一種人工培育的冬蟲夏草及其培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，尤其涉及冬蟲夏草的培育，特別地關(guān)系到一種人工培育的冬蟲夏草及其培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲夏草又稱蟲草、冬蟲草等，是麥角菌科蟲草屬真菌(蟲草菌)Cordyc印ssinensis (Berk) Sacc.與鱗翅目蝙蝠蛾科蝙蝠蛾幼蟲在特殊條件下形成的菌蟲結(jié)合體，是傳統(tǒng)的名貴藥材，主要產(chǎn)于在我國的四川、青海、西藏、云南和甘肅等地。冬蟲夏草的營養(yǎng)成分高于人參，可入藥，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值。冬蟲夏草可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，滋補(bǔ)肺腎，對肺癌、肝癌等有明顯的抑制作用。在臨床上對肺虛久咳，氣喘，肺結(jié)核咯血，盜汗，腎虛腰膝酸痛，陽瘺遺精，神經(jīng)衰弱及化療、放療后的紅細(xì)胞下降都有療效。
[0003]經(jīng)過嚴(yán)格檢測和動物試驗(yàn)、臨床實(shí)驗(yàn)，冬蟲夏草具有下列藥理或保健功能:
[0004]一是具有明顯的安神鎮(zhèn)靜作用。注射蟲草抽提液后的動物，活動很快減少，能延長戊巴比妥睡眠時(shí)間，增加閥下量巴比妥入睡率。表明服用蟲草能提高人的安睡效率，延長睡眠時(shí)間，適合失眠多夢者長期服用。
[0005]二是抗炎作用。對小鼠耳片、對大鼠足跖致炎研宄表明，蟲草在治療腎炎、前列腺炎等方面具有獨(dú)特的功效。而且，一些傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中有記載，蟲草對于抑制肝臟纖維化進(jìn)程有“全能”效果。
[0006]三是耐缺氧作用。研宄表明，腹腔注射2.5g/kg以上的冬蟲夏草的抽提物可明顯降低小鼠心肌耗氧量，對異丙腎上腺素引起的心肌耗氧量的增加及耐缺氧能力下降有突出的改善效果。
[0007]上述三種保健功能，不僅是現(xiàn)代科學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)論，也是人們使用后感覺得到的反應(yīng)。因此消費(fèi)者都公認(rèn)蟲草具有護(hù)心養(yǎng)腦、強(qiáng)腎固本、改善血液循環(huán)、抗疲提神、改善亞健康狀況等作用。
[0008]抗腫瘤作用是冬蟲夏草新發(fā)現(xiàn)的功能。體外實(shí)驗(yàn)研宄表明，不加蟲草的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)至第六天，B16細(xì)胞、K526細(xì)胞、HL260細(xì)胞分別增長75、68、58倍，而蟲草組在不影響造血細(xì)胞生長的情況下，培養(yǎng)第六天，腫瘤細(xì)胞保持在原來接種時(shí)的水平，增殖完全停止?？梢?，蟲草確實(shí)具有阻抗腫瘤、抑制病毒作用，對晚期肝癌患者的腫瘤細(xì)胞復(fù)制、擴(kuò)散猶有較好的延緩影響。與其他滋補(bǔ)品的“熱補(bǔ)路線”不同，蟲草具有“溫補(bǔ)”的特性，適合于任何年齡、體質(zhì)層次的人，尚未發(fā)現(xiàn)任何副作用。
[0009]但是，隨著冬蟲夏草的藥用價(jià)值不斷地被人們所發(fā)現(xiàn)，蟲草資源的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用量和優(yōu)質(zhì)蟲草的市場需求量急劇膨脹，濫采濫挖，使得野生蟲草資源日益匱乏。
