水晶骨骼標(biāo)本的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)或生物科學(xué)領(lǐng)域，涉及一種動(dòng)物標(biāo)本的制作方法，具體涉及一種水晶骨骼標(biāo)本的制作方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上制作出來(lái)的動(dòng)物標(biāo)本大多數(shù)是采用福爾馬林固定的普通標(biāo)本。其外觀美觀度差，且無(wú)法清晰的觀察到骨骼發(fā)育的情況，不易于對(duì)于各種骨骼發(fā)育畸形進(jìn)行研宄和教學(xué)，目前國(guó)內(nèi)還未形成水晶骨骼藝術(shù)的潮流，同樣也缺少規(guī)模制作水晶骨骼標(biāo)本的廠家。并且國(guó)內(nèi)相關(guān)技術(shù)有限，在制作難度較大的骨骼標(biāo)本的技術(shù)尚有待提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種水晶骨骼標(biāo)本的制作方法。該制作方法中采用一種全新的染色方法，制作周期縮短為15?30天，制作出的水晶骨骼在質(zhì)量上優(yōu)越，且制作種類較多，具有商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的潛力。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0005]水晶骨骼標(biāo)本的制作方法，包括如下步驟:
[0006](I)取材:獲取動(dòng)物標(biāo)本；
[0007](2)固定:采用50%乙醇、100%甲醇、100%丙酮和100%乙醇固定步驟(I)獲得的動(dòng)物標(biāo)本；
[0008](3)染色:采用Alizerin red(中文名稱茜素紅)染色液和/或Alcian blue(中文名稱阿利新藍(lán))染色液對(duì)步驟(2)固定的動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行骨骼染色處理；
[0009](4)透明:采用50%丙三醇、75%丙三醇和100%丙三醇對(duì)步驟(3)染色后的動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行梯度透明化處理；
[0010](5)顯微處理:在顯微鏡下，對(duì)步驟(4)透明化處理后的動(dòng)物標(biāo)本除去相應(yīng)部位的軟組織，得到所述水晶骨骼標(biāo)本。
[0011]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，染色前用30%過(guò)氧化氫進(jìn)行標(biāo)本處理；
[0012]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，染色前對(duì)動(dòng)物標(biāo)本外表皮膚行顯微鏡下剝離術(shù)；
[0013]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，染色前用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.5?3%的氫氧化鉀溶液進(jìn)行動(dòng)物標(biāo)本脫脂處理；
[0014]在優(yōu)選方案中，所述步驟(3)的具體步驟為:
[0015](a)配制冰醋酸和乙醇的混合液，其體積比例為(I?2): (4?6)，然后按照(100?500) μ T,/1 OOmT,的比例將Alcian blue儲(chǔ)存液加入混合液中，得到Alcian blue染色液，所述儲(chǔ)存液是用70%酒精配制的Alcian blue飽和液；
[0016](b)配制質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為0.5?3%的氫氧化鉀溶液，按照100 yL/100mL的比例加入 Alizerin red，得到 Alizerin red 染色液；
[0017](c)采用步驟(a)和/或(b)配制的染色液對(duì)步驟(2)固定的動(dòng)物標(biāo)本進(jìn)行骨骼染色處理。
[0018]根據(jù)材料的不同所需要的染色液的酸堿程度而有所差異，Alizerin red染色液的pH值一般為8?10，Alcian blue染色液的pH值一般為2?4。
[0019]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)染色過(guò)程中使用冰醋酸和/或氫氧化鉀對(duì)染液pH進(jìn)行調(diào)節(jié)，使染色劑和骨骼快速特異性結(jié)合；
[0020]在優(yōu)選方案中，所述步驟(3)染色過(guò)程中，采用少量、多次染色法。
[0021]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，采用Alcian blue染色液染色后用100%乙醇洗凈浮色；采用Alizerin red染色液染色后用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5%的氫氧化鉀溶液洗凈浮色。
[0022]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，染色后采用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5%的氫氧化鉀溶液處理，或是重復(fù)交叉采用質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1.5%的氫氧化鉀溶液和30%過(guò)氧化氫處理。
[0023]在優(yōu)選方案中，在步驟(3)中，染色后用甲醛溶液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行定型。
