一種噬菌蛭弧菌生物消毒劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物制劑領域，具體涉及一種噬菌蛭弧菌生物消毒劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]■菌輕弧菌(Bdellovibr1 bacter1vorus)是一種具有寄生特性的弧形或桿形細菌，菌體大小為0.2?0.5微米X0.8?1.2微米，是養(yǎng)殖水體環(huán)境致病菌滋生的天然生物控制因子，能夠有效地控制養(yǎng)殖水體的化學耗氧量以及硫化物和氨氮的含量，對開拓水產動物病害生物防治新途徑具有重要的意義。噬菌蛭弧菌作為一種具有寄生特性的細菌，是養(yǎng)殖水體中病原菌滋生的天然生物控制因子。
[0003]目前我國市售的噬菌蛭弧菌制劑的劑型較少，主要以水劑和凍干粉劑為主，但水劑運輸不方便，殺菌效果不穩(wěn)定；凍干粉劑生產成本高，殺菌效果也不佳。因此，針對目前噬菌蛭弧菌制劑菌含量低、應用效果不穩(wěn)定、生產成本高的缺陷，開發(fā)新型優(yōu)質的噬菌蛭弧菌制劑無疑是提高其在水產養(yǎng)殖應用價值的迫切需要，針對現(xiàn)有技術中噬菌蛭弧菌存在的這種情況，本發(fā)明提出了一種噬菌蛭弧菌生物消毒劑及其制備方法。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種噬菌蛭弧菌生物消毒劑及其制備方法，解決了目前噬菌蛭弧菌制劑菌含量低、應用效果不穩(wěn)定、生產成本高的問題，提高了噬菌蛭弧菌對水產動物病害防治與水質改良效果。
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明提供的一種噬菌蛭弧菌生物消毒劑及其制備方法，具體實現(xiàn)步驟為:
[0006]第一步，噬菌蛭弧菌F16培養(yǎng)液的制備:
[0007]將終濃度為2.0 X 14個/ml的噬菌蛭弧菌F16接種于100ml pH8.0的5倍稀釋的普通營養(yǎng)肉湯中，同時加入50 μ I終濃度為1.0X 1ltl個/ml的鮑曼氏不動桿菌AQ-1，于36°C,250轉/min條件下?lián)u床振蕩培養(yǎng)直至噬菌蛭弧菌F16的活菌含量達到19個/ml ；
[0008]第二步，噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑的制備:
[0009]在10ml活菌含量為19個/ml的噬菌蛭弧菌F16培養(yǎng)液中加入8g埃洛石粉、Ig核桃皮粉，在漩渦振蕩儀上充分振蕩30min直至均勻，打開鼓風機，緊接著打開噴霧干燥儀、蠕動泵和通針泵，設置參數(shù)為:風量顯示110%，進風溫度170°C，出風溫度50 °C，進料量400ml/h，通針頻率3s，噴霧干燥期間保持空氣流量為800m3/h，氣體通過鼓風機后被過濾并加熱到設置溫度100°C，蠕動泵將活菌含量為16個/ml的噬菌蛭弧菌F16培養(yǎng)液與埃洛石粉、玉米粉混合物傳送到噴霧器，噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑則通過旋風分離器收集，用水分測定儀測定噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑的水分含量，將噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑用無菌蒸餾水10倍梯度稀釋后用自來水雙層瓊脂平板檢測噬菌蛭弧菌F16的活菌含量。
