

2、以轉基因和基因編輯等技術打破生殖隔離、連鎖累贅等因素的限制，可以實現(xiàn)目標性狀的快速精準改良(杜敏敏，周明，鄧磊，李傳友，李常保，番茄分子育種現(xiàn)狀與展望——從基因克隆到品種改良，園藝學報，2017，44(03):581-600)，而再生體系的建立是成功進行遺傳轉化的前提和基礎。研究表明，番茄再生體系因基因型、外植體、激素種類及濃度等而異(王全華，葛晨輝，曹守軍，等，番茄組織再生及其遺傳轉化體系的優(yōu)化，青島農業(yè)大學學報，2007，24(1)：24～27)。如裴華麗等建立了三個番茄品種的組培再生體系，證實基因型及外植體是影響番茄組織培養(yǎng)效果的重要因素，在同一種培養(yǎng)基上3個不同番茄品種的分化率差異較大，誘導不定芽分化的最佳培養(yǎng)基組分濃度各不相同(裴華麗，李美芹，劉永光，等，不同基因型番茄高效組培再生體系的建立，北方園藝，2013，3:373-379)。雖然有關番茄組織培養(yǎng)與遺傳轉化的報道較多，但由于番茄的再生能力因基因型的不同而存在著較大的差異，因此，需對每個特定的品種建立一套高頻再生系統(tǒng)(喬寧寧，鄒愛蘭，陳崇順，番茄寶大906高頻再生系統(tǒng)的建立及其潮霉素選擇壓的測定，江蘇農業(yè)科學，2013，41(002):39-42)。

3、申請內容

4、本技術是鑒于上述問題而進行的，其目的在于提供一種番茄組培方法，該方法有利于提升番茄的組培再生效率。

5、具體如下，本技術第一方面提供了一種番茄組培方法，將番茄外植體侵染處理后進行培養(yǎng)；

6、所述侵染處理包括將番茄外植體添加至侵染菌液漫泡；

7、所述侵染菌液的od600為0.05～0.2。

8、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述侵染菌液包括農桿菌和侵染培養(yǎng)基。

9、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述侵染培養(yǎng)基包括：ms培養(yǎng)基。

10、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述侵染菌液的od600為0.05～0.1。

11、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述培養(yǎng)包括分化培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)中的至少一種。

12、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和植物激素。

13、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)選用的基本培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基。

14、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)選用的植物激素包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸和玉米素中的至少一種。

15、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中植物激素的濃度為0.05mg/l～3.0mg/l。

16、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括基本培養(yǎng)基和植物激素。

17、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)選用的基本培養(yǎng)基包括ms培養(yǎng)基。

18、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)選用的植物激素包括6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸和玉米素中的至少一種。

19、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中植物激素的濃度為0.05mg/l～3.0mg/l。

20、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)選用的植物激素包括6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸。

21、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中6-芐氨基腺嘌的濃度為1.5mg/l～2.5mg/l。

22、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中6-芐氨基腺嘌的濃度為1.5mg/l～2.0mg/l。

23、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中萘乙酸的濃度為0.1mg/l～0.5mg/l。

24、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中萘乙酸的濃度為0.1mg/l～0.3mg/l。

25、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)選用的植物激素包括玉米素；

26、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中玉米素的濃度為1.5mg/l～2.5mg/l。

27、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述分化培養(yǎng)過程中玉米素的濃度為1.5mg/l～2.0mg/l。

28、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)選用的植物激素包括6-芐氨基腺嘌呤和萘乙酸。

29、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中6-芐氨基腺嘌的濃度為1.5mg/l～2.5mg/l。

30、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中6-芐氨基腺嘌的濃度為1.5mg/l～2.0mg/l。

31、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中萘乙酸的濃度為0.01mg/l～0.1mg/l。

32、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中萘乙酸的濃度為0.01mg/l～0.05mg/l。

33、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)選用的植物激素包括玉米素。

34、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中玉米素的濃度為0.5mg/l～1.5mg/l。

35、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述繼代培養(yǎng)過程中玉米素的濃度為0.5mg/l～1.0mg/l。

36、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述培養(yǎng)的條件還包括：溫度為20℃～25℃，光照周期為光培養(yǎng)12h～18h和暗培養(yǎng)6h～12h，培養(yǎng)30天～60天。

37、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述光照周期為光培養(yǎng)12h～16h和暗培養(yǎng)8h～12h。

38、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述漫泡的時間為3min～7min。

39、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述漫泡的時間為5min～7min。

40、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄外植體為番茄下胚軸或子葉。

41、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄包括番茄圣尼斯紅果品種。

42、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄包括番茄圣尼斯紅果品種的分離材料9e206。

43、基于番茄圣尼斯紅果品種創(chuàng)制的分離材料9e206，是一個性狀優(yōu)良的番茄育種骨干材料，葉色深綠，果實形狀正圓偏扁，外觀光滑，單果重約250克，硬，商品性好。

44、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄外植體經過預培養(yǎng)。

45、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述預培養(yǎng)的條件包括：溫度為20℃～25℃，光照周期為光培養(yǎng)12h～18h和暗培養(yǎng)6h～12h，培養(yǎng)30天～60天。

46、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄外植體由番茄苗經過處理得到。

47、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄苗經種植番茄種子得到。

48、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述種植條件包括溫度為20℃～25℃，光照周期為光培養(yǎng)12h～18h和暗培養(yǎng)6h～12h。

49、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述番茄種子經次氯酸鈉溶液消毒后再進行種植。

50、根據(jù)本技術的一些實施方式，所述次氯酸鈉溶液的質量分數(shù)為18％～20％。

51、本技術第二方面提供了本技術第一方面所述的番茄組培方法在制備番茄新品種中的應用。

52、本技術至少具備如下有益效果：

53、本技術系統(tǒng)地研究了不同外植體材料、不同激素濃度和不同農桿菌濃度對番茄再生體系的影響，篩選出適宜番茄離體培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)條件，建立一套優(yōu)化的組培再生體系，為下一步進行外源基因的遺傳轉化、改善番茄果實品質奠定基礎。

54、適當?shù)木簼舛扔欣谵D化效率的提高；該濃度可以顯著提高番茄外植體的成活率和轉化效率。該方法在保證轉化效率的同時，極大地縮短了轉化周期。該方法適用于各種外植體類型，普適性好。

技術實現(xiàn)思路