稻上飼養(yǎng)一代后，再接入蟲籠不同水稻材料水稻上飼養(yǎng)，得到不同水稻材料的褐飛虱種群。
[0027]供試水稻品種:抗除草劑轉(zhuǎn)基因水稻“Bar68-1”為中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研宄所、湖南雜交水稻研宄中心和香港中文大學(xué)共同培育的早秈稻，系用基因槍法將Bar基因轉(zhuǎn)入秈稻品種“D68”而得的抗草銨膦轉(zhuǎn)基因水稻(Xiao G.Y.a7.，2007)，非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照品種為“D68”，均由中國科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研宄所提供。感蟲對(duì)照品種“TN1 ”由廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研宄所提供。
[0028]具體步驟為:
步驟S1:分別收集轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻的稻株傷流液；
取60日齡的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻TNl的稻苗，除去外葉鞘后斜置，24 h后用經(jīng)酒精消毒的剪刀在離土 10 cm處剪去主莖上半部分，如圖1所示，將水稻莖桿I切成傾斜狀2，稻株傷流液容器3與莖桿接觸的部分也做成傾斜口 4，將稻株傷流液容器3的傾斜口 4與傾斜狀2的下部連接。采用此技術(shù)方案，利用稻株傷流液引流到傾斜狀下部后再進(jìn)行收集，這樣可以克服常規(guī)方法收集時(shí)稻株傷流液容易漏出的問題。
[0029]步驟S2:在棉球分別放入到60日齡的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68_l、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻TNl稻株傷流液中浸泡，另外再放入棉球在蒸餾水中浸泡作為對(duì)照，以不滴水為標(biāo)準(zhǔn)；如圖2所示，然后將吸收了轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1稻株傷流液、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻D68稻株傷流液、非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻TNl稻株傷流液和蒸餾水的棉球、分別裝入四個(gè)喂食容器管21中，所述喂食容器管21的側(cè)壁設(shè)有通孔22 ;將這四個(gè)喂食容器管21分別放入到四個(gè)試驗(yàn)箱23中。
[0030]步驟S3:如圖2所示，將10頭/箱24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到四個(gè)試驗(yàn)箱中，并蓋上試驗(yàn)箱蓋24，所述驗(yàn)箱蓋24上也設(shè)有通孔25 ;每6 h檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡；期間需保證棉球濕潤需及時(shí)用膠頭滴管補(bǔ)充各比較樣本的稻株傷流液。上述試驗(yàn)每個(gè)處理(不同水稻材料傷流液或蒸餾水對(duì)照)重復(fù)3次，即每個(gè)水稻材料試驗(yàn)用黑肩綠盲蝽雌、雄成蟲各30頭，共60頭成蟲，4個(gè)處理共用黑肩綠盲蝽成蟲240頭O
[0031]步驟S4:以5頭/根的數(shù)量將懷卵褐飛虱雌蟲分別在轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲品種TNl稻莖上產(chǎn)卵24h，得到帶有褐飛虱卵的上述三種水稻稻莖； 將這三種帶有褐飛虱卵的水稻稻莖以I根/箱的數(shù)量分別放入步驟S2所述的裝有對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻的稻株傷流液棉球喂食容器的三個(gè)試驗(yàn)箱23中，然后以I頭/箱的數(shù)量將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲分別裝入到三個(gè)試驗(yàn)箱23中，讓其在箱內(nèi)捕食不同水稻材料上的褐飛虱卵。24 h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量。
[0032]另外準(zhǔn)備兩個(gè)裝有蒸餾水棉球喂食容器的試驗(yàn)箱23，連同步驟S3的裝有蒸餾水棉球喂食容器的試驗(yàn)箱23，一共為三個(gè)裝有蒸餾水棉球喂食容器的試驗(yàn)箱23，將上述三種帶有褐飛虱卵的水稻稻莖按照水稻品種分別以I根/箱的數(shù)量放入三個(gè)裝有蒸餾水棉球喂食容器的試驗(yàn)箱23中，然后以I頭/箱的數(shù)量將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲分別裝入這三個(gè)試驗(yàn)箱23中，讓其在箱內(nèi)捕食褐飛虱卵；24 h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量。
[0033]上述試驗(yàn)一共六個(gè)處理，即:
處理A:產(chǎn)有Bar68-1褐飛虱種群卵塊的Bar68_l稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有Bar68_l傷流液(傷流液用來喂食黑肩綠盲蝽成蟲用)的棉球；
處理B:產(chǎn)有D68褐飛虱種群卵塊的D68稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有D68傷流液的棉球； 處理C:產(chǎn)有TNl褐飛虱種群卵塊的TNl稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有TNl傷流液的棉球； 處理D:產(chǎn)有Bar68-1褐飛虱種群卵塊的Bar68_l稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有蒸餾水的棉球；
處理E:產(chǎn)有D68褐飛虱種群卵塊的D68稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有蒸餾水的棉球；
處理F:產(chǎn)有TNl褐飛虱種群卵塊的TNl稻桿，喂食容器內(nèi)為浸有蒸餾水的棉球。
[0034]上述每個(gè)處理重復(fù)10次，即每個(gè)處理試驗(yàn)用黑肩綠盲蝽雌成蟲10頭、褐飛虱雌成蟲50頭，6個(gè)處理共用黑肩綠盲蝽雌成蟲60頭、褐飛虱雌成蟲300頭。
[0035]步驟S5:比較轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68_l傷流液、非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻TNl傷流液、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻D68傷流液和蒸餾水空白對(duì)照處理間，黑肩綠盲蝽的雌、雄成蟲壽命以及褐飛虱卵捕食量的差異顯著性，分析轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性和捕食能力的影響。
