一種三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法。
【背景技術】
[0002] 鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo屬蘭科石斛屬多年生附生草 本植物，又稱黑節(jié)草，是一種珍貴的藥用植物，自古以來被認為是滋陰補益的珍品，并被道 家養(yǎng)生經典《道藏》譽為"中華九大仙草之首"，民間則稱其為"救命仙草"，《中國藥典》稱 其具有"益胃生津，滋陰清熱"功效，用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛 熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨瘺軟；現(xiàn)代研宄表明，鐵皮石斛含有多糖、生物 堿、氨基酸等成分，能顯著提高機體免疫功能，具有養(yǎng)胃出津、補腎益力、滋陰清熱、耐缺氧、 抗疲勞、抗腫瘤等功效，現(xiàn)代藥理學研宄發(fā)現(xiàn)，石斛還具有抗衰老和擴張血管的作用，目前， 國內以鐵皮石斛為原料和配叢的產品有數十種，如石斛夜光丸、石斛片等。
[0003] 我國出產的野生鐵皮石斛主要分布在秦嶺淮河以南的安徽、湖南、云南、貴州、廣 東、廣西、福建、江西、浙江等地區(qū)，其中又以云南最多，秦嶺淮河的最低溫度可超過-20°C， 大多數1月份的氣候在〇°C左右。
[0004] 野生鐵皮石斛喜蔭涼、濕潤的環(huán)境，常附在高海拔懸崖峭壁或林內樹干和巖石縫 隙中，主要分布于安徽、江西、浙江、福建、廣東、廣西、云南等省，由于其藥用價值高、生長條 件特殊和分布受局限，且經長期人為采挖，野生資源瀕臨滅絕，為了保護和發(fā)展鐵皮石斛資 源，充分發(fā)揮鐵皮石斛巨大的資源優(yōu)勢，浙江、江西、安徽、云南、四川等地紛紛開展鐵皮石 斛的人工種植，人工種植鐵皮石斛一般控制室溫在日溫5°C?30°C，夜溫15?20°C，即鐵 皮石斛適宜的生長溫度，但在鐵皮石斛的種植過程中，特別是江西、安徽等山區(qū)，藥農們在 種植鐵皮石斛過程中，常因局部低溫超過〇°C以下導致鐵皮石斛長勢差、品質無法保證等 問題，因此，選育出品質純正、適合這些區(qū)域人工栽培的耐寒鐵皮石斛優(yōu)良新品種是勢在必 行。
[0005] 鐵皮石斛種子極小，無胚乳，自然繁殖率極低，加之價格過高導致的過度采挖以及 自然環(huán)境的變化，野生鐵皮石斛已經瀕臨滅絕，被列為國家二級保護植物。
[0006] 目前國內已有浙江、廣東、云南等省的科研單位與企業(yè)，對鐵皮石斛開展了人工選 育研宄，選育出仙斛1號、仙斛2號、中科1號、紅鑫1號等新品種（系），這些新品種（系） 都是一些全同胞或半同胞家系，即對特定新本進行自交或雜交后，再用其蒴果（種子）繁殖 形成下一代種苗群體，且選育這些新品種（系）的主要目的是高產優(yōu)質，對于抗性方面的研 宄未見公開報道。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的旨在提供一種三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法，使鐵皮石斛改良 群體的整體表現(xiàn)、有效成分含量得到提高，同時優(yōu)良單株的出現(xiàn)頻率大幅度提高。
[0008] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的一種三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮 石斛雜交育種一鐵皮石斛群體改良一鐵皮石斛優(yōu)良品系選育一鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁， 具體步驟如下：
[0009] I:鐵皮石斛雜交育種
[0010] i.收集三清山野生鐵皮石斛，同時收集霍山米斛；
[0011] ii.以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以霍山米斛粗壯植株為父本，進行雜 交，得到蒴果；
[0012] II:鐵皮石斛群體改良
[0013] i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植 株，即為基礎群體；
[0014] ii.將基礎群體置入人工氣候箱中進行培養(yǎng)，調查人工氣候箱的溫度設置，使每天 的氣溫變化從〇°C逐步上升至30°C，其中0°C保持2小時，然后根據基礎群體在人工氣候箱 中的整體表現(xiàn)和有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu)良單株；