[0024]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果:
[0025]本發(fā)明公開(kāi)了 “水晶骨骼標(biāo)本”的制作方法，且是第一次命名“水晶骨骼標(biāo)本”；固定，采用50%乙醇、100%甲醇、100%丙酮和100%乙醇固定動(dòng)物標(biāo)本，對(duì)環(huán)境不會(huì)帶來(lái)污染；在Alizerin red和/或Alcian blue進(jìn)行骨賂染色的染色液進(jìn)行了化繁為簡(jiǎn)的處理，易于操作；本發(fā)明制作方法的制作周期縮短為15?30天，制作出的水晶骨骼在質(zhì)量上優(yōu)越，且制作種類較多，具有商業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的潛力；本發(fā)明制作方法所得水晶骨骼，具有骨骼精細(xì)、美觀、透明度高、制作周期短、可量產(chǎn)等特點(diǎn)。
[0026]水晶骨骼是一種能夠快速使動(dòng)物骨骼以類似“4D X-ray”的效果展現(xiàn)出來(lái)的方法，使得平時(shí)無(wú)法觀察到微細(xì)的骨骼系統(tǒng)能夠清晰地、絲發(fā)未損且原生態(tài)地呈現(xiàn)出來(lái)。與傳統(tǒng)的骨骼標(biāo)本不同，水晶骨骼藝術(shù)品色彩斑斕，呈現(xiàn)水晶般的奇幻效果，不用傳統(tǒng)福爾馬林浸泡，而采用環(huán)保無(wú)毒的溶液進(jìn)行保存，不僅可以用于骨骼系統(tǒng)發(fā)育領(lǐng)域的科學(xué)研宄，還具有廣泛的藝術(shù)欣賞和教學(xué)運(yùn)用等價(jià)值。
[0027]水晶骨骼藝術(shù)品的制作過(guò)程是根據(jù)骨骼不同位置組織的化學(xué)性質(zhì)分步進(jìn)行的，軟骨組織必須在酸性的環(huán)境中才可以染色(Alcian Blue)，而硬骨組織則需要在堿性條件下著色(Alizarin Red)。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。本發(fā)明中所述的50%乙醇、100%甲醇、100%丙酮、100%乙醇、50%丙三醇、75%丙三醇、100%丙三醇和30%過(guò)氧化氫中的百分?jǐn)?shù)是指體積百分比濃度。
[0029]實(shí)施例1
[0030]制作雞胚水晶骨骼標(biāo)本的方法，具體步驟如下:
[0031]取孵化12天雞胚，放入50%乙醇中固定，放搖床12小時(shí)；然后放入100%甲醇中固定12小時(shí)；再放入100%丙酮中固定12小時(shí)；最后將雞胚放入100%乙醇中固定12小時(shí)；
[0032]配制Alcian blue染色液，將雞胚行去皮術(shù)后放入染色液中約14小時(shí)；之后放入100%乙醇中洗去浮色，將雞胚放入5%氫氧化鉀溶液中約24?28小時(shí)；配制Alizerinred染色液，將雞胚放入染色液中染色3?10天(根據(jù)胚胎的大小)；再將雞胚放入1.5%氫氧化鉀溶液中漂洗非特異性著色約12小時(shí)；
[0033]放入50%丙三醇中約48小時(shí)，后依次進(jìn)入75%丙三醇、100%丙三醇進(jìn)行梯度透明化處理大約2天直至胚胎沉到底部；對(duì)染色后的雞胚進(jìn)行顯微處理完成制作。
[0034]實(shí)施例2
[0035]制作烏龜水晶骨骼標(biāo)本的方法，具體步驟如下:
[0036]取巴西龜一只或數(shù)只，放入50%乙醇中固定，放搖床12小時(shí)；然后放入100%甲醇中固定12小時(shí)；再放入100%丙酮中固定12小時(shí)；最后將巴西龜放入100%乙醇中固定12小時(shí)；
[0037]將250微升30%過(guò)氧化氫加入到100mL純水中，放入巴西龜，漂洗5天；
[0038]配制Alizerin red染色液，將巴西龜放入染色液中染色15?20天；再將巴西龜放入1.5%氫氧化鉀溶液中漂洗非特異性著色約24小時(shí)；
[0039]放入50 %丙三醇中約48小時(shí)，后依次進(jìn)入75 %丙三醇、100 %丙三醇進(jìn)行梯度透明化處理大約2天直至烏龜沉到容器底部；對(duì)染色后的巴西龜進(jìn)行顯微處理完成制作。
[0040]實(shí)施例3
[0041]制作魚(yú)類水晶骨骼標(biāo)本的方法，具體步驟如下:
[0042]取魚(yú)類一條或數(shù)條，放入50%乙醇中固定，放搖床12小時(shí)；然后放入100%甲醇中固定12小時(shí)；再放入100%丙酮中固定12小時(shí)；最后將小魚(yú)放入100%乙醇中固定12小時(shí)；
[0043]將250微升30%過(guò)氧化氫加入到100mL純水中，放入小魚(yú)，漂洗24小時(shí)，漂洗24小時(shí)；
[0044]配制Alizerin red染色液，將小魚(yú)放入染色液中染色5天，再將小魚(yú)放入1.5%氫氧化鉀溶液中漂洗非特異性著色及對(duì)周圍組織進(jìn)行脫脂處理3天；
[0045]放入50 %丙三醇中約48小時(shí)，后依次進(jìn)入75 %丙三醇、100 %丙三醇進(jìn)行梯度透明化處理大約2天直至魚(yú)體沉到容器底部；對(duì)染色后的小魚(yú)進(jìn)行顯微處理完成制作。
[0046]實(shí)施例4
[0047]制作蛇水晶骨骼標(biāo)本的方法，具體步驟如下:
[0048]取蛇一條，放入50%乙醇中固定，放搖床12小時(shí)；然后放入100%甲醇中固定12小時(shí)；再放入100%丙酮中固定12小時(shí)；最后將蛇放入100%乙醇中固定12小時(shí)；
[0049]將1.25毫升30%過(guò)氧化氫加入到5000mL純水中，放入蛇，漂洗24小時(shí)，
[0050]配制Alizerin red染色液，將蛇放入染色液中染色10天，再將蛇放入1.5%氫氧化鉀溶液中漂洗非特異性著色及對(duì)周圍組織進(jìn)行脫脂處理10天；
[0051 ] 放入50 %丙三醇中約48小時(shí)，后依次進(jìn)入75 %丙三醇、100 %丙