[0010]因此，很多人在努力以人工方式培養(yǎng)冬蟲夏草，以期能產(chǎn)業(yè)化。但是，野生冬蟲夏草來自青藏高原，垂直分布于3000?5100m高海拔地區(qū)的高山草甸和灌木叢中，生態(tài)環(huán)境比較復(fù)雜，其分布主要受海拔高度、植被、土壤結(jié)構(gòu)、坡向、小氣候、溫度、光照、濕度及其它自然和人為因素的影響，生長條件苛刻。
[0011]對于人工培育來說，養(yǎng)蟲、培菌和育草是人工培養(yǎng)冬蟲夏草的必要條件。如在其他地區(qū)人工培養(yǎng)，除了這三者外，還必須模擬適宜三者生長發(fā)育的環(huán)境條件。這在理論上是可行的，但實(shí)踐中操作難度非常大。目前，僅在實(shí)驗(yàn)室中可以模擬高原特有的生態(tài)環(huán)境，但成本非常高，沒有產(chǎn)業(yè)化價(jià)值。同時(shí)，大規(guī)模飼養(yǎng)蝙蝠蛾幼蟲和培養(yǎng)蟲草屬菌的技術(shù)仍未解決。
[0012]野生冬蟲夏草中真菌要寄生于蝙蝠蛾幼蟲，蝙蝠蛾的一個(gè)生活周期在自然狀況下需4年以上，而各蟲態(tài)的變化，齡期的長短，因受蟲種、溫度、海拔、飼料等因素的決定，所以在時(shí)間上存在一定的差異。人工培育蝙蝠蛾幼蟲的生產(chǎn)周期長，經(jīng)試驗(yàn)，感染成活率非常低，無法進(jìn)行產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。因此人們嘗試采用其他宿主代替蝙蝠蛾幼蟲作為蟲草菌的宿主。
[0013]此外，由于冬蟲夏草人工培育困難，野生資源有限，因此《中國藥典》將冬蟲夏草同屬真菌蛹蟲草Cordyceps militaris (L.) Link作為冬蟲夏草的替代品。蛹蟲草的真菌已經(jīng)可以實(shí)現(xiàn)人工培育，獲得子實(shí)體。即使是這樣，對于蛹蟲草的培育也很難獲得真正“有蟲有草”的產(chǎn)品，市面上出售的所謂蛹蟲草產(chǎn)品多為蛹蟲草的子座，屬于“有草無蟲”產(chǎn)品，而非“有蟲有草”的真正蟲草，并且其有效成分的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于真正的冬蟲夏草。
[0014]目前在人工培育冬蟲夏草和蛹蟲草的子座過程中，由于其“長草”的溫度為25-300C，濕度為70-90%，其高濕度易生蟲害，而為了防蟲，需要噴灑農(nóng)藥，以致農(nóng)藥殘留超標(biāo)。人若經(jīng)常服用，又對其身體又產(chǎn)生了新的危害。由于對蟲草有需求的人群多為免疫力低下的人群，因此農(nóng)藥殘留超標(biāo)對其身體危害更大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種人工培育冬蟲夏草的方法，該方法省去發(fā)草步驟，使得冬蟲夏草有效成分保留在蟲體體內(nèi)，而不造成藥效流失，并且獲得的冬蟲夏草的全程均保持無菌環(huán)境，無需噴灑農(nóng)藥，無農(nóng)藥殘留。
[0016]本發(fā)明的另一目的是提供一種采用上述方法獲得的冬蟲夏草，所獲得的冬蟲夏草經(jīng)檢測有效成分高于野生冬蟲夏草。
[0017]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種人工培育冬蟲夏草的方法，包括以下步驟:
[0018]I)液體培養(yǎng)基配置
[0019]液體培養(yǎng)基按重量計(jì)包括:葡萄糖:磷酸二氫鉀:硫酸鎂:維生素B1:黃豆粉:酵母粉:水=40:1:0.5:0.5:20:20:1000,自然 pH 值；
[0020]按比例稱取葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、維生素B1、黃豆粉、酵母粉和水，混勻，倒入量杯量取體積，然后倒入鍋中煮沸5-10分鐘，煮沸后沉淀20分鐘，把上清液倒入量杯中，加水補(bǔ)足蒸發(fā)量，冷卻至室溫；
