擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及植物無性快繁技術(shù)領域，具體地說是一種擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]擎天樹(Parashorea chinensis Wang Hsie.)，龍腦香科柳桉屬，常綠高大喬木，為亞洲熱帶雨林中最繁茂、最具代表性的樹種。樹干可高達五六十米，雄居林冠之上，木材堅硬、耐腐性強，木材紋理直，結(jié)構(gòu)均勻，加工容易，刨切面光滑，花紋美觀，為制造各種家具的高級用材，具有重要經(jīng)濟價值和科學研宄價值，是國之瑰寶。擎天樹分布狹窄，只分布在西雙版納的補蚌和廣納里新寨至景飄一帶的20平方公里范圍內(nèi)；生長環(huán)境大部分為原始溝谷雨林及山地雨林，多成片生長，組成獨立的群落，形成奇特的自然景觀，是中國的一級保護植物。
[0003]擎天樹開花結(jié)實較晚，一般在胸徑達40厘米以上才開花結(jié)實，結(jié)實稀少，且每隔
2-5年才開花結(jié)實I次，落果嚴重，不易采種。擎天樹的種子發(fā)芽很快，在林地上1-4 d便發(fā)芽，在高溫多雨環(huán)境，有些成熟果尚在母樹上，種子就已發(fā)芽，嚴重影響著苗木培育的成功率。擎天樹若采用嫩枝扦插或硬枝扦插無性繁殖技術(shù)，季節(jié)性強，扦插成活率70 %以上的時間是在每年的3月至7月。由于擎天樹枝條內(nèi)含酚類物質(zhì)，嫩枝扦插褐化嚴重，硬枝扦插不定根發(fā)生時間長，如遇上干旱或高溫梅雨惡劣氣候條件，擎天樹枝條容易干枯或腐爛致死。因擎天樹生物特性特異，嚴重限制著該資源的開發(fā)利用。采用組培無性繁殖技術(shù)是促進擎天樹發(fā)展的有效途徑。由于擎天樹幼嫩莖段密布絨毛，滅菌難度大。為了獲取擎天樹組培快繁繁殖體，探索擎天樹發(fā)芽種子滅菌的方法尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是為了保持種子生命力，提高增殖率，全年無間斷生產(chǎn)苗木，提供一種擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法。
[0005]本發(fā)明的方案是通過這樣實現(xiàn)的:
一種擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法，其特征在于:包括預處理、滅菌、初代培養(yǎng)工序，主要操作步驟為:
(1)預處理:將擎天樹發(fā)芽種子的種翅去掉，用清水沖洗種子后，再剝除種殼，置于30-35 °C無菌水內(nèi)浸洗2-5 min，得到種胚備用；
(2)滅菌:將備用種胚置于質(zhì)量濃度0.8-0.9 %。升汞溶液中浸泡，用30-35 °C無菌水清洗5-8次，得到滅菌種胚待培養(yǎng)；
(3)初代培養(yǎng):將滅菌種胚接種到初代培養(yǎng)基中作一次初代培養(yǎng)，接種3d后種胚開始分株，胚軸伸長，接種20-30 h有褐化物質(zhì)產(chǎn)生時，將種胚轉(zhuǎn)接到新的初代培養(yǎng)基中作二次初代培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接2-3次，得到長有兩對真葉，頂芽并帶有一對托葉的組培苗。
[0006]以上所述的浸泡的時間為2-5 min。
[0007]以上所述的初代培養(yǎng)基配方的體積濃度為:MS + 80-120 mg/L肌醇+ 8-10 g/L 卡拉膠 + 2-3 mg/L 6-BA + 0.5-1.5 mg/L NAA + 5-15 mg/L VC + 15-45 g/L 鹿糖，pH6.0-7.0o
[0008]以上所述的初代培養(yǎng)控制光照強度為1500-3000 lux，光照時間為10_15 h/d，溫度為 25±3 °C。
[0009]以上所述的初代培養(yǎng)基配方的體積濃度為:MS + 100 mg/L肌醇+ 9 g/L卡拉膠+ 2.5 mg/L 6-BA +1.0 mg/L NAA + 15 mg/L VC + 30 g/L 蔗糖，PH6.6。
[0010]以上所述的初代培養(yǎng)的條件為:光照強度2000 lux,光照時間12 h/d,溫度25°C。
[0011]本發(fā)明具備以下的優(yōu)點和積極效果:
