本發(fā)明屬于牛黃體內(nèi)培植的，具體涉及一種基于溫敏性凝膠的牛黃體內(nèi)培植方法。

背景技術(shù)：

1、牛黃是脊索動(dòng)物門哺乳綱?？苿?dòng)物牛肝臟的膽結(jié)石。在膽囊中產(chǎn)生的稱“膽黃”或“蛋黃”，在膽管中產(chǎn)生的稱“管黃”，在肝管中產(chǎn)生的稱“肝黃”。傳統(tǒng)的人工牛黃在制造過程中牛黃的成形差，牛黃的制造質(zhì)量低，主要原因包括：無額外注入的大腸桿菌使牛的膽囊或膽管發(fā)生細(xì)菌或寄生蟲感染，無法形成持續(xù)有效的牛黃小顆粒；其次，牛黃小顆粒形成時(shí)無相應(yīng)結(jié)構(gòu)對(duì)這些小顆粒進(jìn)行富集，導(dǎo)致牛黃核心成型速度極慢，最終的牛黃成品不是很少就是沒有。為此，需要借助牛黃床，牛黃床(核心)的制作是牛黃生成的基質(zhì)，是牛黃培植的關(guān)鍵。

2、現(xiàn)有專利cn202210870068.x公開了三維復(fù)合牛黃體內(nèi)培植方法，包括如下步驟，s1：植入牛黃床，s2：植入牛黃菌，s3：飼養(yǎng)，s4：添加劑添加進(jìn)行飼養(yǎng)；該三維復(fù)合牛黃體內(nèi)培植方法。具有附著性更好的特點(diǎn)，更容易聚集膽汁中的游離膽鹽顆?！，F(xiàn)有專利cn202010124954.9公開了一種可拆卸牛黃床及牛黃培植方法，可拆卸牛黃床包括網(wǎng)格狀骨架和吸附薄膜，吸附薄膜設(shè)置在骨架內(nèi)表面，骨架從上到下依次包括上蓋、床體和下蓋，上蓋、床體和下蓋相互之間活動(dòng)連接，上蓋、床體和下蓋內(nèi)均設(shè)置有相匹配的孔隔，骨架側(cè)面設(shè)置有緩沖層。然而，上述公開的牛黃床具有以下缺陷：

3、①牛黃床的骨架結(jié)構(gòu)固定，整體外形不可變，植入牛體內(nèi)時(shí)需要切割的創(chuàng)口比較大，不利于牛體健康的恢復(fù)。在進(jìn)行樣膽囊插管植黃床手術(shù)時(shí)，切口一般需要10cm；三維復(fù)合牛黃體內(nèi)培植方法采用開腹手術(shù)植入黃床切口需要8cm，膽囊上也會(huì)有1.5cm的開口?？刹鹦杜｜S床及牛黃培植方法中采用的開腹手術(shù)植入黃床切口需要4-6cm；且術(shù)后均需要復(fù)雜的縫合及至少一周的精心護(hù)理期，才能恢復(fù)常規(guī)飼養(yǎng)，整個(gè)過程操作復(fù)雜，需要專業(yè)人士專業(yè)器具，且可能會(huì)對(duì)牛的健康和育肥產(chǎn)生不良影響；

4、②主體組合式連接結(jié)構(gòu)的牛黃床整體穩(wěn)定性較差，當(dāng)黃床主體內(nèi)部膽汁硬化結(jié)塊后，產(chǎn)生的膨脹可能導(dǎo)致連接件松動(dòng)失效，進(jìn)一步導(dǎo)致牛黃床組件脫離，影響植體牛的健康；

5、③牛黃床中的多層結(jié)構(gòu)容易導(dǎo)致膽汁流動(dòng)受阻，很難穿過黃床內(nèi)部，且牛黃的收集方式為單向收集，會(huì)導(dǎo)致牛黃小顆粒的大量流失，培植的牛黃質(zhì)量差。

