本發(fā)明涉及羊肚菌種植，具體涉及一種羊肚菌液體菌種溫室栽培方法。
背景技術(shù)：
1、高原獨(dú)特的氣候條件及生態(tài)系統(tǒng)蘊(yùn)育著豐富的生物多樣性，其中不乏野生羊肚菌資源。羊肚菌風(fēng)味獨(dú)特、肉質(zhì)鮮美，富含多種營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)，具有極高的藥食兩用價(jià)值，深受世界人民喜愛。
2、羊肚菌在商業(yè)化生產(chǎn)已十余年，產(chǎn)業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大并發(fā)展迅速，羊肚菌栽培面積不斷擴(kuò)大、產(chǎn)量不斷提高，產(chǎn)業(yè)發(fā)展已初具規(guī)模。除少數(shù)栽培模式如工廠立體化栽培、林下仿生栽培等，羊肚菌人工栽培主要以設(shè)施溫室栽培為主，且因高原地區(qū)獨(dú)特的冷涼氣候，能夠?qū)崿F(xiàn)一年兩季栽培。
3、目前羊肚菌栽培技術(shù)中栽培種的制作以原種接種至固體培養(yǎng)菌袋為主，固體培養(yǎng)袋基質(zhì)主要以小麥、木屑和玉米芯等為主，再輔以其它營養(yǎng)配料制成，培養(yǎng)菌袋制種成本高，且小麥消耗量大，羊肚菌栽培節(jié)糧技術(shù)攻關(guān)日趨緊迫。液體菌種具有培養(yǎng)周期短、播種方便、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，但直接應(yīng)用于生產(chǎn)卻未見報(bào)道。
4、因此，提供一種羊肚菌液體菌種溫室栽培方法成為亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種羊肚菌液體菌種溫室栽培方法，具體包括以下步驟，
2、步驟一，配置培養(yǎng)基
3、將馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂和水按20g:2g:2g:100ml混合，溫度121℃，壓力103kpa滅菌20min，冷卻后得pda培養(yǎng)基；優(yōu)選的，制成平板培養(yǎng)皿；
4、將蛋白胨、酵母浸粉、mgso4·7h2o、kh2po4、k2hpo4、葡萄糖和蒸餾水按比例2g:1g:0.5g:0.5g:1g:20g:1l混合，溫度121℃，壓力103kpa滅菌20min，冷卻后得cym液體培養(yǎng)基；或者將馬鈴薯、葡萄糖和水按200g:20g:1l混合，溫度121℃，壓力103kpa滅菌20min，冷卻后得pdb培養(yǎng)基；
5、將小麥、油菜秸稈、腐殖土、玉米芯、石灰、按質(zhì)量比50:30:10:9:1混合，噴水至60-65％，用12cm×24cm規(guī)格的聚丙烯菌袋裝袋后溫度12l℃，壓力103kpa滅菌3h，得外源營養(yǎng)袋；優(yōu)選的，在外源營養(yǎng)袋制備前3d將小麥在25℃水中浸泡16-20h、再與油菜秸稈和玉米芯拌勻噴水進(jìn)行堆料發(fā)酵，發(fā)酵完成后再與其他物料混合。
6、步驟二，純化菌種
7、將羊肚菌母種接種至pda培養(yǎng)基中，封口，暗環(huán)境20℃恒溫培養(yǎng)5d，選取無污染的pda培養(yǎng)基，用打孔器打取1個(gè)直徑9mm的菌餅，將菌餅接種至新的pda培養(yǎng)基中，封口，再次進(jìn)行暗環(huán)境20℃恒溫培養(yǎng)；
8、步驟三，制備菌種液
9、待菌絲長(zhǎng)滿pda培養(yǎng)基時(shí)，選取無污染的pda培養(yǎng)基，每個(gè)pda培養(yǎng)基用打孔器打20個(gè)菌餅，接種至cym液體培養(yǎng)基，封口，20℃、160rpm恒溫振蕩培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿cym液體培養(yǎng)基時(shí)，得菌種液；
10、或者待菌絲長(zhǎng)滿pda培養(yǎng)基時(shí)，選取無污染的pda培養(yǎng)基，每個(gè)pda培養(yǎng)基用打孔器打20個(gè)菌餅，接種至pdb培養(yǎng)基，封口，20℃、160rpm恒溫振蕩培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿pdb培養(yǎng)基時(shí)，得菌種液；
11、優(yōu)選的，制備菌種液時(shí)，還可以將制備好的菌種液與液體培養(yǎng)基按體積比1:10混合，封口，20℃、160rpm恒溫振蕩培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿液體培養(yǎng)基時(shí)，得新的菌種液。
12、步驟四，播種
13、播種時(shí)間：春季栽培，土壤溫度≤15℃、空氣溫度≤20℃時(shí)進(jìn)行。一般可在2月上旬至3月中旬播種。
