一種水榆花楸組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種水榆花楸組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]水榆花楸(a7/?i/b7ia)為薔薇科花楸屬落葉喬木,主要分布于東北、華北、西北、華中、華東地區(qū)。水榆花楸在春季白花閃爍，夏季翩翩羽葉，秋季金葉紅果相映，著實(shí)是一種頗為美觀(guān)的園林綠化和山地造林樹(shù)種。其木材色澤美觀(guān)，結(jié)構(gòu)細(xì)致，可做器具、家具，樹(shù)皮也可做染料，成為我國(guó)珍貴的用材樹(shù)種。其果實(shí)、莖皮具有很高的藥用價(jià)值，具有活血散瘀、止咳降氣的功效，果實(shí)還可釀酒和制果醬。
[0003]水榆花楸是我國(guó)東部及華北山區(qū)的珍貴用材和造林樹(shù)種，也是北方城市綠化的優(yōu)良樹(shù)種，同時(shí)有著較高的藥用價(jià)值。由于采種資源不足、種子繁殖率低、育苗周期長(zhǎng)等原因，導(dǎo)致水榆花楸資源日益枯竭,造成市場(chǎng)上水榆花楸苗木供不應(yīng)求的局面?；趪?guó)內(nèi)外水榆花楸組培的研究現(xiàn)狀，加上有鑒于水榆花楸的組培快繁體系還未健全，本發(fā)明以水榆花楸種子為外植體，通過(guò)無(wú)菌苗獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了水榆花楸離體再植株，建立水榆花楸組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對(duì)促進(jìn)水榆花楸規(guī)模化發(fā)展具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種水榆花楸組培快繁方法，本發(fā)明以水榆花楸種子為外植體，通過(guò)無(wú)菌苗獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了水榆花楸離體再植株，建立水榆花楸組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種水榆花楸組培快繁方法，包括以下的步驟:
(I)種子消毒及播種:選用當(dāng)年的水榆花楸種子，以2?4°C低溫處理30?60天。挑選飽滿(mǎn)的種子在流水下沖洗I?3h后，于超凈工作臺(tái)中以70%?80%乙醇溶液浸泡20?60s,無(wú)菌水沖洗3?5次,再用0.1%?0.5%升萊溶液消毒5?15min,無(wú)菌水沖洗3?5次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分，取出完整的種胚，胚根處朝下垂直插入到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001χ，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)情況。
[0006](2)誘導(dǎo)培養(yǎng):剪取步驟(I)獲得的無(wú)菌苗上I?2cm的帶芽莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。
[0007](3)增殖培養(yǎng):剪取步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的帶2?4片葉且大小、狀態(tài)一致的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)45天后統(tǒng)計(jì)增殖情況。
[0008](4)生根培養(yǎng):切取步驟(3)增殖中獲得高2.5?3.5cm左右的幼苗并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照12?14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C，空氣相對(duì)濕度為75%?80%的條件下培養(yǎng)30天后統(tǒng)計(jì)生根情況。
[0009](5)煉苗移栽:將生根培養(yǎng)基上獲得的具備移栽條件的瓶苗進(jìn)行煉苗，瓶苗移至常溫下4?5天后，打開(kāi)瓶蓋2?3天，然后洗去附著于苗根系上的培養(yǎng)基，移栽至盛有由泥炭土:珍珠巖:蛭石=3:1:1的移栽培養(yǎng)基質(zhì)的容器袋中進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)容器袋移栽I株生根苗，移栽時(shí)需將基質(zhì)壓實(shí)，并進(jìn)行單株套袋，早晚噴霧，保證生長(zhǎng)環(huán)境潮濕。移栽7天后剪去塑料袋兩角，14天后完全脫袋，移栽30天后統(tǒng)計(jì)成活率。
[0010]上述步驟(I)所述的萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+1.0?4.0mg/LGA3+1.0?3.0g/L AC+15 ?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(2 )所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.1?L Omg/LNAA+1.0?3.0mg/LKT+3.0 ?10.0mg/L 6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.0?5.0mg/L6-BA+0.1?1.0mg/LZT+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0013]上述步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:MS+0.1?1.0mg/L IBA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:水榆花楸(5brto5.alnifolia)為薔薇科花楸屬落葉喬木,是我國(guó)東部及華北山區(qū)的珍貴用材和造林樹(shù)種，也是北方城市綠化的優(yōu)良樹(shù)種，同時(shí)有著較高的藥用價(jià)值。由于采種資源不足、種子繁殖率低、育苗周期長(zhǎng)等原因，導(dǎo)致水榆花楸資源日益枯竭,造成市場(chǎng)上水榆花楸苗木供不應(yīng)求的局面。本發(fā)明以水榆花楸種子為外植體,通過(guò)無(wú)菌苗獲得、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等過(guò)程成功獲得了水榆花楸離體再植株，建立水榆花楸組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對(duì)促進(jìn)水榆花楸規(guī)模化發(fā)展具有重要現(xiàn)實(shí)意義。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0016]實(shí)施例1
(O種子消毒及播種:選用當(dāng)年的水榆花楸種子，以2°c低溫處理45天。挑選飽滿(mǎn)的種子在流水下沖洗1.5h后，于超凈工作臺(tái)中以75%乙醇溶液浸泡35s，無(wú)菌水沖洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，無(wú)菌水沖洗3次后用無(wú)菌濾紙吸干表面的水分,取出完整的種胚，胚根處朝下垂直插入到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。接種后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為25001x，置于培養(yǎng)溫度為26°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后種子萌發(fā)率達(dá)到93.6%。所述的萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+3.0mg/LGA3+l.5g/L AC+ 18g/L蔗糖+4.5g/L瓊脂，pH為5.7。
[0017](2)誘導(dǎo)培養(yǎng):剪取步驟(I)獲得的無(wú)菌苗上I?2cm的帶芽莖段并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001χ，置于培養(yǎng)溫度為26°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)30天后誘導(dǎo)率為83.7%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/LKT+6.0mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +4.5g/L 瓊脂，pH 為 5.5。
[0018](3)增殖培養(yǎng):剪取步驟(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)得到的帶2?4片葉且大小、狀態(tài)一致的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基進(jìn)行不定芽增殖培養(yǎng)。接種后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為25001x，置于培養(yǎng)溫度為27°C，空氣相對(duì)濕度為75%的條件下培養(yǎng)45天增殖系數(shù)為21.5。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+5.0mg/L6-BA+0.8mg/L ZT+30g/L 蔗糖 +4.5g/L 瓊脂，pH 為 5.5。
[0019](4)生根培養(yǎng):切取步驟(3)增殖中獲得高2.5?3.5cm左右的幼苗并接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根。接種后置于每天光照13小時(shí)，光照強(qiáng)度為2500