6、現(xiàn)有專利cn118020715?a公開了一種牛黃體內(nèi)培植方法，包括：用注射器對(duì)牛膽囊進(jìn)行穿刺，抽離膽汁；步驟二、抽離膽汁后，先注射鈣鹽溶液至膽囊，然后立刻注射多糖溶液至膽囊，使兩種溶液在膽囊內(nèi)產(chǎn)生交聯(lián)反應(yīng)，形成網(wǎng)狀凝膠狀牛黃床；本發(fā)明采用注射方式在牛膽囊內(nèi)生產(chǎn)有機(jī)牛黃床，在膽囊內(nèi)有很好的吸附性，有利于牛黃晶體的吸附，縮短牛黃生產(chǎn)周期，有效解決了以往手術(shù)植入牛黃床對(duì)牛的刺激，牛黃吸附性差，手術(shù)感染造成疾病的各種問題。然而，由于牛膽囊內(nèi)的液體是動(dòng)態(tài)的，該方法無法保證在牛膽囊內(nèi)可以穩(wěn)定的形成網(wǎng)狀凝膠狀牛黃床，其次，鈣鹽和多糖溶液生成弱凝膠，生成的網(wǎng)狀凝膠狀牛黃床的交聯(lián)度以及網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)不可控，無法滿足在形成牛黃初始核心期間不降解。該方法也無法保證形成形狀規(guī)則的牛黃床，很難達(dá)到一般牛黃床的富集效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種基于溫敏性凝膠的牛黃體內(nèi)培植方法，旨在解決上述的問題。本發(fā)明可以適用于牛、羊等動(dòng)物體內(nèi)結(jié)石或者結(jié)晶的富集成型。

2、本發(fā)明主要通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

3、一種基于溫敏性凝膠的牛黃體內(nèi)培植方法，包括以下步驟：

4、步驟s1：制備常溫下可注射的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠；

5、步驟s2：將牛黃床植入到牛膽囊內(nèi)；

6、步驟s3：將所述步驟s1制備的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠與牛黃轉(zhuǎn)化菌混合，并注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)；

7、或者先將所述步驟s1制備的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)，然后，將牛黃轉(zhuǎn)化菌注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)；

8、步驟s4：進(jìn)行正常飼養(yǎng)。

9、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s1中，采用n-異丙基丙烯酰胺、丙烯酰胺和n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺聚合反應(yīng)，得到常溫下可注射的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠；所述n-異丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺的摩爾比為10-3：1；所述n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺的含量為單體總摩爾數(shù)的1％-2％。

10、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s1包括以下步驟：

11、步驟s11：將n-異丙基丙烯酰胺、丙烯酰胺、n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺和表面活性劑加入反應(yīng)器中攪拌溶解；

12、步驟s12：在惰性氣體環(huán)境中加熱到40-80℃，然后，在反應(yīng)器中加入引發(fā)劑，反應(yīng)得到凝膠分散水溶液。

13、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，在50ml的溶液中，所述n-異丙基丙烯酰胺、丙烯酰胺和n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺的用量分別為42mmol、7.4mmol和0.53mmol；所述引發(fā)劑為過硫酸鉀，所述表面活性劑為十二烷基硫酸鈉，所述十二烷基硫酸鈉和過硫酸鉀的用量分別為0.08g和0.22g。

14、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s1還包括步驟s13：在步驟s12制備的凝膠分散水溶液中加入海藻酸鈉以及相容單體和/或相容劑，混合攪拌均勻；然后，加入黏蛋白和牛黃轉(zhuǎn)化菌的營養(yǎng)物質(zhì)，混合攪拌均勻，得到可注射的凝膠水溶液；所述步驟s3中，先將步驟s13制備的可注射的凝膠水溶液導(dǎo)入牛黃床，然后，將牛黃轉(zhuǎn)化菌和鈣鹽溶液注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)。

15、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s1還包括步驟s13：在步驟s12制備的凝膠分散水溶液中加入海藻酸鈉以及相容單體和/或相容劑，混合攪拌均勻；然后，加入牛黃轉(zhuǎn)化菌以及黏蛋白、牛黃轉(zhuǎn)化菌的營養(yǎng)物質(zhì)，混合攪拌均勻，得到可注射的凝膠水溶液；所述步驟s3中，先將步驟s13制備的可注射的凝膠水溶液導(dǎo)入牛黃床，然后，將鈣鹽溶液注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)。

16、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s13中，所述相容單體、相容劑、海藻酸鈉和鈣鹽的摩爾比為0.01-0.1：0.015-0.2：1-20：0.5-5；所述相容單體為多巴胺、單寧酸、花青素、兒茶素、木質(zhì)素中的任意一種或者多種，所述相容劑為聚乙烯醇、聚乙二醇、淀粉、纖維素中的任意一種或者多種。

