一種龍舌蘭珠芽誘導方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種龍舌蘭珠芽誘導方法。
【背景技術(shù)】
[0002]龍舌蘭(Agave americana L.)又名龍舌掌、番麻，為龍舌蘭科，龍舌蘭屬多年生常綠大型草本植物，植株高大。葉呈蓮座式排列，通常30-40枚，有時50-60枚，大型，肉質(zhì)，倒披針狀線形，長1-2米，中部寬15-20厘米，基部寬10-12厘米，葉緣具有疏刺，頂端有1硬尖刺，刺暗褐色，長1.5-2.5厘米。圓錐花序大型，長達6-12米，多分枝；花黃綠色；花被管長約1.2厘米，花被裂片長2.5-3厘米；雄蕊長約為花被的2倍。蒴果長圓形，長約5厘米。因其葉片堅挺，四季常青，花黃綠色，開花后花序上生成的珠芽極少。原產(chǎn)地一般要幾十年后才開花，巨大的花序高可達7至8米，是世界上最長的花序，白色或淺黃色的鈴狀花多達數(shù)百朵，極具觀賞價值，是南方城市庭園及綠化帶的常見花丼。大部分種類的龍舌蘭類植物一生只開1次花，花后隨種子的成熟植株則逐漸枯死，龍舌蘭一般會經(jīng)過很多年積攢養(yǎng)分，然后突然發(fā)芽瘋長。不過這樣會耗盡它全部的能量，爆發(fā)后的龍舌蘭不久便會枯死。而且一些珍貴品種很難開花，因此在生產(chǎn)中常用分株、扦插、播種的方法進行繁殖。
[0003]采用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖大量優(yōu)質(zhì)種苗，有助于解決資源匱乏，為規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。有關(guān)龍舌蘭珠芽誘導芽的方法未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種龍舌蘭珠芽誘導方法，為規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。
[0005]本發(fā)明的方法是以如下方式實現(xiàn)的:
一種龍舌蘭珠芽誘導方法，包括以下步驟:
1)取材方法:選取當年抽苔、飽滿的龍舌蘭珠芽為材料，采摘后置3-5°C冰箱冷藏保存?zhèn)溆?
2)培養(yǎng)基配制:分別配制珠芽的芽誘導培養(yǎng)基、芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的PH值為5.6-5.8，培養(yǎng)基厚度為1.4?1.6 cm ；
所述珠芽的芽誘導培養(yǎng)基:MS+2.0mg ? L 1 6-BA+0.5mg ? L ^AA+l.0mg ? L ^T+0.0lmg
?I71 TDZ +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su+l.0 g ? L-1Ac，
所述芽增殖培養(yǎng)基:MS+1.0mg ? I71 6-BA+0.02mg ? I^TDZ+0.3mg ? L_1NAA+1.0g ? I71 蛋白胨 +7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5 g ? L-1Ac，
所述生根培養(yǎng)基:1/2MS (大量元素減半)+0.lmg ? L-'NAA+0.5-1.0mg ? L_1IBA+7.0g ? L_1Ag+20g ? L_1Su +1.5 g ? L_1Ac ；
3)材料消毒處理:將珠芽用自來水進行表面沖洗，置飽和漂白粉上清液中浸泡15min，用自來水滴沖0.5-lh后去除珠芽外包皮，用雙蒸水沖洗2-3遍，在超凈工作臺上用質(zhì)量分數(shù)為75%酒精消毒20-40s，用質(zhì)量分數(shù)為0.1%升汞消毒12-15min，無菌水沖3_4遍后，用消毒濾紙吸干表面水分，放在滅過菌的培養(yǎng)皿上。
[0006]4)珠芽的芽誘導培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理后的材料接種在珠芽的芽誘導培養(yǎng)基中進行誘導培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時間ll_12h/d，光照強度為1500-20001x ；
5)芽增殖培養(yǎng):將經(jīng)步驟4)誘導得到的叢生芽，切成長l_2cm的塊狀，接種在芽增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時間ll_12h/d，光照強度為 1500-20001x ；
6)誘導生根培養(yǎng):將經(jīng)增殖培養(yǎng)出來的帶有2-4片葉子、株高2-4cm的幼苗單株轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時間ll-12h/d，光照強度為1500-20001x ；
7)試管苗完成:當試管苗長至4-6cm高，有3-5條形態(tài)正常的根，有2_3片葉子，葉長4-6cm時，完成龍舌蘭的植株再生培養(yǎng)。
[0007]將所述步驟7)完成的試管苗進行移栽:將試管苗放在自然光下煉苗3-5天，再打開瓶蓋煉苗1-2天，用槍狀鑷把試管苗從培養(yǎng)瓶中逐漸取出并洗去附著在根部上的培養(yǎng)基，移入蛭石和腐殖土的質(zhì)量比=1:2的混合基質(zhì)中，用帶氣孔的玻璃罩罩住移栽試管苗，溫度控制在20-28 °C，濕度應保持在65% -75%。
[0008]以上涉及:1、Ag為(Agar培養(yǎng)基凝固劑和支持物瓊脂粉的縮寫)；
