選取星油藤當(dāng)年生帶節(jié)藤莖為外植體，經(jīng)75%酒精消毒15秒種后，用無菌水沖洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒15分鐘，然后用無菌水沖洗6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后剪切成2?4cm左右的帶節(jié)藤莖，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于26°C條件下全暗培養(yǎng)14天即可誘導(dǎo)形成不定芽，污染率低至7%以下，不定芽誘導(dǎo)率可達(dá)95.4%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.4mg/LTDZ+l.6mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+20g/L 蔗糖+4.0g/L 瓊脂，pH為 5.8o
[0015](2)繼代培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽從基部切下，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后置于每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001χ，培養(yǎng)溫度為26°C的條件下培養(yǎng)，25天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為8.51。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L 蔗糖 +5.5g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0016](3)生根培養(yǎng):將步驟(2)繼代培養(yǎng)長(zhǎng)至2?4cm的不定芽分切并接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在26°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為30001x，培養(yǎng)溫度為26°C的條件下培養(yǎng)14天即開始生根，生根率可達(dá)97%。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.4mg/LIBA+l.2mg/L GGR (注:雙吉爾-GGR，購(gòu)自北京艾比蒂研宄開發(fā)中心)+18g/L鹿糖+4.0g/L瓊脂，pH為5.8。
[0017](4)煉苗移栽:將長(zhǎng)至6?8cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗4天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:農(nóng)家肥:河沙(8:1:1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，移栽成活率為100%。
[0018]實(shí)施例3
(I)誘導(dǎo)不定芽:選取星油藤當(dāng)年生帶節(jié)藤莖為外植體，經(jīng)75%酒精消毒20秒種后，用無菌水沖洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒30分鐘，然后用無菌水沖洗6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后剪切成2?4cm左右的帶節(jié)藤莖，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于28°C條件下全暗培養(yǎng)20天即可誘導(dǎo)形成不定芽，污染率低至2%以下，不定芽誘導(dǎo)率可達(dá)87.9%。所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.3mg/LTDZ+l.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+25g/L 蔗糖+4.5g/L 瓊脂，pH為 5.8o
[0019](2)繼代培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽從基部切下，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后置于每天光照15小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)，20天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為7.23。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.2mg/L 6-BA+0.4mg/LNAA+30g/L 蔗糖 +3.8g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0020](3)生根培養(yǎng):將步驟(2)繼代培養(yǎng)長(zhǎng)至2?4cm的不定芽分切并接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在28°C條件下全暗培養(yǎng)3天，然后置于每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，培養(yǎng)溫度為28°C的條件下培養(yǎng)10天即開始生根，生根率可達(dá)100%。所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.3mg/LIBA+l.8mg/L GGR (注:雙吉爾-GGR，購(gòu)自北京艾比蒂研宄開發(fā)中心)+20g/L鹿糖+4.5g/L瓊脂，pH為5.8。
[0021](4)煉苗移栽:將長(zhǎng)至6?8cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗4天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:農(nóng)家肥:河沙(8:1:1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中，移栽成活率為98%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下工藝步驟: (1)誘導(dǎo)不定芽:選取星油藤當(dāng)年生帶節(jié)藤莖為外植體，經(jīng)75%酒精消毒5?20秒種后，用無菌水沖洗2?5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10?30分鐘，然后用無菌水沖洗3?6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后剪切成2?4cm左右的帶節(jié)藤莖，并接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于25?28°C條件下全暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽； (2)繼代培養(yǎng):將步驟(I)獲得的不定芽從基部切下，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后置于每天光照12?15小時(shí)，光照強(qiáng)度為1500?20001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，20?30天轉(zhuǎn)接一次； (3)生根培養(yǎng):將步驟(2)繼代培養(yǎng)長(zhǎng)至2?4cm的不定芽分切并接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)3?5天，然后置于每天光照12?15小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根； (4)煉苗移栽:將長(zhǎng)至6?8cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并置于自然光照下煉苗5?7天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:農(nóng)家肥:河沙(8:1:1)混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(I)所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:MS+0.1 ?0.5mg/LTDZ+l.0 ?2.0mg/L 6-BA+0.1 ?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.0 ?2.0mg/L 6-BA+0.1 ?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.1?0.5mg/LIBA+l.0?2.0mg/L GGR (注:雙吉爾-GGR，購(gòu)自北京艾比蒂研宄開發(fā)中心)+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L瓊脂，pH為5.4?5.8。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種星油藤的組織培養(yǎng)快繁方法，星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一種多年生木質(zhì)藤本油料植物，原產(chǎn)于南美洲安第斯山脈地區(qū)熱帶雨林。從星油藤種子中榨取的植物油被認(rèn)為是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制藥、化妝品等方面。目前，星油藤種苗主要通過種子和扦插方式繁育，存在周期長(zhǎng)、成本高、效率低下等問題。因此，本發(fā)明以星油藤帶節(jié)莖段為外植體，通過不定芽誘導(dǎo)、增殖、生根、煉苗移栽等過程成功獲得了星油藤離體再植株，建立星油藤組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)體系，對(duì)于進(jìn)行星油藤優(yōu)良品種的快速繁殖和大面積推廣、促進(jìn)星油藤的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有重要意義。
【IPC分類】A01H4-00, A01G31-00
【公開號(hào)】CN104798684
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510199663
【發(fā)明人】梁鈞淞, 莫昭展
【申請(qǐng)人】玉林師范學(xué)院
【公開日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2015年4月25日