17、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述相容單體為單寧酸，所述相容劑為聚乙烯醇，且聚乙烯醇的型號(hào)為1788型，所述鈣鹽為乳酸鈣；在50ml的溶液中，所述單寧酸、聚乙烯醇、海藻酸鈉和乳酸鈣的用量分別為0.044mmol、0.067mmol、8.7mmol和2.3mmol。

18、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述步驟s2中，所述牛黃床為可壓縮結(jié)構(gòu)，將壓縮狀態(tài)的牛黃床植入到牛膽囊內(nèi)，牛膽囊內(nèi)的牛黃床處于膨脹狀態(tài)。

19、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，采用微創(chuàng)的形式將壓縮狀態(tài)的牛黃床植入到牛膽囊內(nèi)。本發(fā)明可以將壓縮狀態(tài)的牛黃床以微創(chuàng)的方式植入到牛膽囊內(nèi)，所述微創(chuàng)的植入方式為現(xiàn)有技術(shù)，具體可以選擇內(nèi)窺鏡或者穿刺針等實(shí)現(xiàn)，故不再贅述。本發(fā)明采用可壓縮的牛黃床以及可注射的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠，實(shí)現(xiàn)了微小創(chuàng)口的導(dǎo)入牛膽囊中，解決了現(xiàn)有牛黃體內(nèi)培植創(chuàng)口過大的問題，提高了培植牛黃的產(chǎn)量和質(zhì)量，具有較好的實(shí)用性。

20、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述牛黃床包括黃床主體和蓋體以及彈性骨架，所述黃床主體的兩端分別沿周向設(shè)置有波浪狀的彈性骨架，所述黃床主體為鏤空結(jié)構(gòu)，且黃床主體的兩端端部分別設(shè)置有柔性的蓋體，所述蓋體的中部設(shè)置有流動(dòng)孔。

21、為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，進(jìn)一步地，所述黃床主體由紗網(wǎng)制備得到，所述蓋體由pet網(wǎng)布制備得到，所述彈性骨架由形狀記憶合金制備得到。

22、如圖1所示，牛黃的成核機(jī)理如下：

23、牛的肝臟會(huì)分泌膽固醇與葡萄糖醛酸酯，膽固醇進(jìn)一步合成膽酸，而膽酸可以分解成游離膽酸。

24、葡萄糖醛酸酯會(huì)轉(zhuǎn)化成葡萄糖醛酸膽紅素，牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)分泌的β-葡萄糖醛酸酶會(huì)促使葡萄糖醛酸膽紅素分解成游離膽紅素。

25、游離膽紅素、游離膽酸會(huì)和鈣離子形成膽紅素鈣。膽紅素鈣會(huì)進(jìn)一步與黏蛋白形成膽紅素鈣蛋白高聚物，即牛黃小顆粒。

26、進(jìn)一步地，牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)可以分泌β-葡萄糖醛酸酶，它可以水解可溶性的結(jié)合膽紅素(cb)變?yōu)榉墙Y(jié)合膽紅素(ucb)，后者與鈣、鎂等金屬離子結(jié)合形成膽紅素鈣鹽沉淀，其進(jìn)一步與蛋白—多糖復(fù)合物聚合形成牛黃小顆粒。牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)在活動(dòng)過程中一方面產(chǎn)酸，使膽汁ph值下降，酸性環(huán)境引起膽汁中蛋白質(zhì)的沉降；另一方面，它利用膽汁中的蛋白質(zhì)、碳水化合物等大分子物質(zhì)，結(jié)果導(dǎo)致膽汁的粘度下降。新形成的牛黃小顆粒，在高粘度的膽汁中易懸浮，不易沉降和粘附；在低粘度的膽汁中，則易發(fā)生沉淀、附著和聚集，并形成大的牛黃團(tuán)塊；牛黃小顆粒快速形成大團(tuán)塊后，不易因膽汁流動(dòng)而丟失。

27、其次，牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)可以降解膽汁中的膽酸，導(dǎo)致膽酸的含量下降。膽汁中的膽酸對(duì)游離膽紅素(ucb)有助溶作用，抑制ucb與鈣、鎂等金屬離子的結(jié)合；膽酸本身尚可與鈣離子結(jié)合，抑制膽紅素鈣鹽的形成。膽汁、膽酸的含量減少，有利于ucb與鈣、鎂等金屬離子的結(jié)合，從而促進(jìn)牛黃的形成。

28、牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)可以產(chǎn)生黏液，一方面增加膽汁的黏度，有利于牛黃顆粒的聚集；另一方面可能參與牛黃的形成。