14、秋季栽培，溫室內(nèi)氣溫＞0℃條件下進(jìn)行。一般從10月中下旬至12月中旬均可播種。
15、播種前30d處理土壤，清潔整理溫室內(nèi)雜物，去除土壤中殘留的農(nóng)余廢棄物及雜質(zhì)，保持溫室整潔干凈，清理10-15d后，將溫室外層棉氈用卷簾機(jī)升至棚頂，內(nèi)層塑料膜密閉，采用陽光暴曬高溫悶棚的方式，殺滅土壤表層雜菌害蟲。然后在土壤中施生石灰50-100kg/畝，旋耕土壤表層20-30cm，澆水至土壤含水率22-28％，7-15d后土壤表面微潤，此時(shí)翻耕土壤表層15-20cm并做畦，畦面寬0.8-1.2m，畦高10-15cm，畦間設(shè)30cm作業(yè)道；
16、溫室內(nèi)土壤ph?6.5-7.5時(shí)進(jìn)行播種，將菌種液用水稀釋5-10倍后均勻撒在畦面上，菌種液用量140-200l/畝，然后澆水至土壤含水率20-25％，播種7-10d，擺放外源營養(yǎng)袋；
17、與固體菌種栽培不同，液體菌種栽培很少或不出現(xiàn)“菌霜”。
18、優(yōu)選的，播種后耙土2-3cm覆蓋菌種；
19、優(yōu)選的，外源營養(yǎng)袋用量為1500袋/畝，每袋間隔20-30cm交錯(cuò)擺放于畦面；最優(yōu)選的，擺放前用消毒器具將袋子一側(cè)劃口2道或釘排打9-18個(gè)孔，劃口或孔口朝下，扣放在畦面上，稍用力壓實(shí)，使羊肚菌菌絲緊密接觸外源營養(yǎng)袋。營養(yǎng)袋擺放后，空氣與土壤溫濕度控制與發(fā)菌期管理相同，若發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)袋內(nèi)有雜菌污染，迅速將外源營養(yǎng)袋撤離至棚外，避免雜菌擴(kuò)散，加重病害。
20、步驟五，生長(zhǎng)期管理
21、發(fā)菌期管理：空氣溫度≤20℃，空氣相對(duì)濕度80-95％，土壤溫度≤15℃，土壤含水率15-25％；
22、優(yōu)選的，發(fā)菌期溫棚多數(shù)時(shí)間閉簾管理，如果棚內(nèi)氣溫和土壤溫度偏高，可選擇在早晚太陽升起前或落山后打簾通風(fēng)降溫，通風(fēng)時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以免空氣相對(duì)濕度驟降難以保濕。外界氣溫偏低時(shí)，可在正午時(shí)分打簾升溫，注意打簾到遮陽網(wǎng)處即可，避免陽光直射大棚。溫濕度適宜時(shí)，每隔2-3d選擇適宜時(shí)段給大棚通風(fēng)換氣。
23、催菇期管理：空氣濕度85-95％，土壤含水率25-30％；羊肚菌播種40-80d，且地溫保持8-15℃時(shí)進(jìn)行水分刺激，閉棚管理5-10d后可見原基；
24、優(yōu)選的，所述水分刺激為噴灌澆水，澆水至土壤含水量為22-28％。
25、原基分化至幼菇期管理：氣溫4-18℃，空氣相對(duì)濕度＞85％；
26、子實(shí)體生長(zhǎng)期管理：1.5-3cm小菇形成后，氣溫10-18℃，空氣相對(duì)濕度80-90％，土壤含水率20-25％；
27、子實(shí)體成熟階段，空氣相對(duì)濕度70-85％，降低土壤含水量至18-22％；
28、步驟六，子實(shí)體總長(zhǎng)度為12-14cm，菌蓋長(zhǎng)度7-9cm時(shí)，即可采收。
29、本發(fā)明還包括病蟲害防治，少施或不施用化學(xué)農(nóng)藥及滅殺試劑等。對(duì)于霉菌性病害，加強(qiáng)前期土壤滅菌處理，發(fā)現(xiàn)污染營養(yǎng)袋及時(shí)撤出大棚，并在污染袋附近撒施生石灰；對(duì)于霉菌污染子實(shí)體，要及時(shí)摘除；對(duì)于盤菌病害，減少溫棚羊肚菌連作年限，栽培兩年后，輪作其他農(nóng)作物。在溫室內(nèi)要放置老鼠夾，粘鼠板及老鼠藥等。在蛞蝓經(jīng)常出沒的地方撒施生石灰，如見蛞蝓大量活動(dòng)痕跡，撒施四聚乙醛進(jìn)行誘殺。菇蚊菇蠅等飛蟲：可通過懸掛粘蟲板和誘蟲燈等誘殺捕殺。
30、本發(fā)明有以下優(yōu)點(diǎn)：
31、(1)節(jié)省成本：目前羊肚菌栽培種以固體料袋菌種為主，其中小麥為栽培種的主成分原材料，一般菌種用量125-150kg/畝；液體菌種用種量140-200l/畝。固體麥粒菌種成本約3元/kg，加之其它輔料1元/kg，固體栽培種每畝用種成本為至少為500元以上；而液體菌種成本僅為1元/l，每畝用種成本最低僅為140元，較固體菌種成本減少70％以上，大大節(jié)約了生產(chǎn)成本，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
32、(2)節(jié)約時(shí)間：羊肚菌固體栽培種培養(yǎng)一般需要20d以上，而液體菌種培養(yǎng)一般僅需7d，較固體菌種培養(yǎng)節(jié)省時(shí)間65％，大大縮短了制種時(shí)間，提高生產(chǎn)時(shí)效。