路線圖。
【具體實施方式】
[0026] 下面結(jié)合附圖1與實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0027] 如圖1的技術(shù)路線圖所示：一種白葉枯病抗性粳稻育種新方法，該育種新方法的 步驟如下。
[0028] ( 1)選取待改良梗稻品種/系和抗白葉枯病軸稻抗源： 選取農(nóng)藝性狀良好的粳稻品種/系，因為秈粳交雜種F1代通常具有株高偏高、生育期 超親晚熟的特點，故該農(nóng)藝性狀良好的粳稻品種/系是指產(chǎn)量高、米質(zhì)優(yōu)良、白葉枯病抗性 有待改良的以及株高不宜過高、生育期早熟或中熟的粳稻品種/系；然后對選取的粳稻品 種/系進行排秈培養(yǎng)基的誘導(dǎo)培養(yǎng)，以檢驗該粳稻品種/系是否適用于排秈培養(yǎng)基中進行 花藥誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)培養(yǎng)的過程如下：（1. 1)取材與預(yù)處理：將選取的農(nóng)藝性狀良好的 粳稻品種/系大田常規(guī)栽培，取葉枕距為5?7cm、穗色呈淡黃綠色、花藥淡黃色且長度約 為穎殼的1/3?1/2、孕穗不裂開的健壯主穗為供試材料，保留2?3張葉片，75%酒精擦拭 表面后，用濕毛巾包裹且外套塑料袋，置4°C下低溫預(yù)處理3天；（1. 2)接種：預(yù)處理后，將 含主穗的稻苞剪下，稻苞是指稻苞頂枕距為7cm至穗下節(jié)間上部0. 5cm的區(qū)域內(nèi)剪材獲得 的部分，然后將該稻苞浸泡于75%的酒精中處理3?4min，接著將該稻苞轉(zhuǎn)移于超凈工作 臺中剝離主穗，進一步剝?nèi)⌒∷霝榇笮【鶆虻男≈Ч＃總€小支梗上花藥數(shù)量限制為15? 25粒，接下來用消毒過的紗布包裹小支梗后用濃度為0. 1%的升汞滅菌不低于lOmin，無菌 水漂洗3?4次，打開紗布晾干，最后用消毒過的剪刀剪開花藥上部，抖藥法接種花藥于排 秈培養(yǎng)基，排秈培養(yǎng)基配方為：N6大量元素+N6微量元素+N6有機質(zhì)+2mg/L2, 4-D+O. 5mg/ LNAA+O. 5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0. 8%植物凝膠，該排秈培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;(1. 3)誘導(dǎo) 培養(yǎng)：將排秈培養(yǎng)基置于24?26°C的黑暗環(huán)境中誘導(dǎo)愈傷組織，30?40天后在花藥的邊 緣出現(xiàn)白-淡黃色的無定型細胞團，并在花藥接種培養(yǎng)50天后統(tǒng)計花藥愈傷組織誘導(dǎo)率， 選定花藥愈傷組織誘導(dǎo)率高于25%的農(nóng)藝性狀良好的粳稻品種/系作為待改良粳稻品種/ 系。同時選取農(nóng)藝性狀良好且含有白葉枯病高抗基因的秈稻品種/系作為抗白葉枯病秈稻 抗源，抗白葉枯病秈稻抗源是指產(chǎn)量高、米質(zhì)優(yōu)良、高抗白葉枯病的秈稻品種/系，確保該 軸稻抗源含有白葉枯病尚抗基因。
[0029] (2)對選取的待改良粳稻品種/系進行粗毒素耐性濃度的鑒定： 粗毒素耐性濃度鑒定過程如下：（2. 1)粗毒素的制備：將混合白葉枯病菌株接種于裝 有100mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中擴繁，牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方為：牛 肉膏0.5%+蛋白胨1%+似(：10.5%411值7.5,281：、130印111恒溫振蕩培養(yǎng)5011后，然后將培養(yǎng) 的種子液按2. 5%的接種量轉(zhuǎn)接到1500mL牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，繼續(xù)擴繁72h，再用 8500rpm離心20min收集上清液，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至原體積的1/10,然后再采用乙酸乙酯 法提取粗毒素；（2. 2)對選取的待改良粳稻品種/系進行粗毒素耐力濃度鑒定：分別在分 化培養(yǎng)基中加入一定梯度濃度的粗毒素提取液，然后將步驟（1)中選定的待改良粳稻品種 /系誘導(dǎo)培養(yǎng)的花藥愈傷組織轉(zhuǎn)移進分化培養(yǎng)基，分化培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基+2mg/ L6-BA+0. 2mg/LNAA+梯度濃度粗毒素提取液且分化培養(yǎng)基的pH值為6. 0,誘導(dǎo)培養(yǎng)30?40 天后統(tǒng)計愈傷組織分化率，并選擇達到合適篩選壓力水平濃度的粗毒素提取液作為三交F1 雜交種花藥培養(yǎng)粗毒素選擇壓濃度，其中合適篩選壓力水平濃度是指選定的待改良粳稻品 種/系誘導(dǎo)培養(yǎng)的花藥愈傷組織在含有粗毒素的分化培養(yǎng)基中的分化率為〇. 8%?1. 2%時 的粗毒素濃度。
