，XuX，YinW，SimaY，Xu S.AntioxidativecapacityinthefatbodyofBombyxmoriisincreasedfollowing oraladministrationof4-methylumbelliferone.CompBiochemPhysiolCToxicolP harmacol. 2014, 159:31-37.)(FangY，WangH，ZhuWW，WangL，LiuHJ，XuX，YinWM，Sima YHjXuSQ.Antioxidativepropertiesof4-methylumbelliferonearerelatedto antibacterialactivityinthesilkworm(Bombyxmori)digestivetract.Journalof ComparativePhysiologyB, 2014，）。由此可見(jiàn)，使用家蠶構(gòu)建疾病動(dòng)物模型具有巨大的發(fā) 展?jié)摿Α?br>
【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了一種快速的高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法，在家 蠶幼蟲(chóng)成熟并停止進(jìn)食后，破壞或堵塞其吐絲孔，靜置保護(hù)36h即得高蛋白血癥的家蠶模 型。
[0014] 在一些實(shí)施方案中，所述破壞吐絲孔的方法為高溫燙傷或激光燙傷。
[0015] 在一些實(shí)施方案中，所述堵塞吐絲孔的方法為低熔點(diǎn)石蠟封涂幼蟲(chóng)頭部前端。
[0016] 在一些實(shí)施方案中，所述靜置保護(hù)條件為20°C-30°C、70% -90%的濕度、自然光 照。
[0017] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了一種高蛋白血癥的家蠶模型，所述高蛋白血癥的家蠶 模型由上述制備方法制備得到。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法操作簡(jiǎn)單，可以 快速地獲得循環(huán)血總蛋白最高水平在正常對(duì)照動(dòng)物1〇〇%至350%范圍的高蛋白血癥的家 蠶模型，在不出現(xiàn)致死個(gè)體至1〇〇 %致死范圍內(nèi)自由控制控制動(dòng)物死亡率。本發(fā)明所述制備 方法制備得到的高蛋白血癥的家蠶模型動(dòng)物組織退化與組織重塑變慢和異常，發(fā)育異常率 和死亡率顯著升高，可用于篩選克服家蠶蛹階段的發(fā)育異常和致死性的藥物及篩選改善循 環(huán)血蛋白代謝活性的藥物。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。
[0020] 圖1為家蠶幼蟲(chóng)吐絲孔及頭部外形圖；
[0021] 圖2為家蠶高蛋白血癥疾病模型用于藥物篩選時(shí)各種處理的外部形態(tài)。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述， 顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的 實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都 屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0023] 家蠶幼蟲(chóng)的絲腺是特化的表皮組織，專(zhuān)一合成絲蛋白質(zhì)，是已知蛋白質(zhì)合成能力 最強(qiáng)大的動(dòng)物組織，也是一種與腫瘤細(xì)胞相似的快速生長(zhǎng)組織，其在幼蟲(chóng)期3. 5周內(nèi)重量 急速增長(zhǎng)了近1萬(wàn)倍，合成超過(guò)生物體自身重量30%的絲蛋白質(zhì)。家蠶幼蟲(chóng)在成熟后會(huì)吐 出絕大部分合成并儲(chǔ)存在絲腺中的蛋白質(zhì)，形成蠶繭的繭層（繭殼），并在隨后的變態(tài)過(guò) 程中通過(guò)自噬作用將絲腺組織解離，將絲腺腔內(nèi)的剩余絲蛋白質(zhì)和絲腺組織的蛋白質(zhì)一同 釋放到循環(huán)血淋巴。進(jìn)一步通過(guò)一種類(lèi)似人類(lèi)肝臟的代謝組織脂肪體的代謝作用，協(xié)同血 淋巴逐步將循環(huán)血淋巴中的游離蛋白質(zhì)分解為氨基酸，然后進(jìn)一步進(jìn)行氧化分解或轉(zhuǎn)化利 用。
[0024] 本發(fā)明在家蠶幼蟲(chóng)成熟后開(kāi)始吐絲前，或者吐絲過(guò)程中，通過(guò)控制絲腺中蛋白質(zhì) 的外分泌程度，然后利用化蛹變態(tài)過(guò)程中蠶絲腺組織的退化分解，控制快速釋放到循環(huán)血 淋巴中的蛋白質(zhì)含量，形成循環(huán)血總蛋白水平顯著高于正常對(duì)照，并維持幾乎整個(gè)蛹發(fā)育 時(shí)期，但蛋白水平可控的高蛋白血癥疾病模型家蠶。
[0025] 本發(fā)明提供了 一種快速的高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法。
[0026] -種高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法，在家蠶幼蟲(chóng)成熟并停止進(jìn)食后或者吐絲 過(guò)程中，破壞或堵塞其吐絲孔，繼續(xù)飼養(yǎng)36h即得高蛋白血癥的家蠶模型。
[0027] 本發(fā)明高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法中所述家蠶可以使用正常家蠶，也可以 使用其它疾病模型、行為遺傳模型和生長(zhǎng)發(fā)育模型突變品系，組合構(gòu)建雙疾病或多疾病模 型。