29、牛黃的形成主要包括三個(gè)階段：化學(xué)階段，包括膽汁成份改變、膽固醇結(jié)晶和膽色素顆粒析出；物理階段，通過一定的核心、框架使析出成分凝集成形；成長階段，即在雛形結(jié)石不被膽汁流沖走的條件下，膽汁中析出成分在雛形結(jié)石上逐層累積沉淀過程。其中膽色素顆粒的析出是重要的一環(huán)。如圖1所示，膽囊內(nèi)部的牛黃床中牛黃顆粒的聚集機(jī)理如下：

30、膽汁會(huì)攜帶以上物質(zhì)進(jìn)入黃床，在黃床內(nèi)部形成牛黃小顆粒，且牛黃小顆粒直接沉積在牛黃床上。但是膽汁一直會(huì)流動(dòng)，因此這部分形成的較少。更多的是膽汁攜帶牛黃小顆粒進(jìn)入牛黃床，被凝膠吸附，膽汁則從牛黃床的孔隙中流出。

31、在牛黃核心形成初期，凝膠作用十分顯著。首先牛黃床內(nèi)部的凝膠承載著粘蛋白與營養(yǎng)物質(zhì)，在初期牛黃轉(zhuǎn)化菌(大腸桿菌)與營養(yǎng)物質(zhì)會(huì)暴釋，大腸桿菌會(huì)進(jìn)入膽管、膽囊等組織感染牛體組織并繁殖生長，為牛黃小顆粒的形成提供基礎(chǔ)條件。其次，牛黃床內(nèi)部的凝膠還會(huì)富集牛黃小顆粒。若無凝膠吸附小顆粒，膽汁會(huì)攜帶牛黃小顆粒從牛黃床的流動(dòng)孔流出，即使有部分黏著在壁上，也是散亂分布無法形成核心。若無牛黃床在外保護(hù)，凝膠會(huì)很快降解，且其粘性維持時(shí)間也較短，無法持續(xù)2-3個(gè)月穩(wěn)定地收集牛黃小顆粒。

32、牛黃核心的形成時(shí)間大概是2-4個(gè)月，本發(fā)明制備的凝膠的降解時(shí)間滿足該要求，本發(fā)明制備的凝膠與牛黃核心形成核殼結(jié)構(gòu)。一般的凝膠在體內(nèi)降解速度會(huì)是逐漸加快的一個(gè)過程，因?yàn)榻到獬跗诮Y(jié)構(gòu)，交聯(lián)度完好，降解速度較慢，隨著結(jié)構(gòu)與交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)被破壞速度會(huì)逐漸加快。但是因?yàn)榇撕藲そY(jié)構(gòu)，凝膠外部被牛黃包裹，可以延緩其降解時(shí)間。隨著凝膠結(jié)構(gòu)被破壞，凝膠的比表面積也在增加，其會(huì)提供更多的空位給牛黃小顆粒。在牛黃形成后期，凝膠的降解速度和牛黃的成長也會(huì)形成一種動(dòng)態(tài)平衡。

33、本發(fā)明通過n-異丙基丙烯酰胺(nipaam)、丙烯酰胺(aam)和n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺(mbaam)單體進(jìn)行自由基聚合，制備得到交聯(lián)的聚丙烯酰胺水凝膠，即凝膠分散水溶液。其中過硫酸鉀(kps)作為聚合反應(yīng)的引發(fā)劑，加速自由基的生成以及n-異丙基丙烯酰胺(nipaam)、丙烯酰胺(aam)單體的聚合反應(yīng)；n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺(mbaam)作為交聯(lián)劑，能以共價(jià)鍵的形式連接丙烯酰胺(aam)聚合形成的分子鏈，從而形成三維高分子網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的聚丙烯酰胺水凝膠。

34、在聚合過程中，n-異丙基丙烯酰胺和丙烯酰胺的烯鍵碳碳雙鍵接受引發(fā)劑(過硫酸銨)打開，出現(xiàn)碳正離子，碳正離子在攻擊另一個(gè)雙鍵，類似烷烴光反應(yīng)的鏈增長部分，但是由于加入了n,n′-亞甲基雙丙烯酰胺，他也可以被碳正離子攻擊，參與其聚合反應(yīng)，所以會(huì)在聚丙烯酰胺的單鏈之間出現(xiàn)，形成立體的空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，延長了制備凝膠的降解時(shí)間，滿足了牛黃初始核心形成的周期。