[0036]本例的結(jié)果顯示，如圖3和圖4所示，黑肩綠盲蝽在取食轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1傷流液后，雌、雄成蟲壽命與非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照TNl的傷流液相比，差異不顯著。
[0037]如圖5所示，通過上述六個(gè)處理之間的對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，無論是否有稻株傷流液的存在，黑肩綠盲蝽的捕食能力在三種水稻材料之間不存在顯著差異，即轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻Bar68-1對(duì)黑肩綠盲蝽成蟲捕食褐飛虱卵的影響，與非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照D68和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照TNl對(duì)黑肩綠盲蝽成蟲捕食褐飛虱卵的影響一致。
[0038]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽環(huán)境安全性的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟S1:確定比較樣本的水稻品種得到各比較樣本，分別收集所述各比較樣本水稻的稻株傷流液； 步驟S2:用載體分別吸收所述各比較樣本水稻的稻株傷流液，然后將吸收了稻株傷流液的載體分別裝入喂食容器中得到各比較樣本的喂食容器，所述喂食容器的側(cè)壁設(shè)有通孔；準(zhǔn)備與樣本數(shù)量相同的試驗(yàn)箱，將所述各比較樣本的喂食容器分別放入各試驗(yàn)箱中； 步驟S3:將24 h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲分別裝入到所述步驟S2裝有對(duì)應(yīng)的比較樣本喂食容器的各試驗(yàn)箱中，每6 h檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡； 步驟S4:準(zhǔn)備帶有褐飛虱卵的所述各比較樣本水稻稻莖；將帶有褐飛虱卵的各比較樣本水稻稻莖放入到所述步驟S2裝有對(duì)應(yīng)的比較樣本喂食容器的各試驗(yàn)箱中，將24h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽雌成蟲也裝入到所述各試驗(yàn)箱中，24h后，解剖稻株，得到褐飛虱卵被黑肩綠盲蝽捕食的數(shù)量； 步驟S5:分析所述各比較樣本間黑肩綠盲蝽的成蟲壽命以及黑肩綠盲蝽捕食褐飛虱卵量的差異顯著性，分析轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽生物學(xué)特性和捕食能力的影響。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述各比較樣本的水稻品種為三個(gè)，分別為轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻、非轉(zhuǎn)基因親本對(duì)照水稻和非轉(zhuǎn)基因感蟲對(duì)照水稻。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:還包括以蒸餾水代替稻株傷流液喂食作為對(duì)照，重復(fù)所述步驟S2到步驟S5的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:步驟SI中，所述稻株傷流液采用稻株傷流液收集容器進(jìn)行收集，所述稻株傷流液收集容器的上部設(shè)有傾斜部；具體操作包括先將水稻莖桿切成傾斜狀，將所述稻株傷流液收集容器的傾斜部與所述水稻莖桿切成的傾斜狀連接，收集稻株傷流液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:步驟S2中，所述喂食容器為圓柱形中空管。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述步驟S4中，準(zhǔn)備帶有褐飛虱卵的各比較樣本水稻稻莖的方法為，將懷卵褐飛虱雌蟲分別在各比較樣本的稻莖上產(chǎn)卵24h，得到帶有褐飛虱卵的各比較樣本的水稻稻莖。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述步驟S3中，將24h內(nèi)羽化的黑肩綠盲蝽成蟲裝入到試驗(yàn)箱后，定時(shí)用膠頭滴管給載體補(bǔ)充所述各比較樣本的稻株傷流液，保證載體濕潤。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述黑肩綠盲蝽為室內(nèi)用TNl水稻品種上飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)種群。
9.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述褐飛虱為在TNl水稻上飼養(yǎng)一代后，再接入蟲籠中的不同水稻材料上飼養(yǎng)得到的種群。
10.根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的評(píng)價(jià)方法，其特征在于:所述載體為棉球、棉花或棉布中至少一種。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)基因抗除草劑水稻對(duì)黑肩綠盲蝽環(huán)境安全性的評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟：收集比較樣本的稻株傷流液；用載體分別吸收比較樣本的稻株傷流液，然后將載體裝入喂食容器中；將喂食容器放入試驗(yàn)箱中，將黑肩綠盲蝽成蟲裝入到試驗(yàn)箱中，定時(shí)檢查黑肩綠盲蝽成蟲的存活數(shù)，直到成蟲死亡；將帶有褐飛虱卵的稻莖放入喂食容器中，并將黑肩綠盲蝽雌成蟲裝入到試驗(yàn)箱中，24h后，解剖稻株；分析比較樣本間黑肩綠盲蝽的成蟲壽命以及捕食褐飛虱卵量的差異顯著性。該方法在室內(nèi)測定，易于控制，準(zhǔn)確性高，周期性短，可以準(zhǔn)確快速地研究轉(zhuǎn)基因稻株傷流液對(duì)黑肩綠盲蝽的影響，可以為轉(zhuǎn)基因水稻對(duì)天敵昆蟲的安全性評(píng)價(jià)提供新的方法。
【IPC分類】A01G7-00, A01K67-033
【公開號(hào)】CN104813855
【申請?zhí)枴緾N201510214500
【發(fā)明人】蔣顯斌, 龍麗萍, 黃芊, 凌炎, 陳玉沖
【申請人】廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院水稻研究所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年4月29日