針對(duì)頸總動(dòng)脈或上矢狀竇中誘發(fā)出血的止血?jiǎng)┬阅茉u(píng)價(jià)用動(dòng)物模型及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于評(píng)價(jià)止血性能的動(dòng)物模型及其用途，更具體地說(shuō)，涉及一種 用于評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┬阅艿膭?dòng)物模型，所述動(dòng)物誘發(fā)有頸總動(dòng)脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)出血， 使用該動(dòng)物模型篩選止血?jiǎng)┑姆椒ǎ褪褂迷搫?dòng)物模型評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ姆椒ā?br>【背景技術(shù)】
[0002] 如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)"醫(yī)用瞬間粘合劑"在廣義上是指包括橡皮膏、手術(shù)粘合劑 和止血?jiǎng)┰趦?nèi)的醫(yī)療用品，而在狹義上是指直接在包括皮膚科、血管外科、消化內(nèi)科和整形 外科在內(nèi)的醫(yī)療領(lǐng)域中使用的粘合劑。因?yàn)獒t(yī)用瞬間粘合劑接觸皮膚，其應(yīng)當(dāng)是生物相容 的，不應(yīng)當(dāng)對(duì)身體有毒有害，應(yīng)當(dāng)具有生物相容性并應(yīng)當(dāng)具有止血功效。此外，即便是在存 在水分的情況下其也應(yīng)表現(xiàn)出瞬時(shí)粘合的性質(zhì)，且不應(yīng)當(dāng)妨礙身體的愈合。
[0003]目前實(shí)際使用的醫(yī)用粘合劑材料包括氰基丙烯酸酯類、纖維蛋白膠類、明膠膠水 類和聚氨醋類。氰基丙稀酸辛醋是一種醫(yī)用組織粘合劑（可自美國(guó)Closure Medical Corp. 以商品名"多抹棒"(Dermabond)商購(gòu)獲得），其于1997年8月被EC批準(zhǔn)上市銷售并在1998 年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)使用。愛(ài)惜康（Ethicon)是強(qiáng)生公司（Johnson&Johnson)的附屬公司，該 公司在包括美國(guó)、歐洲和日本的大約50個(gè)國(guó)家排他性銷售這種產(chǎn)品，并且這種產(chǎn)品在全世 界越來(lái)越多地用于醫(yī)學(xué)應(yīng)用，包括裂傷愈合以及整形外科和重建外科之后的切口縫合。此 外，對(duì)包括1，2-異亞丙基甘油基2-氰基丙烯酸酯、烷基2-氰基丙烯酰基羥乙酸酯和包含 聚（三氧乙烯草酸酯）的甲氧基丙基氰基丙烯酸酯的組織粘合劑進(jìn)行了生物相容性和生物 降解性方面的積極研宄。
[0004] 已有研宄集中于將諸如配體肽（其是一種蛋白酶底物和一種特定類型的細(xì)胞）的 生物活性材料應(yīng)用于粘合劑材料纖維蛋白，從而賦予纖維蛋白功能性。Cohesion Corp.(美 國(guó)）開(kāi)發(fā)出纖維蛋白-膠原蛋白復(fù)合組織粘合劑（CoStasis?)，其是一種包含凝血酶和牛 膠原蛋白的止血產(chǎn)品。外科膠"Tissel"在1998年被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于心臟搭橋手術(shù)、結(jié) 腸直腸外科手術(shù)、創(chuàng)傷等，而其他幾種產(chǎn)品正在等待FDA的批準(zhǔn)。
[0005] 事實(shí)上，使用測(cè)試動(dòng)物對(duì)醫(yī)用粘合劑進(jìn)行的動(dòng)物模型研宄已報(bào)道如下。Bijan S.造 成制作動(dòng)物模型的兔大動(dòng)脈破損，并且使用該動(dòng)物模型測(cè)定了醫(yī)用粘合劑Gelfoam、Avitene、 Surgicel 和 FloSeal 的止血功效（Bijan. ? S 等人，Journal of Surgical Research，106 : 99-107,2002)。此外，Hasan Bilgili誘發(fā)在豬皮膚、肝臟、脾、靜脈和動(dòng)脈中的出血來(lái)制作豬 出血模型，并使用該豬出血模型評(píng)價(jià)了止血功效（Hasan Bilgili等人，Med Princ Pract，18: 165-169 2009)。此外，Ozer Kandemir等人通過(guò)對(duì)具有主動(dòng)脈出血的大鼠模型的病理和免 疫組織學(xué)分析研宄了新的活性止血成分的功效（Hasan Bilgili等人，Med Princ Pract，18: 165-169 2009)。
[0006] 然而，在自然止血困難的情況下，如血液噴涌，尚未見(jiàn)報(bào)道用于演示在血液涌出的 狀態(tài)下止血?jiǎng)┑闹寡πУ膭?dòng)物模型。此外，在最嚴(yán)重的出血，如動(dòng)脈出血的情況下，也就 是，在從傷口噴出的血液達(dá)到相當(dāng)高度的情況下，血液以高速率流出使大量的血液會(huì)損失。 在這種情況下，血液難以凝結(jié)，并且因此是不容易評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┑墓πА?br>[0007] 另外，在用于評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ闹寡獎(jiǎng)游锬Ｐ偷闹苽渲?，由于?dòng)脈和靜脈的特征， 難以選擇血管。出于這個(gè)原因，止血?jiǎng)游锬Ｐ偷闹苽浞椒ㄓ邢蕖?br>[0008] 同時(shí)，上矢狀竇出血是不可避免的并且在鼻竇手術(shù)中經(jīng)常發(fā)生。然而，因?yàn)閲@上 矢狀竇的組織是硬組織，難以篩選有效的止血?jiǎng)?。此外，由于不存在用于篩選抑制出血的組 合物的有效的動(dòng)物模型，使用軟組織篩選的止血?jiǎng)┑靡詰?yīng)用。
[0009] 因此，本發(fā)明人已進(jìn)行了廣泛的努力來(lái)開(kāi)發(fā)新型且有效的用于評(píng)價(jià)止血性能的動(dòng) 物模型，和使用該動(dòng)物模型評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ姆椒ǎ⑶医Y(jié)果是，已制備出在動(dòng)物的頸總動(dòng) 脈（CCA)或矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血的動(dòng)物模型，并且已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該動(dòng)物模型對(duì)測(cè)試止血 劑功效是有用的，從而完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┬阅艿膭?dòng)物模型。