35、所述nipaam中含有疏水的異丙基和親水的酰胺基團(tuán)，因此有著溫敏特性。提高親水基團(tuán)的含量可以提高lcst的溫度，因此引入同樣有酰胺鍵的丙烯酰胺(aam)，可以增加親水基團(tuán)的占比。因此，本發(fā)明還提高了凝膠的lcst溫度，可以讓整個(gè)水凝膠在更接近牛體溫度(37-40℃)的條件下發(fā)生相轉(zhuǎn)變，方便注射導(dǎo)入牛的膽囊中的同時(shí)，可以快速轉(zhuǎn)變成易于富集牛黃顆粒的粘稠狀態(tài)，提高了牛黃培植的效率。

36、本發(fā)明在上述制備的聚丙烯酰胺水凝膠的基礎(chǔ)上，通過鈣離子與海藻酸鈉(sa)分子鏈上的羧基形成配位鍵可瞬間形成交聯(lián)的凝膠網(wǎng)絡(luò)的特性，最終可以形成雙網(wǎng)絡(luò)相互纏結(jié)的互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的溫敏性凝膠。所述單寧酸(ta)與聚乙烯醇(pva)的加入，增強(qiáng)了兩層凝膠網(wǎng)絡(luò)的相容性。聚乙烯醇富含羥基，可以和單寧酸(ta)、聚丙烯酰胺水凝膠形成氫鍵，增強(qiáng)了互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的溫敏性凝膠的連接相容性和交聯(lián)強(qiáng)度。其次，單寧酸(ta)富含多酚基團(tuán)，其不僅會(huì)氧化產(chǎn)生醌基，可以和蛋白質(zhì)的氨基、巰基形成共價(jià)結(jié)合；還可以與羥基，羰基形成氫鍵，因此可以很好的附著黏蛋白，促使牛黃顆粒在凝膠表面富集成型，具有良好的吸附牛黃小顆粒的功能。

37、本發(fā)明的有益效果如下：

38、(1)本發(fā)明采用微創(chuàng)器械將可壓縮牛黃床導(dǎo)入牛膽囊中，以及采用注射的方式在牛黃床中導(dǎo)入凝膠溶液，所產(chǎn)生的創(chuàng)口僅1cm。不需要復(fù)雜的手術(shù)器械及開腹縫合操作，且術(shù)后不用復(fù)雜的護(hù)理，一天后既可常規(guī)飼養(yǎng)，不會(huì)對(duì)牛的健康或育肥產(chǎn)生不良影響。

39、(2)本發(fā)明制備的溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠的相轉(zhuǎn)變溫度為37-40℃，可以滿足常溫下可注射的形式，且在牛膽囊體內(nèi)呈現(xiàn)粘稠狀態(tài)，擴(kuò)大了對(duì)牛黃小顆粒的附著面積以及對(duì)牛黃小顆粒的粘著性。本發(fā)明將凝膠注射入牛黃床中，溫敏性凝膠在牛黃床中富集形成牛黃初始核心。所述牛黃床對(duì)凝膠進(jìn)行保護(hù)，使凝膠不會(huì)被快速降解，同時(shí)牛黃床的保護(hù)使凝膠的粘性維持時(shí)間延長，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定持續(xù)的富集牛黃小顆粒，形成牛黃初始核心，有利于牛黃體內(nèi)培植的效率和質(zhì)量，具有較好的實(shí)用性。

40、(3)本發(fā)明直接將牛黃轉(zhuǎn)化菌及其營養(yǎng)物質(zhì)混入凝膠中，在牛膽囊中，凝膠會(huì)一邊富集牛黃顆粒，一方面釋放牛黃轉(zhuǎn)化菌，持續(xù)釋放的牛黃轉(zhuǎn)化菌可以使膽囊或膽管發(fā)生細(xì)菌感染，形成持續(xù)有效的牛黃小顆粒。本發(fā)明將牛黃轉(zhuǎn)化菌與凝膠形成混合物再植入牛黃床，能保證菌濃度，也能保證牛黃床復(fù)合體懸浮于膽汁里，還能增加牛黃小顆粒的收集效率，具有較好的實(shí)用性。

