一種篩選杜鵑花耐旱種質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物育種領(lǐng)域，具體涉及一種篩選杜鵑花耐旱種質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]杜醒花是杜醒花科(Ericaceae)杜醒花屬(Rhododendron)植物的泛稱，其種質(zhì)資源極其豐富，目前探明有近千種，栽培品種更是數(shù)以萬計(jì)，具較高的觀賞價值和應(yīng)用價值，是我國傳統(tǒng)十大名花和世界三大高山花丼之一，亦是盆栽和園林綠化的重要花丼種類，在世界花丼產(chǎn)業(yè)中占有十分重要的地位。杜鵑花根系纖細(xì)如發(fā)，對水分反映十分敏感。多數(shù)杜鵑花種質(zhì)畏干旱，故杜鵑花在野外生長、園林綠化及室內(nèi)觀賞栽培中，其生長最常受到環(huán)境中干旱因素的影響。目前，種植者多采取遮蔭、補(bǔ)充葉面水分、加大澆水次數(shù)、選用保水基質(zhì)等措施來緩解干旱危害，但這些園藝措施費(fèi)工費(fèi)時、收效甚微，加大了勞動成本。因此，選育抗旱節(jié)水的杜鵑花品種并用于生產(chǎn)，是減少干旱危害的最根本途徑。
[0003]杜鵑花的耐旱能力因起源、地理環(huán)境等的不同存在較大差異，故開展杜鵑花耐旱種質(zhì)的篩選，是開展杜鵑花耐旱育種的基礎(chǔ)。杜鵑花屬植物豐富的野生種質(zhì)資源攜帶許多優(yōu)異基因，是杜鵑花遺傳改良的重要資源，而實(shí)生繁殖則是杜鵑花主要繁殖方式之一，且科研工作者們從杜鵑花種子繁殖的實(shí)踐認(rèn)識到，從種子萌發(fā)獲得的幼苗開始馴化，使之適應(yīng)當(dāng)?shù)氐臍夂颍且环N有效的引種馴化手段。目前，杜鵑花的研宄多集中在引種馴化、繁殖栽培上，有關(guān)耐旱性方面研宄報(bào)道較少，如何以種子為材料進(jìn)行杜鵑花耐旱種質(zhì)篩選尚屬未知。故以種子為材料，選取合適耐旱指標(biāo)，建立簡單、快速的，并能基本上客觀反映利用種子繁殖的杜鵑花耐旱真實(shí)情況的耐旱篩選方法，篩選耐旱種質(zhì)資源，為杜鵑花耐旱育種及大量的利用種子繁殖的杜鵑花種質(zhì)資源和雜交育種后代的耐旱性評價奠定基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種以種子為材料，快速可靠、簡便易行的篩選杜鵑花耐旱種質(zhì)的方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案:
[0006]一種篩選杜鵑花耐旱種質(zhì)的方法，其內(nèi)容包括:選用杜鵑花種子為對象，利用聚乙二醇6000 (PEG-6000)模擬干旱脅迫，采用培養(yǎng)皿濾紙法進(jìn)行培養(yǎng)，選擇相對發(fā)芽率為耐旱指標(biāo)進(jìn)行篩選，具體步驟如下:
[0007](I)種子的選取與消毒:選取同一時期的杜鵑花種子，用質(zhì)量百分含量為10%次氯酸鈉或質(zhì)量百分含量為0.5%的高錳酸鉀浸泡消毒lOmin，清水洗凈吸干；
[0008](2) 15% PEG-6000模擬干旱脅迫下種子萌發(fā)培養(yǎng):將經(jīng)步驟(I)消毒處理后的杜鵑花種子均勻排布于培養(yǎng)皿內(nèi)已浸透15% PEG-6000溶液的濾紙上，每培養(yǎng)皿I份杜鵑花種質(zhì)，100粒，4次以上重復(fù)，置于溫度20?25°C的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，每天向?yàn)V紙加15% PEG-6000溶液數(shù)滴，以浸透濾紙并稍有剩余為度，每3d更換I次濾紙；
[0009](3)蒸餾水(對照)下種子萌發(fā)培養(yǎng):將經(jīng)步驟(I)消毒處理后的杜鵑花種子均勻排布于培養(yǎng)皿內(nèi)已浸透蒸餾水濾紙上，每培養(yǎng)皿I份杜鵑花種質(zhì)，100粒，重復(fù)次數(shù)和培養(yǎng)條件同步驟(2)，每天向?yàn)V紙加蒸餾水?dāng)?shù)滴，以浸透濾紙并稍有剩余為度；