[0011] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種使用上述動(dòng)物模型篩選止血?jiǎng)┑姆椒ā?br>[0012] 本發(fā)明的又另一個(gè)目的是提供一種使用上述動(dòng)物模型評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ姆椒ā?br>[0013] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種用于評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型，該動(dòng)物 在頸總動(dòng)脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血。
[0014] 本發(fā)明還提供了通過(guò)使用上述評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型來(lái)從候選止血?jiǎng)┲泻Y 選止血?jiǎng)┑姆椒ā?br>[0015] 本發(fā)明還提供了通過(guò)使用上述評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型來(lái)評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ?方法。
[0016] 本發(fā)明的其它的特征和實(shí)施方式將從以下的詳細(xì)說(shuō)明和所附權(quán)利要求中更顯而 易見(jiàn)。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1示出麻醉試驗(yàn)動(dòng)物的步驟。
[0018] 圖2示出在麻醉后的頭部已被固定在立體定位架，且要對(duì)剃毛后的部位進(jìn)行手術(shù) 操作的試驗(yàn)動(dòng)物。
[0019] 圖3示出向溫度傳感器施用潤(rùn)滑劑，舉起試驗(yàn)動(dòng)物的尾巴，然后將溫度傳感器插 入肛門(mén)的步驟。
[0020] 圖4示出切開(kāi)動(dòng)物模型的手術(shù)部位并除去結(jié)締組織以暴露動(dòng)脈。
[0021] 圖5示出作為動(dòng)脈模型的手術(shù)部位的頸總動(dòng)脈（CCA)。
[0022] 圖6示出在誘發(fā)出血后為了止血而施用于棉的止血?jiǎng)?br>[0023] 圖7示出切開(kāi)靜脈模型的頭皮。
[0024] 圖8示出通過(guò)切開(kāi)顱骨以確保手術(shù)部位和示出上矢狀竇（SSS)的位置。
[0025] 圖9示出使用動(dòng)脈動(dòng)物模型測(cè)試候選止血?jiǎng)┑闹寡πУ慕Y(jié)果。
[0026] 圖10示出使用靜脈動(dòng)物模型測(cè)試候選止血?jiǎng)┑闹寡πУ慕Y(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 除非另有定義，否則本文中所用的全部技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普 通技術(shù)人員通常所理解的含義相同的含義。一般地說(shuō)，本文所用的命名法和在下文描述的 實(shí)驗(yàn)方法是本領(lǐng)域公知的和常用的。
[0028] 在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種用于評(píng)價(jià)止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型，該動(dòng)物的頸總動(dòng) 脈（CCA)或上矢狀竇（SSS)中誘發(fā)有出血。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施方案中，用于評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明的止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型可通過(guò)包括以 下步驟的方法來(lái)制備：(a)確保動(dòng)物的動(dòng)脈手術(shù)部位；和（b)誘發(fā)動(dòng)物的頸總動(dòng)脈（CCA)出 血。
[0030] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明的止血?jiǎng)┕πУ膭?dòng)物模型可通過(guò)包 括以下步驟的方法來(lái)制備：(a'）確保動(dòng)物的靜脈手術(shù)部位；和（b'）誘發(fā)動(dòng)物的上矢狀竇 (SSS)出血。
[0031] 在本發(fā)明中，該方法可以進(jìn)一步在步驟（a)之前包括麻醉動(dòng)物的步驟。
[0032] 動(dòng)物麻醉可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何常規(guī)方法來(lái)進(jìn)行。在本發(fā)明中的 用于麻醉動(dòng)物的麻醉方法優(yōu)選用Zoletil/Rompun麻醉動(dòng)物的方法；用氯胺酮/甲苯噻嘆/ 乙酰丙嗪麻醉動(dòng)物的方法；單獨(dú)用戊巴比妥鈉麻醉動(dòng)物的方法；或用異氟烷麻醉動(dòng)物的方 法，但不特別限定于此。
[0033] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，麻醉可以使用Zoletil/Rompun進(jìn)行，將流體（乳酸 林格氏液等）在外科手術(shù)期間給予動(dòng)物，并且可在外科手術(shù)后給予抗生素和止痛藥。
[0034] 用于步驟（a)和（a'）中的動(dòng)物可以包括能誘發(fā)出血的所有動(dòng)物。優(yōu)選地，可以包 括哺乳動(dòng)物。更優(yōu)選地，可以包括嚙齒動(dòng)物如小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠和大鼠，以及非人靈長(zhǎng)類動(dòng) 物，如貓、狗、豬、兔、綿羊、山羊、鹿、馬、牛、山魈、黑猩猩和猴。
[0035] 用于步驟（b)和（b'）中的頸總動(dòng)脈（CCA)和上矢狀竇（SSS)的特征在于具有與 動(dòng)物沒(méi)有關(guān)系的部位特異性特征。
[0036] 例如，所使用的動(dòng)物可以是7-15周齡的