[0030] (3)雜交育種獲得三交F1雜交種： 將大田種植篩選的抗白葉枯病秈稻抗源與廣親和材料秈粳架橋獲得雜交種F1，選取雜 交種F1的花藥再與待改良粳稻品種/系雜交獲取雜交種三交F1。
[0031] (4)對三交F1雜交種進行排秈培養(yǎng)基花藥培養(yǎng)： 三交F1雜交種正季播種，選取健壯主穗花藥進行排秈培養(yǎng)基花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得花藥 愈傷組織，排秈培養(yǎng)基配方為：N6大量元素+N6微量元素+N6有機質(zhì)+2mg/L2, 4-D+O. 5mg/ LNAA+0. 5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0. 8%植物凝膠，排秈培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;當三交F1雜 交種的花藥愈傷組織誘導(dǎo)率低于3%時，需將三交F1雜交種與粳稻親本回交獲得BC1F1雜 交種，BC1F1雜交種正季播種，選取健壯主穗重新進行排秈培養(yǎng)基花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)，直至獲得 誘導(dǎo)率不低于3%的花藥愈傷組織，挑選直徑0. 4?0. 8cm的花藥愈傷組織接種于添加了選 擇壓濃度粗毒素的分化培養(yǎng)基，分化培養(yǎng)基配方為：MS無機鹽+MS有機物+蔗糖3%+瓊脂 0? 7%+KT2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+水解蛋白lg/L+篩選壓力水平的梯度濃度的粗毒素提取液 且分化培養(yǎng)基的pH值為5. 8,在溫度27?29°C、光14h/暗10h的條件下培養(yǎng)，獲得花培幼 苗；待花培苗長至2cm之后轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基配方為：l/2Ms大 量+Ms微量+Ms有機物+蔗糖3%+瓊脂0. 8%且生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8,待花培苗長至 8cm后移栽至周轉(zhuǎn)箱壯苗，10?15天后移栽入大田。
[0032] (5)花培苗單株收種獲得花培家系，進一步農(nóng)藝性狀、白葉枯病抗性篩選獲得改良 的梗稻新品系： 大田種植花培苗，單株收種獲得白葉枯病抗性改良的粳稻花培家系若干，不同花培家 系進一步大田播種，以待改良粳稻品種/系親本為對照，篩選獲得農(nóng)藝形狀良好且白葉枯 病抗性得到改良的粳稻新品系。 實施例
[0033] (1)分別篩選W08479和贛早秈40號作為粳稻育種親本和秈稻白葉枯病抗源： 多年的育種實踐發(fā)現(xiàn)，育種主干品系W08479具有產(chǎn)量高、米質(zhì)優(yōu)良的特點，同時， W08479的株高兩年測定平均只有97. 4cm，全生育期僅有151天，感白葉枯病，2011年正季取 W08479花藥接種于排秈培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，實驗發(fā)現(xiàn)W08479愈傷組織的誘導(dǎo)率高達45% (花藥培養(yǎng)操作步驟同前)，非常適合該技術(shù)路線的粳稻育種親本的要求。贛早秈40號是江 西省農(nóng)科院水稻所采用早熟優(yōu)質(zhì)早秈品系"85-140"為母本、"珍龍13"為父本雜交育成的 中早熟早秈水稻新品種，對多地白葉枯病病區(qū)的多個白葉枯病菌系表現(xiàn)高度抗性，非常適 合作為抗白葉枯病育種的秈稻抗源。
[0034] (2)對W08479進行粗毒素耐性濃度的鑒定： 2011年對選取的W08479進行粗毒素耐力濃度鑒定，在分化培養(yǎng)基中加入0、5%、10%、 15%、20%、25%的粗毒素提取液，配制分化培養(yǎng)基，分化培養(yǎng)基配方為：MS基本培養(yǎng)基+2mg/ L6-BA+0. 2mg/LNAA+梯度濃度粗毒素提取液，pH值6. 0,然后將步驟（1)中誘導(dǎo)培養(yǎng)的花藥 愈傷組織轉(zhuǎn)移進分化培養(yǎng)基，統(tǒng)計愈傷組織分化率。結(jié)果如下：
【主權(quán)項】
1. 一種白葉枯病抗性粳稻育種新方法，其特征在于：該育種新方法的步驟如下： (1) 選取待改良粳稻品種/系和抗白葉枯病秈稻抗源：選取農(nóng)藝性狀良好的粳稻品種/ 系并對選取的粳稻品種/系進行排秈培養(yǎng)基的誘導(dǎo)培養(yǎng)，最終選定花藥愈傷組織誘導(dǎo)率高 于25%的粳稻品種/系作為待改良粳稻品種/系，選取農(nóng)藝性狀良好且含有白葉枯病高抗 基因的秈稻品種/系作為抗白葉枯病秈稻抗源； (2) 對選取的待改良粳稻品種/系進行粗毒素耐性濃度的鑒定：分別