[0010]另外，在噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑制備完成之后，對其對水產養(yǎng)殖常見病原菌的殺菌效果進行測試，具體為:將Ig噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑與Iml終濃度為1.0X 101°個/ml的水產養(yǎng)殖病原菌同時加入100無菌蒸飽水中于36°C、250轉/min條件下?lián)u床振蕩培養(yǎng)96h，用稀釋涂布無菌營養(yǎng)瓊脂平板計數(shù)水產養(yǎng)殖病原菌的濃度，以同樣劑量的粉狀噬菌蛭弧菌制劑的殺菌率作為對照。
[0011]水產養(yǎng)殖病原菌包括霍亂弧菌GYL、霍亂弧菌LD081008B-1、溶藻弧菌BYK0834、溶藻弧菌BYK00019、哈維氏弧菌ZL0022、哈維氏弧菌BYK00034、創(chuàng)傷弧菌BYK000965、副溶血弧菌ZL0025、副溶血弧菌ZL0040、鰻弧菌BYK0638。
[0012]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下有益效果:
[0013]噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑水分含量為1%，噬菌蛭弧菌活菌含量為1.8X 1ltl個/g，對水產養(yǎng)殖常見病原菌的殺菌率均達到了 99%，顯著優(yōu)于粉狀噬菌蛭弧菌制劑的殺菌效果，可以作為一種替代抗生素的水產用生物消毒劑。
【附圖說明】
[0014]圖1為噬菌蛭弧菌F16生物消毒劑對水產養(yǎng)殖常見病原菌的殺菌效果表。
【具體實施方式】
[0015]下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步的描述。
[0016]本發(fā)明以一株噬菌蛭弧菌BDF-H16為研宄對象，制備了噬菌蛭弧菌生物消毒劑，并通過其對水產養(yǎng)殖病原菌殺菌效果的考察，證實了其作為一種生物消毒劑在水產養(yǎng)殖應用的可行性與有效性。
[0017]本發(fā)明技術方案包括以下實驗材料。
[0018]終濃度為2.0X 14個/ml的噬菌蛭弧菌F16和終濃度為1.0X 10 1CI個/ml的鮑曼氏不動桿菌AQ-1，以及終濃度為1.0X 101°個/ml的霍亂弧菌GYL、霍亂弧菌LD081008B-1、溶藻弧菌BYK0834、溶藻弧菌BYK00019、哈維氏弧菌ZL0022、哈維氏弧菌BYK00034、創(chuàng)傷弧菌BYK000965、副溶血弧菌ZL0025、副溶血弧菌ZL0040、鰻弧菌BYK0638。
[0019]埃洛石粉、核桃皮粉、普通營養(yǎng)肉湯、無菌營養(yǎng)瓊脂平板、瓊脂粉和無菌生理鹽水、粉狀噬菌蛭弧菌制劑；pH8.0的5倍稀釋的普通營養(yǎng)肉湯、pH8.0的普通營養(yǎng)肉湯、自來水雙層瓊脂平板，底層瓊脂濃度1.0%，上層軟瓊脂濃度0.5 %，均在I X 15Pa高壓濕熱滅菌20min后備用；溫控搖床、生化培養(yǎng)箱和水分測定儀、全自動滅菌鍋和高速離心機、漩渦振蕩儀和小型噴霧干燥儀SY-6000。
[0020]其中，粉狀噬菌蛭弧菌制劑采用現(xiàn)有技術，具體為以沸石粉作為賦形載體，所述的粉狀制劑成品水分含量為0.5%?3%。所述的粉狀制劑成品水分含量為1%。
[0021]應當理解，下面實施例中未說明的常規(guī)條件和方法，通常按照所屬領域實驗人員常規(guī)采用方法:如薩姆布魯克和拉塞爾主編的《分子克隆實驗指南》第三版，或按照制造廠商所建議的步驟和條件。
[0022]一、噬菌蛭弧菌F16培養(yǎng)液的制備。
[0023]將終濃度為2.0 X 14個/ml的噬菌蛭弧菌F16接種于100ml pH8.0的5倍稀釋的普通營養(yǎng)肉湯中，同時加入50 μ I終濃度為1.0X 1ltl個/ml的鮑曼氏不動桿菌AQ-1，于36°C,250轉/min條件下?lián)u床振蕩培養(yǎng)直至噬菌蛭弧菌