[0015] iii.以ii中選出的優(yōu)良單株進行植物組織細胞培養(yǎng)擴繁，獲得優(yōu)良個體；
[0016] iv.選擇一個以上種植區(qū)進行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較試驗，控制植株之間 合理的生長距離，從而選出優(yōu)良個體，繼續(xù)培養(yǎng)或種植，待種子成熟后混收種子，即為改良 群體；
[0017] III:運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育
[0018] 在步驟II得到的改良群體中選擇所需要的優(yōu)良個體，并利用植物組織細胞培養(yǎng) 技術對這些個體進行擴繁獲得后代，選擇一個以上地區(qū)進行耐寒鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗，選 出優(yōu)良后代培育成新品系；
[0019] IV.運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁
[0020] 運用植物組織細胞培養(yǎng)技術將步驟III中所得的新品系快速繁殖，得到耐寒穩(wěn)定 且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
[0021] 上述技術方案中，步驟I(i)分步中所用的鐵皮石斛母本為三清山野生鐵皮石斛， 父本為霍山米斛。
[0022] 上述技術方案中，步驟II中的基礎群體為能在0°C以上環(huán)境整體表現(xiàn)好且有效成 分含量達到有關標準規(guī)定的優(yōu)良鐵皮石斛。
[0023] 上述技術方案中，步驟III中擴繁的材料既可運用蒴果（內含種子）采用植物組 織細胞培養(yǎng)也可用所得單株的莖段或者根莖進行無性繁殖。
[0024] 上述技術方案中，步驟IV所述的新品系快繁的材料可以是蒴果（內含種子）也可 以是植株的莖段或根莖。
[0025] 上述技術方案中，步驟Il(iii)分步中的優(yōu)良個體可以是無性系，也可以是蒴果 (內含種子）。
[0026] 步驟III中的優(yōu)良個體可以是無性系，也可以是蒴果（內含種子）。
[0027] 步驟II(ii)分步中所述有效成分是指鐵皮石斛多糖和甘露糖，其中多糖含量以 無水葡萄糖計不得少于25. 0 %，甘露糖含量為13. 0 %?38. 0 %。
[0028] 上述技術方案中，步驟I、II、III、IV步驟中進行鐵皮石斛培養(yǎng)時溫度控制是每天 從〇°C上升至30°C，且0°C應保持2小時；所用的培養(yǎng)基可以是植物組織細胞培養(yǎng)所用的常 規(guī)培養(yǎng)基，也可以根據所需采用自制培養(yǎng)基進行，光照強度、光照時間按照鐵皮石斛組織細 胞培養(yǎng)常規(guī)操作。
[0029] 上述技術方案中，耐寒鐵皮石斛能在0°C甚至0°C以下的環(huán)境中生長良好，不被凍 傷。
[0030] 本發(fā)明的三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法與現(xiàn)有技術相比具有如下優(yōu)異效果。
[0031] 本發(fā)明通過采用三清山野生鐵皮石斛與霍山米斛雜交后所得后代，運用植物組 織細胞培養(yǎng)技術，把群體改良與優(yōu)良單株的選育、優(yōu)良新品系的選育與優(yōu)良種苗的快繁相 結合，利用低溫誘導，根據耐寒和有效成分含量來篩選出品種，大大加快了新品系的選育速 度，且通過形成鐵皮石斛優(yōu)良品種，豐富鐵皮石斛種質資源，推動經濟發(fā)展具有重要的價 值。
[0032] 本發(fā)明提高了鐵皮石斛優(yōu)良種苗選育的準確性，加快鐵皮石斛育種的速度，大大 提高了鐵皮石斛育種效率；快速地為鐵皮石斛大田生產提供能夠保證鐵皮石斛質量且耐寒 性穩(wěn)定有效成分含量高的優(yōu)良種苗。
【具體實施方式】
[0033] 下面結合實例對本發(fā)明的三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法做進一步的詳細說 明。
[0034] 本發(fā)明的一種三清山耐寒鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮石斛雜交育種一鐵皮 石斛群體改良一鐵皮石斛優(yōu)良品系