[0010](4)耐旱指標(biāo)相對發(fā)芽率的測定與耐旱種質(zhì)的篩選:培養(yǎng)20d后，以胚根長度達(dá)種子長度的1/2為發(fā)芽標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽種子數(shù)，按公式發(fā)芽率=(種子發(fā)芽總數(shù)/供試種子總數(shù)(100粒))X100%計(jì)算發(fā)芽率，按公式相對發(fā)芽率=(15%PEG-6000模擬干旱脅迫下的發(fā)芽率/對照的發(fā)芽率)X 100%計(jì)算相對發(fā)芽率，比較所測得的相對發(fā)芽率，相對發(fā)芽率較高的杜鵑花種子判定為較耐旱的杜鵑花種質(zhì)。
[0011]對上述技術(shù)方案進(jìn)行進(jìn)一步闡述:
[0012]在本發(fā)明中:所述的杜鵑花種子為杜鵑花蒴果采集后經(jīng)充分風(fēng)干、篩選去雜后的成熟飽滿、貯藏期不超過10個月的種子。
[0013]本發(fā)明經(jīng)過以下多項(xiàng)對比試驗(yàn)，優(yōu)選總結(jié)出上述最佳的技術(shù)參數(shù):
[0014]1、種子萌發(fā)適宜溫度的選擇:選擇成熟飽滿，消毒處理過杜鵑花種子，均與排布于內(nèi)附浸透蒸餾水濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，培養(yǎng)皿分別置于10°c、15°C、20°C、25°C、30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理100粒，重復(fù)4次，20d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。結(jié)果表明10°C、15°C下杜鵑花種子發(fā)芽率不足20%，20°C、25°C萌發(fā)率較高，二者差異不顯著。
[0015]2、不同貯藏期種子的選擇:分別選擇貯藏4、6、8、10、12個月的成熟飽滿的杜鵑花種子，經(jīng)消毒處理后采用培養(yǎng)皿濾紙法培養(yǎng)，即將不同貯藏期的種子均勻排布于內(nèi)附浸透蒸餾水濾紙的培養(yǎng)皿中，20?25°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理100粒，重復(fù)4次，20d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。結(jié)果表明種子發(fā)芽率隨貯藏時間的延長而降低，貯藏12個月的種子發(fā)芽率顯著下降，貯藏4到10個月的種子發(fā)芽率差異不明顯。
[0016]3、PEG-6000模擬干旱脅迫濃度的確定試驗(yàn):設(shè)置6個PEG-6000脅迫濃度，分別為
O(蒸餾水，對照)、5 %、10 %、15 %、20 %和25 %。將貯藏6個月籽粒成熟飽滿的杜鵑花種子經(jīng)消毒后，均勻排布于培養(yǎng)皿內(nèi)浸透了不同濃度PEG-6000溶液的濾紙上，置于20?25°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理100粒，重復(fù)4次，20d后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。結(jié)果表明:當(dāng)PEG-6000濃度彡10%時，種子發(fā)芽率隨PEG-6000濃度的增加而降低；iPEG-6000濃度彡15%時，種子發(fā)芽率顯著低于對照；當(dāng)PEG-6000濃度多25%，種子發(fā)芽率極低或不萌發(fā)；PEG_6000濃度為15%時，種子發(fā)芽率較對照低40-60%，基本符合耐旱的臨界值(比對照低50%左右)，故確定進(jìn)行杜鵑花耐旱種質(zhì)篩選的PEG-6000濃度為15%。
[0017]4、耐旱指標(biāo)的選擇:在上述試驗(yàn)1、2、3的基礎(chǔ)上，將貯藏6個月籽粒成熟飽滿的杜鵑花種子經(jīng)消毒后，分別置于培養(yǎng)皿內(nèi)浸透了濃度O (對照)和15% PEG-6000溶液的濾紙上，于20?25°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每處理100粒，重復(fù)4次，每天記錄種子發(fā)芽數(shù)，20d后每處理選10株測量幼苗生長量，計(jì)算發(fā)芽率(種子發(fā)芽總數(shù)/供試種子總數(shù)(100粒)X100