一種快速檢測獐茅種子生活力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于種子檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速檢測獐茅種子生活力的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 獐茅屬于禾本科植物，以營養(yǎng)生長和營養(yǎng)繁殖為主，匍匐莖是其重要的營養(yǎng)繁殖 器官，與之相比，有性繁殖對于獐茅種群的貢獻(xiàn)不大，成穗率僅為15. 7%，籽實很小，千粒重 僅為0. 12±0.0015g。獐茅廣泛分布于中國北方各省內(nèi)陸以及沿海的鹽漬土壤地區(qū)，為鹽生 植物中的泌鹽植物，是一種固沙和鹽堿地區(qū)放牧的優(yōu)良牧草。由于獐茅耐鹽堿的生理特性 及營養(yǎng)繁殖的生理現(xiàn)象，目前，對獐茅及其同屬植物的泌鹽生理及種群結(jié)構(gòu)等研宄較多，而 獐茅種子發(fā)芽率相對較低，對于獐茅種子萌發(fā)活力研宄較少，因此深入了解獐茅種子生活 力，通過測定獐茅種子生活力預(yù)判獐茅種子發(fā)芽率，對于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有實踐意 義。
[0003] 四唑（2, 3, 5-氯代三苯基四氮唑，以下簡稱TTC)測定技術(shù)于1942年由德國萊抗 (Lakon)教授提出，之后為世界各國所采用。目前，TTC檢測方法多用于農(nóng)作物、蔬菜、林木 等種子的測定，而用于牧草等種子的相對較少，我國《牧草種子檢驗規(guī)程》中列出了 57個屬 的草種TTC測定方法，獐茅屬尚未列其中。許多牧草尤其是禾本科和豆科牧草種子，收獲后 即使給予適宜的發(fā)芽條件也不能發(fā)芽或發(fā)芽率很低。TTC法可檢測獐茅種子的生活力，縮短 了采用發(fā)芽試驗衡量種子生活力的時間，但傳統(tǒng)的TTC法將種子用水浸種24h左右后，再加 入TTC溶液中進(jìn)行染色6-24h，時間仍較長，因此，研宄一種快速檢測獐茅種子生活力的方 法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種快速檢測獐茅種子生活力的方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中檢測時間 長的問題，能夠快速有效的檢測獐茅種子的生活力，對于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有重要的 實踐意義。
[0005] 本發(fā)明測定方法所依據(jù)的原理：有活力種胚中的脫氫酶可以將TTC還原成不溶性 的TTF (紅色三苯基甲），如果種胚死亡或種胚生活力衰退，則不能染色或染色較淺，因此，可 以根據(jù)種胚染色的部位或染色的深淺程度來鑒定種子的生活力，化學(xué)方程式如下：
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)： 本發(fā)明提供了一種快速檢測獐茅種子生活力的方法，包括以下步驟： (1)首先將獐茅種子在臭氧水中浸泡2-3min，取出加入含有烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙 氧基化物的水溶液中浸種，待種子均吸脹后，沿靠近種胚3/4處橫切； (2)將獐茅種子有種胚一端用質(zhì)量百分比為0. 5~5%的TTC溶液及質(zhì)量百分比為 0. 1-0. 3%的葡萄糖酸鋅溶液的混合液置于25~35°C暗環(huán)境下染色2-4h，然后用蒸餾水 沖洗2-3遍，再以乳酸苯酚透明劑浸種處理染色后的種子，觀察獐茅種子染色情況，染色均 勻、一致，呈鮮紅色，胚形態(tài)正常，胚根尖及子葉邊緣顏色稍暗的為正常有生活力的種子；染 色異?；蛘卟蝗旧姆N子為無生活力種子，計算有生活力種子的百分率。
[0006] 進(jìn)一步的，所述臭氧水的濃度為1. 2mg/L。
[0007] 進(jìn)一步的，步驟（1)中，所述水溶液的各組分重量百分比為：烷基糖苷5-8%，脂肪 酸甲酯乙氧基化物10-15%及余量的水。
[0008] 進(jìn)一步的，步驟（2)中，所述TTC溶液同葡萄糖酸鋅溶液的體積比為5:1。
