一種利用秋冬休眠芽為外植體進(jìn)行玫瑰組培快繁的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種利用秋冬季休眠芽為外植體進(jìn)行玫瑰組培快繁的方法，屬于觀賞 植物種苗無性繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 玫瑰（Rosa rugosa Thunb.)是薔薇科薔薇屬落葉灌木，品種繁多，花色豐富，香 氣濃郁，不僅是園林綠化的優(yōu)良植物材料，而且是世界上最古老的天然香料植物之一，是香 水、化妝品等化工產(chǎn)品的香料來源和食品、飲品工業(yè)的重要添加原料，還是珍貴的中藥材， 是集觀賞、綠化、藥用、美容、美食于一身的名貴花木。由其鮮花提取的玫瑰精油為世界名 貴精油，價(jià)格極其昂貴，被譽(yù)為"液體黃金"，主要用于高檔香水、化妝品和保健行業(yè)中，具有 緩解精神壓力、調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌、延緩衰老、美容養(yǎng)顏等功效。正因?yàn)槠湓谒幱?、食用、日?化工等領(lǐng)域的廣泛用途，國際國內(nèi)市場對(duì)玫瑰種苗的需求日益增加，市場需求量大，前景廣 闊。
[0003] 傳統(tǒng)的玫瑰繁殖方法繁殖周期長，幼苗成活率低，難以實(shí)現(xiàn)工廠化快速生產(chǎn)，為滿 足市場需求，建立一套玫瑰快速繁殖體系方法成為當(dāng)下熱點(diǎn)。利用玫瑰組織培養(yǎng)技術(shù)可實(shí) 現(xiàn)玫瑰的快速繁殖，綜合已有研宄報(bào)道，多選取葉片及嫩莖腋芽為外植體，取材時(shí)間集中于 春夏植株生長季節(jié)，未見直接選取秋冬季休眠芽組織進(jìn)行玫瑰快繁的相關(guān)內(nèi)容。因此，研宄 建立一種以休眠芽為外植體的玫瑰微體快繁技術(shù)可以打破玫瑰秋冬季繁殖限制，提高玫瑰 繁殖效率。
[0004] 經(jīng)文獻(xiàn)檢索，目前還沒有任何關(guān)于利用玫瑰休眠芽進(jìn)行組培快繁方面公開發(fā)表的 內(nèi)容。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于打破玫瑰秋冬季繁殖限制，發(fā)明一種利用玫瑰秋冬季休眠芽進(jìn) 行微體快繁的方法。
[0006] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種利用秋冬季休眠芽為外植體進(jìn)行玫瑰組 培快繁的方法，其特征在于包含以下步驟：
[0007]A外植體的消毒處理：于冬季晴朗天氣剪取一年生生長健壯、無病蟲害的枝條，用 軟毛刷輕刷干凈，剪成長約4cm，包含3-4個(gè)休眠腋芽的小段，用干凈紗布包裹后流水沖洗 3h，移入無菌工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理；
[0008] 先用75%酒精浸泡并勻速攪動(dòng)60s，無菌水沖洗3-5遍，再用3% NaCIO浸泡并勻 速攪動(dòng)lOmin，無菌水沖洗3-5遍，取出后用無菌濾紙吸干表面水分，用手術(shù)刀將其切成長 約lcm的單腋芽莖段備用；
[0009] B 初代培養(yǎng)：初代培養(yǎng)基配方為 MS+lmg/LBA+0. 05-0. lmg/LNAA+30g/L 蔗糖 +7g/ L瓊脂，pH值為5. 8 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000Lx，光照時(shí)長14h/d，溫度25±2°C ;將 消毒后的單腋芽莖段用手術(shù)刀剝?nèi)ヒ秆亏[片（注意避免傷及腋芽）后橫向接入初代培養(yǎng)基 上，暗培養(yǎng)1周，20d后休眠芽萌發(fā)，30d后切取萌發(fā)且長勢良好的休眠芽接入增殖培養(yǎng)基上 繼續(xù)培養(yǎng)；
[0010] C 增殖培養(yǎng)：增殖培養(yǎng)基配方為 MS+l-2mg/LBA+0. 05mg/LNAA+0. 6mg/L GA3+30g/ L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5. 8 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照時(shí)長14h/d，溫度 25±2°C ;由初代培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上的休眠芽30d后可分化出大量叢生芽；
[0011] D 生根培養(yǎng)：生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+0. 2-0. 5mg/LIBA+0. 2-0. 5mg/LNAA+l-l. 5g 活性炭+3〇g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5. 8;切取叢生芽中生長健壯、莖高l-2cm的不定芽 單芽，接入生根培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照時(shí)長14h/d，溫度25±2°C; 培養(yǎng)2-3周后開始萌發(fā)不定根。
[0012] 所述步驟⑷中玫瑰秋冬季休眠芽的消毒方法為：75%酒精60s+3% NaCIO 10min〇