(I)本發(fā)明采用0.8-0.9%。升汞溶液對擎天樹種胚進行滅菌，既可以有效地殺死附著在外植體表面的細菌及真菌芽孢，又能防止種胚中毒，保持外植體的生命力，獲取優(yōu)質(zhì)的無菌外植體。
[0012](2)本發(fā)明在初代培養(yǎng)階段，在接種20-30 h有褐化物質(zhì)產(chǎn)生時，將種胚轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接2-3次的培養(yǎng)，能有效預防種胚褐化，提高培養(yǎng)繁殖成功率，枯死率
3-10%，無菌率 70-94 %。
[0013](3)本發(fā)明通過對初代培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化，肌醇促進胚狀體和芽的形成，縮短培養(yǎng)時間，提高培養(yǎng)效率，同時在培養(yǎng)基中添加VC可以有效防止培養(yǎng)過程中的褐化現(xiàn)象。
[0014](4)本發(fā)明方法操作過程簡便，條件溫和，培養(yǎng)周期短，增殖率高，可滿足全年無間斷生產(chǎn)苗木的要求，具有較好的經(jīng)濟效益和社會效益。
【附圖說明】
[0015]圖1為擎天樹種胚用0.9 %。升汞滅菌后接種在初代培養(yǎng)基上的狀況圖。
[0016]圖2為種胚胚芽伸長狀況圖。
[0017]圖3為種胚長出一對真葉的狀況圖。
[0018]圖4為種胚長出兩對真葉的狀況圖。
【具體實施方式】
[0019]以下結(jié)合實施例描述本發(fā)明一種擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法，這些描述并不是對本
【發(fā)明內(nèi)容】
的限定。
[0020]實施例1
將擎天樹發(fā)芽種子的種翅去掉，用清水沖洗后，再剝除種殼得到完整種胚；將種胚置于35°C無菌水內(nèi)浸洗3 min，再將種胚置于質(zhì)量濃度0.9 %。升汞溶液中浸泡3 min，用35°C無菌水清洗7次，然后接種到含有體積濃度MS + 100 mg/L肌醇+ 9 g/L卡拉膠+ 2.5 mg/L6-BA +1.0 mg/L NAA + 10 mg/L VC + 30 g/L蔗糖，pH=6.6的初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，初代培養(yǎng)控制光照強度2000 lux，光照時間12 h/d，溫度25°C，接種20-25 h有褐化物質(zhì)產(chǎn)生時，將種胚轉(zhuǎn)接到新的初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接3次，得到長有兩對真葉，頂芽并帶有一對托葉的組培苗。
[0021]本例培養(yǎng)繁殖成功率較高，枯死率3%，無菌率94%。
[0022]實施例2
將擎天樹發(fā)芽種子的種翅去掉，用清水沖洗后，再剝除種殼得到完整種胚；將種胚置于30°C無菌水內(nèi)浸洗2 min，再將種胚置于質(zhì)量濃度0.8 %。升汞溶液中浸泡2 min，用30°C無菌水清洗5次，然后接種到含有體積濃度MS + 80 mg/L肌醇+ 8 g/L卡拉膠+2 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L NAA + 5 mg/L VC +15 g/L蔗糖，pH=6.0的初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，初代培養(yǎng)控制光照強度1500 lux,光照時間10h/d，溫度22°C，接種25-30 h有褐化物質(zhì)產(chǎn)生時，將種胚轉(zhuǎn)接到新的初代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接3次，得到長有兩對真葉，頂芽并帶有一對托葉的組培苗。
[0023]本例培養(yǎng)繁殖成功率較高，枯死率1%，無菌率88%。
[0024]實施例3
本實施例中擎天樹發(fā)芽種子的組培繁殖方法如下:
將擎天樹發(fā)芽種子的種翅去掉，用清水沖洗后，再剝除種殼得到完整種胚；將種胚置于32°C無菌水內(nèi)浸洗4 min，再將種胚置于質(zhì)量濃度0.8 %。升汞溶液中浸泡4 min，用32°C無菌水清洗6次，然后接種到含有體積濃度MS + 90mg/L肌醇+ 10 g/L卡拉膠+ 3 mg/L6-