[0021]2)液體培養(yǎng)基滅菌
[0022]將液體培養(yǎng)基倒入三角瓶內(nèi)，填裝量為三角瓶容積的60-70%，裝瓶后用棉花或橡膠塞或無菌透氣封口膜將瓶口封好進(jìn)行滅菌，滅菌后靜置冷卻至室溫；
[0023]3)接種
[0024]在無菌條件下將冬蟲夏草菌種接種至滅菌后的液體培養(yǎng)基中，接種量為液體培養(yǎng)基填裝量的2-6% ；
[0025]4)液體菌種培養(yǎng)
[0026]將接種后的三角瓶置于搖床，在18_25°C環(huán)境下，搖床轉(zhuǎn)速為140轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)6-10天，得到液體菌種；
[0027]5)固體培養(yǎng)基選擇
[0028]選取健康的活體宿主蟲體作為固體培養(yǎng)基材料，清水沖洗掉蟲體上的灰塵和雜質(zhì)；
[0029]6)固體培養(yǎng)基制備
[0030]將宿主蟲體放入提前清洗晾干的潔凈廣口玻璃瓶，裝蟲量為玻璃瓶容積的50-70 %，裝瓶后用無菌透氣封口膜或?qū)Ｓ闷可w封口，滅菌；
[0031]7)接菌
[0032]在無菌條件下將步驟4)培養(yǎng)獲得的液體菌種裝入預(yù)先經(jīng)過滅菌的噴霧器或注射器中，用噴霧器或注射器將液體菌種均勻地噴灑在蟲體上，攪拌均勻，封好瓶蓋，隔絕空氣;
[0033]8)黑暗發(fā)菌
[0034]將接完菌種的玻璃瓶放在無光黑暗培育發(fā)菌室培養(yǎng)架上，控制溫度為18_20°C，濕度為50-60%，培育發(fā)菌30天；
[0035]9)光照發(fā)菌
[0036]用日光燈管或節(jié)能燈管給予冷光，光照度為300-400LX，光照時(shí)間30天，控制溫度為25-30°C，濕度為80-85%，當(dāng)蟲體培養(yǎng)基菌絲由白色變?yōu)榘迭S色時(shí)，培育發(fā)菌完畢；
[0037]10)烘干
[0038]將培育好的蟲體從玻璃瓶內(nèi)倒出，放在烘干箱內(nèi)烘干，獲得人工培育的冬蟲夏草成品；
[0039]11)封裝保存
[0040]使用真空封裝機(jī)進(jìn)行封裝，封裝后放到通風(fēng)干燥處保存。
[0041]更進(jìn)一步地，所述滅菌采用高壓蒸汽滅菌或常壓蒸汽滅菌。
[0042]更進(jìn)一步地，所述高壓蒸汽滅菌方法為:使用高壓滅菌鍋，當(dāng)壓力達(dá)到49千帕?xí)r，打開高壓鍋放氣閥排出冷氣，冷氣放盡后，關(guān)閉放氣閥重新升溫，待壓力達(dá)到117千帕?xí)r再保持I小時(shí)。
[0043]更進(jìn)一步地，所述常壓蒸汽滅菌方法為:使用滅菌鍋，常壓條件下當(dāng)溫度達(dá)到100°C時(shí)，滅菌保持8小時(shí)。
[0044]更進(jìn)一步地，所述宿主蟲體為大麥蟲、黃粉蟲、幼蠶，優(yōu)選為大麥蟲。
[0045]更進(jìn)一步地，所述步驟7)中接菌量為蟲體重量的3-10%
[0046]更進(jìn)一步地，所述步驟10)中烘干的溫度為50_60°C。
[0047]本發(fā)明還提供一種人工培育的冬蟲夏草，所述冬蟲夏草采用上述方法培育而成。
[0048]培養(yǎng)中所用三角瓶可根據(jù)生產(chǎn)量選擇不同容量大小，廣口玻璃瓶以便于操作為首要保證，可以為一般廣口瓶或蟲草/植物專用組培瓶，一般廣口瓶可使用無菌透氣封口膜封口，組培瓶可使用其配套專用瓶蓋(耐高溫高壓，適當(dāng)透氣)封口。
[0049]發(fā)菌室培養(yǎng)架層間高度可根據(jù)廣口玻璃瓶的高度調(diào)整，以保證廣口玻璃瓶能均勻接受光照為前提。
[0050]當(dāng)