41、(4)本發(fā)明為了快速使牛的膽囊或膽管發(fā)生細(xì)菌感染，先將溫敏性聚丙烯酰胺水凝膠注射導(dǎo)入牛黃床內(nèi)，然后緊接著在牛黃床內(nèi)注射牛黃轉(zhuǎn)化菌，其中牛黃轉(zhuǎn)化菌一部分會(huì)快速感染牛膽囊，一部分會(huì)負(fù)載在凝膠中。大濃度釋放的牛黃轉(zhuǎn)化菌會(huì)快速使牛的膽囊或膽管發(fā)生細(xì)菌感染，初期促使形成大量的牛黃小顆粒，負(fù)載在凝膠表面的牛黃轉(zhuǎn)化菌會(huì)持續(xù)釋放，保證了后期牛黃核心的穩(wěn)定形成，具有較好的實(shí)用性。

42、(5)牛黃轉(zhuǎn)化菌是牛黃形成過程的重要環(huán)節(jié)，它可以為牛黃的形成創(chuàng)造條件。凝膠一方面可以裝載牛黃轉(zhuǎn)化菌，保證其不被流動(dòng)的膽汁沖走，同時(shí)其還可以裝載促進(jìn)牛黃轉(zhuǎn)化菌生長所需要的生長因子、營養(yǎng)蛋白等，另一方面，凝膠本身就是一種營養(yǎng)物質(zhì)，可以作為牛黃轉(zhuǎn)化菌生長的營養(yǎng)源泉，其次凝膠還可以吸附游離在膽汁中的牛黃小顆粒，保證牛黃小核心的形成，而牛黃床則可以保證凝膠復(fù)合物在膽汁內(nèi)原位凝固時(shí)有一個(gè)規(guī)則的形狀。

43、(6)現(xiàn)有傳統(tǒng)未交聯(lián)的n-異丙基丙烯酰胺(nipaam)聚合物的相轉(zhuǎn)變溫度(lcst)溫度為30-32℃，加入丙烯酰胺(aam)可改善聚丙烯酰胺水凝膠的溫敏特性，使其相轉(zhuǎn)變溫度更接近牛體溫度，可以讓整個(gè)水凝膠在更接近牛體溫度(37-40℃)的條件下發(fā)生相轉(zhuǎn)變，方便將聚丙烯酰胺水凝膠注射導(dǎo)入牛的膽囊中，還可以快速的將聚丙烯酰胺水凝膠轉(zhuǎn)變成易于富集牛黃顆粒的粘稠狀態(tài)，提高了牛黃培植的效率。

44、(7)本發(fā)明首先制備得到可以在牛體內(nèi)相轉(zhuǎn)變的可注射的凝膠水溶液，然后基于注射加入的鈣鹽溶液，制備得到互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的溫敏性凝膠。本發(fā)明制備的凝膠的降解時(shí)間滿足牛黃初始核心形成的時(shí)間要求，也滿足方便操作的要求，易于富集牛黃顆粒。本發(fā)明制備的互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的溫敏性凝膠，在延長了凝膠降解時(shí)間的同時(shí)，還增加了凝膠中可附著的面積，而且提高了凝膠對(duì)牛黃顆粒的附著強(qiáng)度，有效提升了牛黃培植的質(zhì)量，具有較好的實(shí)用性。

45、(8)牛黃床加凝膠復(fù)合物的組合可以使整個(gè)黃床復(fù)合體的密度與膽汁相近且略高，可以讓它沉浸于膽汁中。牛黃床本身體積小，重量輕，在還未形成牛黃核心前，由于中心填充了可降解凝膠復(fù)合物，且凝膠降解程度低，整個(gè)復(fù)合體能很好的懸浮于膽囊中；在牛黃核心形成后，凝膠降解程度增大，牛黃核心重量增加，整個(gè)黃床質(zhì)量不發(fā)生變化。因此在整個(gè)培育過程中牛黃核心的形成與凝膠的降解可以處于一個(gè)平衡狀態(tài)，能保證從黃床植入、牛黃核心的形成到凝膠完全降解、直至最后取黃過程中，整個(gè)黃床一直懸浮于膽汁中。只有在末期，牛黃大量聚集到將整個(gè)牛黃床包裹住后半懸浮或沉于膽囊底部。由于此時(shí)牛黃床被牛黃包裹住幾乎不會(huì)直接接觸到膽囊內(nèi)壁，整個(gè)復(fù)合體能接觸膽囊壁的只有形成的牛黃，其外表光滑，對(duì)膽囊上皮細(xì)胞與組織的刺激性小，能保證植體牛的健康狀態(tài)不受影響。