代單株，利用5個(gè)特異性的功能標(biāo)記對(duì)BC芯代單株進(jìn)行檢測(cè)，選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株與中組I號(hào)回交，獲得BC5F1代種子113粒;
[0023]6.種植BC5F1代單株，利用5個(gè)特異性的功能標(biāo)記對(duì)BC芯代單株進(jìn)行檢測(cè)，選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株與中組I號(hào)回交，獲得BC6F1代種子216粒；
[0024]7.種植BC6Fl代單株，利用5個(gè)特異性的功能標(biāo)記對(duì)BC4F1代單株進(jìn)行檢測(cè)，選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株共36株；將同時(shí)攜帶P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的36個(gè)BC6F1代單株分別收獲，每單株收I穗，得到36個(gè)BC6F2代株系；
[0025]8.種植36個(gè)BC6F2代株系，每株系種6株，成熟時(shí)每株系隨機(jī)收I穗，得到36個(gè)BC6F3代株系；
[0026]9.種植36個(gè)BC6F3代株系，每株系種6株，成熟時(shí)每株系隨機(jī)收I穗，得到36個(gè)BC6F4代株系；
[0027]10.種植36個(gè)BC6F4代株系，每株系種6株，每株系選I個(gè)單株提取葉片DNA利用5個(gè)特異性的功能標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其中13個(gè)株系同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因，這13個(gè)BC6F4代株系為導(dǎo)入了 5個(gè)稻瘟病抗性基因，而農(nóng)藝性狀又和中組I號(hào)相似的最終改良品系。
[0028]檢測(cè)P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因是否存在的特異性的功能標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法為根據(jù)已報(bào)道的Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的DNA序列自行開(kāi)發(fā)。
[0029]檢測(cè)一個(gè)水稻單株是否同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的方法為:利用5個(gè)自行開(kāi)發(fā)的相應(yīng)的特異性功能標(biāo)記分別PCR擴(kuò)增該單株的葉片DNA，如果5個(gè)相應(yīng)的特異性功能標(biāo)記都能同時(shí)擴(kuò)增出條帶的，則該單株同時(shí)攜帶5個(gè)稻瘟病抗性基因。
[0030]本發(fā)明涉及的PCR擴(kuò)增及擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)為常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法，因此在這里不再贅述。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料與攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的中早39雜交，獲得雜種匕代； (2)種植步驟(I)獲得的雜種F1R，并將雜種F1R與步驟(I)描述的不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料回交，獲得BC1 F1代種子； (3)種植步驟⑵獲得的BC1F1代種子，并利用檢測(cè)Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BC1F1代單株與步驟(I)描述的不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料回交，獲得BC2F1代種子； (4)種植步驟(3)獲得的此#1代種子，并利用檢測(cè)？1-(12^(13^5、？讓^9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2Pid3、Pi5、Pib、Ρ?9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BC2F1代單株與步驟(I)描述的不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料回交，獲得BC3F1代種子； (5)種植步驟(4)獲得的此芯代種子，并利用檢測(cè)？丨-(12^(13^5、？讓^9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BC3F1代單株與步驟(I)描述的不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料回交，獲得BC4F1代種子； (6)種植步驟(5)獲得的此/1代種子，并利用檢測(cè)？丨-(12^(13^5、？讓^9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BC4F1代單株，與步驟(I)描述的不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料進(jìn)行連續(xù)回交，每一回交世代均選擇同時(shí)攜帶P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株與輪回親本進(jìn)行回交，直到得到滿意的回交后代BCmF1On多5)為止； (7)種植步驟(6)得到的BCmF1On彡5)代單株，利用檢測(cè)Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BCmF1 (m ^ 5)代單株自交，自交代數(shù)根據(jù)育種需要確定，獲得農(nóng)藝性狀穩(wěn)定的BCmFnOn彡5，η彡2)代材料； (8)種植步驟(7)獲得的農(nóng)藝性狀穩(wěn)定的BCmFnOn彡5，η彡2)代材料，利用檢測(cè)Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的BCmFnOn彡5，η彡2)代單株，得到稻瘟病抗性改良且農(nóng)藝性狀與步驟(I)描述的不攜帶？1_(12^(13^5、？讓^9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料相似的改良材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法，其特征在于，所述步驟(I)中，不攜帶P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料可以是秈稻，也可以是粳稻，可以是恢復(fù)系，也可以是保持系等不同的育種材料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法，其特征在于，所述步驟(2)、步驟(3)、步驟(4)、步驟(5)、步驟(6)利用不攜帶P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料作為輪回親本進(jìn)行連續(xù)回交的目的是，使最終獲得的水稻材料的農(nóng)藝性狀與不攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良水稻材料相似。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法，其特征在于，所述步驟⑶、步驟(4)、步驟(5)、步驟(6)、步驟(7)、步驟(8)中，利用檢測(cè)P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Ρ?9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株進(jìn)行回交或自交的目的是，保證Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因在改良后代中始終存在。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法，其特征在于，所述步驟(3)、步驟(4)、步驟(5)、步驟(6)、步驟(7)、步驟(8)中，檢測(cè)P1-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的特異性功能標(biāo)記根據(jù)Pi_d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的已公開(kāi)DNA序列進(jìn)行自行開(kāi)發(fā)。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用中早39改良水稻稻瘟病抗性的方法：將攜帶Pi-d2、Pid3、Pi5、Pib、Pi9等5個(gè)稻瘟病抗性基因的水稻品種中早39與不攜帶上述5個(gè)稻瘟病抗性基因的稻瘟病抗性待改良的水稻材料雜交，并以稻瘟病抗性待改良的水稻材料作為輪回親本進(jìn)行多次回交，在每個(gè)回交世代利用特異性的功能標(biāo)記選擇同時(shí)攜帶上述5個(gè)稻瘟病抗性基因的單株與輪回親本進(jìn)行回交，通過(guò)多次回交和自交之后，獲得同時(shí)聚合中早39的5個(gè)稻瘟病抗性基因且農(nóng)藝性狀與稻瘟病抗性待改良的水稻材料相似的水稻改良后代材料。本發(fā)明通過(guò)聚合中早39的5個(gè)稻瘟病抗性基因以達(dá)到改良稻瘟病抗性的目的。
【IPC分類】A01H1-02
【公開(kāi)號(hào)】CN104770287
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510175308
【發(fā)明人】楊長(zhǎng)登, 曾宇翔, 季芝娟, 梁燕, 夏令治
【申請(qǐng)人】中國(guó)水稻研究所
【公開(kāi)日】2015年7月15日
【申請(qǐng)日】2015年4月10日