[0013] 所述步驟⑶中玫瑰秋冬季休眠芽初代培養(yǎng)基配方為MS+lmg/LBA+0. 05mg/ LNAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5. 8 ;
[0014] 所述步驟（B)中玫瑰秋冬季休眠芽剝?nèi)ヒ秆亏[片（注意避免傷及腋芽）后接種于 初代培養(yǎng)基上。
[0015] 所述步驟（C)中玫瑰秋冬季休眠芽增殖培養(yǎng)基配方為MS+2mg/LBA+0. 05mg/ LNAA+0.6mg/LGA3+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5.8 ;所述步驟（D)中玫瑰秋冬季休眠芽 生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+0. 2mg/LIBA+0. 2mg/LNAA+lg活性炭+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，pH 值為5. 8。
[0016] 本發(fā)明成功通過選取玫瑰秋冬季休眠芽為外植體，結(jié)合消毒方式，初代培養(yǎng)，增殖 培養(yǎng)，生根培養(yǎng)等一系列組織培養(yǎng)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)利用秋冬季休眠芽快速繁殖玫瑰。
[0017] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：污染率低，繁殖系數(shù)高，培育周期短，打破秋冬季繁殖限制，很 好的解決了玫瑰傳統(tǒng)繁殖方法效率低、周期長的問題，可應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 本發(fā)明方法選用玫瑰秋冬季休眠芽，通過對(duì)消毒方式、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根 培養(yǎng)等四個(gè)主要步驟的調(diào)控，實(shí)現(xiàn)玫瑰秋冬季休眠芽組織的快速繁殖。具體包含以下步 驟：
[0019] A外植體的消毒處理：于冬季晴朗天氣剪取一年生生長健壯、無病蟲害的枝條，用 軟毛刷輕刷干凈，剪成長約4cm，包含3-4個(gè)休眠腋芽的小段，用干凈紗布包裹后流水沖洗 3h，移入無菌工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理；先用75%酒精浸泡并勻速攪動(dòng)60s，無菌水沖洗3-5遍， 再用3% NaCIO浸泡并勻速攪動(dòng)lOmin，無菌水沖洗3-5遍，取出后用無菌濾紙吸干表面水 分，用手術(shù)刀將其切成長約lcm的單腋芽莖段備用；
[0020] B初代培養(yǎng)：初代培養(yǎng)基配方為MS+lmg/LBA+0. 05mg/LNAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊 脂，pH值為5. 8 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照時(shí)長14h/d，溫度25±2°C;將消毒 后的單腋芽莖段用手術(shù)刀剝?nèi)ヒ秆亏[片（注意避免傷及腋芽）后橫向接入初代培養(yǎng)基上， 暗培養(yǎng)1周，20d后休眠芽萌發(fā)，30d后切取萌發(fā)且長勢良好的休眠芽接入增殖培養(yǎng)基上繼 續(xù)培養(yǎng)；
[0021] C 增殖培養(yǎng)：增殖培養(yǎng)基配方為 MS+2mg/LBA+0. 05mg/LNAA+0. 6mg/LGA3+30g/L 蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5. 8 ;培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照時(shí)長14h/d，溫度 25±2°C ;由初代培養(yǎng)基轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上的休眠芽30d后可分化出大量叢生芽；
[0022] D生根培養(yǎng)：生根培養(yǎng)基配方為1/2MS+0. 2mg/LIBA+0. 2mg/LNAA+lg活性炭++30g/ L蔗糖+7g/L瓊脂，pH值為5.8 ;切取叢生芽中生長健壯、莖高l-2cm的不定芽單芽，接入生 根培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件為光照強(qiáng)度2000-3000LX，光照時(shí)長14h/d，溫度25±2°C ;培養(yǎng)2-3周 后開始萌發(fā)不定根。
[0023] 本發(fā)明用以下實(shí)例中涉及的外植體處理與消毒、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)技 術(shù)的研宄對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行充分說明，以證明本研宄成果的真實(shí)性、正確性與可操 作性。
[0024] a.外植體最佳消毒處理方式的研宄
[0025] 試材選用玫瑰品種"紫枝玫瑰"，將取回的外植體用上述A中方法預(yù)處理后，于無 菌工作臺(tái)上用3種消毒方式對(duì)單休眠芽莖段進(jìn)行消毒處理，剝?nèi)[片后接種于初代培養(yǎng)基