[0028] 本發(fā)明高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法中所述破壞家蠶吐絲孔的方法可以采 用任何使家蠶吐絲孔受損進(jìn)而阻止幼蟲(chóng)吐出絲蛋白的方法。
[0029] 在一些實(shí)施方案中，所述破壞吐絲孔的方法為高溫燙傷或激光燙傷。
[0030] 本發(fā)明高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法中所述堵塞吐絲孔的方法可以采用任 何無(wú)毒材料使家蠶吐絲孔堵塞進(jìn)而阻止幼蟲(chóng)吐出絲蛋白的方法。
[0031] 在一些實(shí)施方案中，所述堵塞吐絲孔的方法為低熔點(diǎn)石蠟封涂幼蟲(chóng)頭部前端。低 熔點(diǎn)石蠟，熔點(diǎn)38-54°C，可以有效堵塞吐絲孔同時(shí)不會(huì)對(duì)家蠶幼蟲(chóng)造成傷害。
[0032] 本發(fā)明高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法中家蠶在被破壞或堵塞吐絲孔后在常 規(guī)條件下靜置保護(hù)。
[0033] 在一些實(shí)施方案中，所述靜置保護(hù)條件為20°C-30°C、70% -90%的濕度、自然光 照。
[0034] 本發(fā)明還提供了由上述制備方法制備得到的高蛋白血癥的家蠶模型。
[0035] 以正常吐絲家蠶為對(duì)照，本發(fā)明制備得到的高蛋白血癥的家蠶模型和對(duì)照家蠶在 不同時(shí)期的形態(tài)有顯著區(qū)別，如圖2所示。其中高蛋白血癥蠶為25°C、70%-80%的濕度、自 然光照條件下，吐絲開(kāi)始Oh用低熔點(diǎn)石蠟封堵家蠶吐絲孔后得到的疾病模型蠶。由圖2可 見(jiàn)吐絲開(kāi)始后36h時(shí)，正常家蠶時(shí)發(fā)育成為預(yù)蛹，而疾病模型蠶仍然是幼蟲(chóng)狀態(tài)；吐絲開(kāi)始 后60h時(shí)，正常家蠶已經(jīng)發(fā)育成為蛹，而疾病模型蠶仍然為預(yù)蛹后期；吐絲開(kāi)始后312h時(shí)， 正常家蠶已經(jīng)發(fā)育成為成蟲(chóng)，而疾病模型蠶為不完全變態(tài)的半化蛹。由此可見(jiàn)，本發(fā)明制備 得到的高蛋白血癥的家蠶模型動(dòng)物組織退化與組織重塑變慢和異常，發(fā)育異常率和死亡率 顯著升高。
[0036] 進(jìn)一步，分別在吐絲開(kāi)始后Oh至48h開(kāi)始破壞或堵塞吐絲孔，觀察家蠶吐出絲比 例與死亡率及循環(huán)血總蛋白最高水平的關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0037] 表1破壞或堵塞家蠶吐絲孔的時(shí)期與吐出絲比例、死亡率、循環(huán)血總蛋白最高水 平的關(guān)系
[0038]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法，在家蠶幼蟲(chóng)成熟并停止進(jìn)食后或者吐絲過(guò) 程中，破壞或堵塞其吐絲孔，靜置保護(hù)36h即得高蛋白血癥的家蠶模型。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，所述破壞吐絲孔的方法為高溫燙傷或激光燙傷。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，所述堵塞吐絲孔的方法為低熔點(diǎn)石蠟封涂幼蟲(chóng)頭 部前端。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的制備方法，所述飼養(yǎng)條件為20°C_30°C、 70 % -90 %的濕度、自然光照。
5. 權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的制備方法制備得到的高蛋白血癥的家蠶模型。
6. 權(quán)利要求5所述的高蛋白血癥的家蠶模型在篩選改善循環(huán)血蛋白代謝活性的藥物 中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，公開(kāi)了一種高蛋白血癥的動(dòng)物模型的制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所述高蛋白血癥的動(dòng)物模型的制備方法，在家蠶幼蟲(chóng)成熟并停止進(jìn)食后或者吐絲過(guò)程中，破壞或堵塞其吐絲孔，靜置保護(hù)36h即得高蛋白血癥的家蠶模型。本發(fā)明所述高蛋白血癥的家蠶模型的制備方法操作簡(jiǎn)單，可以快速地獲得循環(huán)血總蛋白最高水平在正常對(duì)照動(dòng)物100％至350％范圍的高蛋白血癥的家蠶模型，在不出現(xiàn)致死個(gè)體至100％致死范圍內(nèi)自由控制動(dòng)物死亡率。本發(fā)明制備得到的高蛋白血癥的家蠶模型動(dòng)物組織退化和組織重塑過(guò)程變慢和異常，發(fā)育異常率和死亡率顯著升高，可用于篩選克服此后階段發(fā)育異常和致死性的藥物及篩選改善循環(huán)血蛋白代謝活性的藥物。
【IPC分類(lèi)】A01K67-04, G01N33-68
【公開(kāi)號(hào)】CN104542507
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410819673
【發(fā)明人】徐世清, 陳學(xué)東, 王璐, 王歡, 司馬楊虎, 殷為民, 陶卉, 邢瑞, 劉安琪, 鄢思琪, 王玉龍
【申請(qǐng)人】蘇州大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2014年12月25日