一種防治黃瓜白粉病的微生物源殺菌劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種防治黃瓜白粉病的微生物源殺菌劑，屬于植物保護(hù)的領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃瓜白粉病是我國(guó)黃瓜生產(chǎn)面臨的三大病害之一，同時(shí)也是世界范圍內(nèi)一種主要 的黃瓜葉部病害，該病害從幼苗期到成株期都能侵染黃瓜植株，具有流行性強(qiáng)、發(fā)病率高、 潛育期短和再侵染頻繁的特點(diǎn)，可以導(dǎo)致黃瓜減產(chǎn)并影響果實(shí)品質(zhì)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，該病害導(dǎo)致的 黃瓜減產(chǎn)量一般年份約在10%，而流行年份更是高達(dá)30%左右，已嚴(yán)重影響了黃瓜的農(nóng)業(yè)生 產(chǎn)。
[0003] 應(yīng)用硫制劑、苯并咪唑類、有機(jī)磷類、苯氧基喹啉累、留醇合成抑制劑、甲氧基丙 烯酸酯類、以及琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑防治黃瓜白粉病，化學(xué)防治見效快、高效且穩(wěn) 定，但是對(duì)環(huán)境污染較大，對(duì)人類、家畜有毒害。
[0004] 提取蛇床子素、大黃等生物藥劑防治黃瓜白粉病，雖然生物制劑對(duì)環(huán)境友好，但是 見效較慢，生物活性易受環(huán)境影響而不穩(wěn)定，對(duì)環(huán)境要求較嚴(yán)格，且成本較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種防治黃瓜白粉病的微生物源殺菌劑，其將發(fā)酵后的抗 生素溶桿菌的代謝產(chǎn)物，通過與保護(hù)劑和分散劑的有機(jī)組合配制生防制劑；該生防制劑將 具有滲透迅速、藥效快、普抗性廣的特點(diǎn)，所有原料符合有機(jī)栽培標(biāo)準(zhǔn)。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種防治黃瓜白粉病的微生物源殺菌劑，其特 征在于按重量份數(shù)由以下原料組成：1-30重量％的針葉樹精油、20-50重量％的脂肪酸、 1-30重量％的乳化劑、0. 1-10重量％的多價(jià)酒精、10-50重量％的水、0. 1-1重量％的微生 物代謝產(chǎn)物混合組成的白粉病防治制劑。
[0007] 所述的針葉樹精油為含有 Tricyclene, a-Pinene, β-Pinene, Camphene, Sabinenej Myrcenej β -Phellandrenej a -Terpinenaj Limonenej α -Thujenej ν-Terpinenej P -Cymenej Terpinolenej α -Cubebenej α -Copaenej Camphorej Linaloolj Linalyl acetate, Bornvl zcetate, Thymol methyl ether, β -Elemenej β -Caryophllenej Terpinenej Widdrenej Humulenej β -Selinenej ν-Muurolenej α -Terpineolj Borneolj α -Terpinyl acetate, ν-Elemene Bicyclosesquij Phellandrenej α -Muurolenej α -Cadinenej σ -Cadinenej ν -Cadinenej P - Cymene-3-ol， Caryophyllenej Oxide, Farnesolj Elemolj α -Selinecej Cedrolj Spathulenej β-Selinenej T-Muuroloj Stach-15-ene， α -Eudesmol Globulolj α -Podocarprene當(dāng)中的20種以上成分為特征；脂肪酸可選用Linoleic acid，Oleic acid, Palmitic acid, Linolenic acid, Ricinoleic acid，Stearicacid)中的任何一 種。
[0008] 所述乳化劑可選用脂肪醇聚乙二醇醚，烷基酚，脂肪酸，甘油脂肪酸酯，脂肪酸烷 醇酰胺，APG，糖酯，胺氧化物中的一種。