[0009] 進(jìn)一步的，所述TTC溶液最優(yōu)化的質(zhì)量百分比為1%，所述葡萄糖酸鋅溶液最優(yōu)化 的質(zhì)量百分比為0.3%。
[0010] 進(jìn)一步的，所述染色的最優(yōu)化的溫度為30°c。
[0011] 進(jìn)一步的，所述乳酸苯酚透明劑浸種處理的條件為：溫度38°C，處理時間30min。
[0012] 本發(fā)明中所述染色異常為染色很淡或顏色深暗，未呈現(xiàn)鮮紅色，并且有雜色斑、白 斑，胚根、胚芽、胚軸不染色。
[0013] 本發(fā)明將獐茅種子預(yù)先經(jīng)烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液進(jìn)行浸泡， 獐茅種子表皮含有的蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，是一層天然的疏水屏障，不利于浸潤，傳統(tǒng)的機械方法去除 表面蠟質(zhì)易破壞種子的內(nèi)部結(jié)構(gòu)且去除穎皮后仍需長時間水浸泡使其吸脹，脂肪酸甲基乙 氧基化物能夠溶解種子表面的蠟質(zhì)，加快種子的吸脹，烷基糖苷同脂肪酸甲基乙氧基化物 協(xié)同作用，加快表面蠟質(zhì)的溶解，同時，烷基糖苷具有較強的廣譜抗菌活性，能夠避免后期 浸泡染色導(dǎo)致種子發(fā)生霉變，影響檢測效率及檢測結(jié)果。本發(fā)明發(fā)明人經(jīng)過大量試驗后發(fā) 現(xiàn)，葡萄糖酸鋅中的鋅離子能夠加速種子的呼吸作用，從而縮短染色所需時間，提高染色效 率。
[0014] 本發(fā)明的有益效果為： (1)本發(fā)明將獐茅種子通過含有烷基糖苷及脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液進(jìn)行預(yù)處 理，能夠縮短浸泡時間，減少對種子的機械性損傷，同時減少染色過程中種子霉變。
[0015] (2)本發(fā)明將TTC溶液同葡萄糖酸鋅溶液進(jìn)行復(fù)配，能夠快速有效的檢測獐茅種 子生活力，對于草地利用和生態(tài)保護(hù)具有重要的實踐意義。
【附圖說明】
[0016] 圖1為獐茅種子染色后200倍顯微鏡下圖譜。
[0017] 其中：（1)_ (5)為生活力的種子，（6)- (9)為無生活力種子。
【具體實施方式】
[0018] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例來進(jìn)一步說明。
[0019] 溶液的制備： 1. TTC溶液的配制方法：準(zhǔn)備兩種溶液：溶液I :在1000ml水中溶解9. 078g磷酸二氫 鉀（KH2P04);溶液II :在1000ml水中溶解9. 472g磷酸氫二鈉（Na2HP04)，或在1000ml水中 溶解11. 876g磷酸氫二鈉（Na2HP04 ? 2H20)。取溶液I 2份和溶液II 3份混合得到緩沖溶 液。緩沖溶液PH值保持在6. 5-7. 5范圍內(nèi)。按照比例在緩沖溶液里溶入四氮唑粉末，獲得 確定濃度。裝入棕色試劑瓶，貯存于4°C條件下備用。
[0020] 2.乳酸苯酚透明級的配制方法：將10g苯酚加入10mL的蒸餾水，加熱溶解后，加 入l〇g乳酸（比重1. 21)及20g甘油即可。
[0021] 獐茅種子生活力的計算方法：獐茅種子生活力=胚部染成紅色的種子數(shù)/種子總 數(shù) X100%。
[0022] 本發(fā)明所使用的烷基糖苷為APG0810。
[0023] 實施例1 一種快速檢測獐茅種子生活力的方法，包括以下步驟： (1) 首先將50粒獐茅種子（2014年在山東省壽光縣北部采集）在1. 2mg/L臭氧水中浸 泡2min，取出加入含有8%烷基糖苷及12%脂肪酸甲酯乙氧基化物的水溶液中浸種，待種子 吸脹均一后，然后沿靠近種胚3/4處橫切； (2) 將獐茅種子有種胚一端用質(zhì)量百分比為1%的TTC溶液及質(zhì)量百分比為0. 3%的葡 萄糖酸鋅溶液(本發(fā)明所使用的葡萄糖酸鋅溶液為葡萄糖酸鋅的水溶液，以下實施例均同 此)按照質(zhì)量比5:1組成的混合液置于30°C暗環(huán)境下染色，然后用蒸餾水沖洗2遍，再以乳 酸苯酚透明劑在38°C條件下浸種處理30min染色后的種子，觀察獐茅種子染色情況，染色 均勻、一致，呈鮮紅色，胚形態(tài)正常，胚根尖及子葉邊緣顏色稍暗的為正常有生活力的