2、Su為(Sugar提供植物碳源和維持滲透壓蔗糖的縮寫)；
3、Ac為活性炭。
[0009]所述龍舌蘭為金邊龍舌蘭americanaL.var.marginataalba Trel)。
[0010]本發(fā)明選取飽滿的龍舌蘭珠芽作為誘導材料，在無菌條件下誘導培養(yǎng)20?30天可萌發(fā)出生長健壯新芽；經(jīng)35?50天增殖培養(yǎng)可產(chǎn)生大量增殖芽體，擴繁系數(shù)高，增殖時間短，大大縮短了生長過程，經(jīng)25-35天誘導生根后可成苗、移栽成活率高達93%以上；節(jié)約了大量成本，成苗移植后成活率高，苗健壯挺拔，長勢良好，整齊一致。
[0011]本發(fā)明的顯著優(yōu)點:
一:通過本發(fā)明方法可以最大限度地應用現(xiàn)有資源，通過生物技術(shù)手段在短時間內(nèi)解決稀缺資源的應用需求；
二:總結(jié)出一套可供生產(chǎn)單位應用的龍舌蘭離體培養(yǎng)及植株再生技術(shù)，通過本發(fā)明的廣泛應用可直接提高珍稀品種人工林地產(chǎn)量、質(zhì)量和園林綠化水平，實現(xiàn)資源高效培育，具有十分廣闊的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景。本發(fā)明創(chuàng)新性強，技術(shù)含量高，公益性強，對于促進珍稀品種的研宄、利用，有著良好前景和及其重要意義，為開發(fā)利用該種資源提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【附圖說明】
[0012]圖1為珠芽的芽誘導I。
[0013]圖2為珠芽的芽誘導2。
[0014]圖3為芽增殖培養(yǎng)。
[0015]圖4為誘導生根培養(yǎng)。
[0016]圖5為植株生長。
[0017]圖6為植株移栽。
【具體實施方式】
[0018]實施例1
一種龍舌蘭珠芽誘導芽的方法，步驟如下:
1)取材方法:選取當年抽笞、飽滿的金邊龍舌蘭(命areamericanaL.var.margina taalba Trel)的珠芽為材料；
2)培養(yǎng)基配制:分別配制珠芽的芽誘導培養(yǎng)基、芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的PH值為5.6，培養(yǎng)基厚度為1.4cm ；
所述珠芽的芽誘導培養(yǎng)基:MS+2.0mg.L 1 6-BA+0.5mg.L 1NAA+!.0mg.L ^T+0.0lmg? L-1 TDZ +7.0g.L_1Ag+20g.L^1Su+1.0 g.L^1Ac,
所述芽增殖培養(yǎng)基:MS+1.0mg.Γ1 6-BA+0.02mg.I^TDZ+0.3mg.L^1NAA+1.0g.Γ1 蛋白胨 +7.0g.L_1Ag+20g.L-1Su +1.5 g.L^1Ac,
所述生根培養(yǎng)基:l/2MS+0.1mg.L_1NAA+0.5mg.L-1IBA+ 7.0g.L_1Ag+20g.L-1Su +1.5g * [1Ac ；
3)材料消毒處理:將從植株上切下的珠芽用自來水進行表面沖洗，置飽和漂白粉上清液中浸泡15min，用自來水滴沖0.5h后去除珠芽外包皮，用雙蒸水沖洗2遍，在超凈工作臺上用質(zhì)量分數(shù)為75%酒精消毒20s，用質(zhì)量分數(shù)為0.1%升汞消毒12min，無菌水沖3遍后，用消毒濾紙吸干表面水分，放在滅過菌的培養(yǎng)皿上。
[0019]4)珠芽的芽誘導培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理后的材料接種在珠芽的芽誘導培養(yǎng)基中進行誘導培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為21°C，光照時間llh/d，光照強度為15001x，誘導培養(yǎng)時間40天；
5)芽增殖培養(yǎng):將經(jīng)步驟4)誘導得到的叢生芽，切成長l-2cm的塊狀，接種在芽增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為21°C，光照時間llh/d，光照強度為15001x，增殖培養(yǎng)時間50天；
6)誘導生根培養(yǎng):將經(jīng)增殖培養(yǎng)出來的帶有2片葉子、株高2cm的幼苗單株轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；所述生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為21°C，光照時間llh/d，光照強度為15001x，生根培養(yǎng)時間35天；
7)試管苗完成:當試管苗長至4cm高，有3條形態(tài)正常的根，有2片葉子，葉長4cm時，完成龍舌蘭的植株再生培養(yǎng)。
[0020]8)移栽:將試管苗放在自然光下煉苗3天，再打開瓶蓋煉苗I天，用槍狀鑷把試管苗從培養(yǎng)瓶中逐漸取出并洗去附著在根部上的培養(yǎng)基，移入蛭石和腐殖土的質(zhì)量比=1:2的混合基質(zhì)中，用帶氣孔的玻璃罩罩住移栽試管苗，溫度控制在20°C，濕度應保持在65%，再生植株成活率在93%以上。
[0021]實施例2
一種龍舌蘭珠芽誘導芽的方法，步驟如下:
1)取材方法:選取當年抽笞、飽滿的金邊龍舌蘭(命areamericanaL.var.margina taalba Trel)的珠芽為材料；
2)培養(yǎng)基配制:分別配制珠芽的芽