[0009] 所述的微生物代謝產(chǎn)物的制得：稱取采集土壤lg，在含有IOOmL生理鹽水的三角 瓶中30°C恒溫條件下震蕩30分鐘，制成樣品懸浮液，采用梯度稀釋法進(jìn)行稀釋后均勻涂布 于幾丁質(zhì)細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3天；挑取周邊有明顯菌落透明圈的單菌落，進(jìn)行劃線純 化菌株。微生物在液態(tài)幾丁質(zhì)培養(yǎng)基發(fā)酵96小時(shí)后發(fā)酵液經(jīng)4000 r/min離心15min,收 集上清液，于上清液中緩慢加入（NH4)2SO 4，使溶液中（NH4)2SO4飽和度達(dá)到20%，4 °C靜 置過夜后10000 r/min冷凍離心，去除雜蛋白。在清液中繼續(xù)加入（NH4)2SO4，使其飽和 度達(dá)到75%，4 °C靜置過夜后10000 r/min冷凍離心，將沉淀溶于蒸餾水，置于透析袋 中，對(duì)0· 02 mol/L pH8. 0的磷酸緩沖液透析24 h〇
[0010] 所述的微生物發(fā)酵液中土壤是用分離篩選分解幾丁質(zhì)微生物獲取的，土壤是采 自浙江省舟山市周邊富含蟹殼廢棄物的海岸線土壤。所述的幾丁質(zhì)培養(yǎng)基由以下原料配 方（g/L)組成：膠體幾丁質(zhì) 5;Na2HP04 2; KH2P04 1%; NaCl 0.5; NH4C1 I; MgS04 7H20 0· 5; CaC12 2H20 0· 5; KN03 0· 5;酵母浸粉 0· I ;瓊脂 20 ; 該制劑的制作工藝如下： 1.針葉樹精油和植物油（脂肪酸）的混合的制備：將100份重量的針葉樹精油和 200-250份重量的植物油（脂肪酸)混合后在常溫條件下以100~500rpm的轉(zhuǎn)速攪拌5-15分 鐘； 2. 上述經(jīng)第1步制得的混合物100份重量中添加50-60份乳化劑及1-10份重量的多 價(jià)酒精后以1，〇〇〇~5, OOOrpm的轉(zhuǎn)速攪拌10-30分鐘； 3. 上述經(jīng)第2步制得的混合物100份重量中添加0. 1-1重量％的微生物代謝產(chǎn)物和 100-200份重量的水后以1，000~5, OOOrpm的轉(zhuǎn)速攪拌10-30分鐘； 4. 高壓均化：將上述經(jīng)第3步制得的混合物在高壓均化器中以500~1，OOObar均化3 次即可得到制劑。
[0011] 本發(fā)明的積極效果是通過顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，可通過破壞孢子細(xì)胞壁來抑制白粉 病病原菌的繁殖，植物試驗(yàn)結(jié)果顯示，微生物制劑處理白粉病發(fā)病率僅為8. 77%，防效高達(dá) 89. 32%，遠(yuǎn)高于對(duì)照。微生物制劑處理增產(chǎn)了 15. 7%，總氨基酸含量等品質(zhì)指標(biāo)和根系活力 明顯高于對(duì)照組。研宄表明該制劑可以有效抑制黃瓜防治白粉病的發(fā)生，同時(shí)有促進(jìn)植物 生長(zhǎng)的良好作用，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說明】
[0012] 圖1是清水處理的孢子Al圖片。
[0013] 圖2為制劑處理的孢子Bl圖片。
[0014] 圖3為清水處理的葉表面A2的圖片。
[0015] 圖4為制劑處理的葉表面B2的圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述： 實(shí)施例1、對(duì)白粉病病原菌的抑制效果觀察 在白粉病發(fā)后用毛筆將分生孢子刷于盛于制劑濃度為〇, 500, 1000, 2000 ml/L的燒杯 中靜置2小時(shí)后利用顯微鏡觀察孢子表面。發(fā)病葉片于乙醇一乙酸（V:V=3:1)混合液中固 定脫色至透明后，甲基藍(lán)/乳酸/甘油/蒸餾水（W:V:V:V=I: 1:1:1)混合液染色24h。光學(xué) 顯微鏡下觀察病原菌在葉面的飽子萌發(fā)、附著胞形成、菌絲伸長(zhǎng)、吸器發(fā)育以及分生孢子形 成情況。
[0017] 1-1盆栽實(shí)驗(yàn) 供試土壤采自公主嶺市范家屯鎮(zhèn)農(nóng)田土，土壤經(jīng)自然風(fēng)干、錘碎、過5 mm篩，該土壤含 有有機(jī)質(zhì)3. 23%，堿解氮115. 5mg/kg，有效磷277. 8mg/kg，速效鉀510mg/kg。制劑處理區(qū) 將幾丁質(zhì)制劑原液稀釋500倍而成，化學(xué)制劑處理處理選用百菌清，對(duì)照為清水處理，重復(fù) 3 次，隨機(jī)區(qū)組排列。按 50kg/667m2復(fù)合肥（N-P 205-K20=15%-15%-15%)做基肥，30kg/667m 2 尿素(含N量46%)分3次作為追肥施用。各處理于黃瓜白粉病接種以前噴施100mL，對(duì)照 取等量清水葉面噴施1次。白