r>[0043] 圖1開花前4h的黃瓜未授粉子房。
[0044] 圖2黃瓜未授粉子房誘導(dǎo)后獲得的愈傷組織。
[0045] 圖3黃瓜愈傷組織在愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天，愈傷組織由黃綠色 變綠色，并且開始出現(xiàn)綠色突起的芽點(diǎn)。
[0046] 圖4黃瓜愈傷組織在愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)到90天左右，見(jiàn)到葉、芽 分化。
[0047] 圖5黃瓜愈傷組織在愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到叢生芽。
[0048] 圖6黃瓜叢生芽轉(zhuǎn)移到不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0049] 圖7黃瓜不定苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得到離體再生植株。
[0050] 圖8黃瓜'白絲條'再生植株倍性鑒定圖，8a為流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常植株P(guān)I染料 直方圖，8b為流式細(xì)胞儀檢測(cè)再生植株P(guān)I染料直方圖，8c為正常植株流式細(xì)胞儀統(tǒng)計(jì)數(shù) 據(jù)，8d為再生植株流式細(xì)胞儀統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。
[0051] 圖9黃瓜'川綠1號(hào)'再生植株基因型鑒定的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳圖，其中， M代表Marker 250bp DNA Ladder，Pl、P2、l、2、3、4、5泳道分別代表'川綠1號(hào)'黃瓜父本、 母本、再生植株1-5的881*16005分子標(biāo)記電泳結(jié)果，？1'、？2'、1'、2'、3'、4'、5'泳道分別代 表'川綠1號(hào)'黃瓜父本、母本、再生植株1-5的ssrl9165分子標(biāo)記電泳結(jié)果。
[0052] 圖10子葉外植體在本發(fā)明愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上接種培養(yǎng)，Ila為接種后7天， Ilb為接種于20天，Ilc為接種后35天。
【具體實(shí)施方式】
[0053] 本發(fā)明【具體實(shí)施方式】中使用的試劑、儀器均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。
[0054] 實(shí)施例1本發(fā)明聯(lián)合用培養(yǎng)基的制備
[0055] 聯(lián)合用培養(yǎng)基包括包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基、不定 苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，
[0056] 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以NB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、 7g/L 的瓊脂、I. 5mg/L 的 TDZ、0. 2mg/L 的 NAA ;
[0057] 愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的 蔗糖、7g/L 的瓊脂、2. 5mg/L 的 6-BA、0. 01mg/L 的 NAA ;
[0058] 不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、7g/ L 的瓊脂、0· 5mg/L 的 6-BA ;
[0059] 所述生根培養(yǎng)基為：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、7g/ L 的瓊脂、0· 05mg/L 的 IBA。
[0060] 制備方法如下：
[0061] 一、準(zhǔn)備工作
[0062] 1、待用液 a:
[0063] NB培養(yǎng)基購(gòu)自PhytoTechnology Laboratories公司，為白黃色粉末。
[0064] 稱取4. Ig NB培養(yǎng)基，加入蔗糖30g、瓊脂7g，放入量杯中，再加入600mL水，用電爐 加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。用lmo 1/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為5. 8， 最后加蒸餾水定容至900mL，攪拌均勾，滅菌（在I. 06kg/cm2的壓力下121°C滅菌20min)待 用。
[0065] 2、待用液13:
[0066] 配制MS培養(yǎng)基母液，見(jiàn)表1 :
[0067] 表1 MS培養(yǎng)基母液
[0068]
[0069] 量取母液I 50mL，母液II、III、IV A和IV B各5mL，加入蔗糖30g、瓊脂7g，放入量杯 中，再加入600mL水，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。用Imol/ L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH為5. 8,最后加蒸餾水定容至900mL，攪拌均勾，滅菌（在I. 06kg/cm2 的壓力下121°C滅菌20min)待用。
[0070] 3、激素
[0071] I) TDZ 母液（1.0 mg/mL):
[0072] 取0.1 g TDZ，用4mL的0. lmol/L NaOH溶液預(yù)溶，用水定容至lOOmL，然后用 0. 22 μ m濾器過(guò)濾除菌，凍存于-20 °C待用。
[0073] 2) 6-BA 母液（1.0 mg/mL):
[0074] 取0.1 g 6-BA，用4mL的0. lmol/L NaOH溶液預(yù)溶，用水定容至100mL，然后用 0. 22 μ m濾器過(guò)濾除菌，凍存于-20 °C待用。
[0075] 3) NAA 母液（1.0 mg/mL):
[0076] 取0.1 g NAA，用ImL無(wú)水乙醇預(yù)溶，用水定容至100mL，然后用0. 22 μπι濾器過(guò)濾 除菌，凍存于-20 °C待用。
[0077] 4) IBA 母液（1.0 mg/mL):
[0078] 取0.1 g IBA，用ImL無(wú)水乙醇預(yù)溶，用水定容至100mL，然后用0.22 μ m濾器過(guò)濾 除菌，凍存于-20 °C待用。
[0079] 二、制備聯(lián)合用培養(yǎng)基
[0080] 1、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0081] 取900mL待用液a，冷卻至50°C時(shí)加入I. 5mL TDZ母液和0. 2mL NAA母液，定容至 1L，混勻后分裝即可，4°C保存。
[0082] 2.愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0083] 取900mL待用液b，冷卻至50°C時(shí)加入2. 5mL 6-BA母液和0.0 lmL NAA母液，定容 至1L，混勻后分裝即可，4°C保存。
[0084] 3、不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0085] 取900mL待用液b，冷卻至50°C時(shí)加入0. 5mL 6-BA母液，定容至1L，混勻后分裝即 可，4°C保存。
[0086] 4、生根培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0087] 取900mL待用液b，冷卻至50°C時(shí)加入0. 05mL IBA母液，定容至1L，混勻后分裝即 可，4°C保存。
[0088] 實(shí)施例2本發(fā)明聯(lián)合用培養(yǎng)基的制備
[0089] 聯(lián)合用培養(yǎng)基包括包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基、不定 苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，
[0090] 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以NB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、 5g/L 的瓊脂、I. 2mg/L 的 TDZ、0. 5mg/L 的 NAA ;
[0091] 愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的 鹿糖、5g/L 的瓊脂、I. 5mg/L 的 6-BA、0. 01mg/L 的 NAA ;
[0092] 不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、5g/ L 的瓊脂、0· 3mg/L 的 6-BA ;
[0093] 所述生根培養(yǎng)基為：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、7g/ L 的瓊脂、0· 05mg/L 的 IBA。
[0094] 制備方法如下：
[0095] 一、準(zhǔn)備工作
[0096] 1、待用液a :除了瓊脂加入的是5g，其它同實(shí)施例1中的待用液a。
[0097] 2、待用液b :同實(shí)施例1中的待用液b。
[0098] 3、待用液c :除了瓊脂加入的是5g，其它同實(shí)施例1中的待用液b。
[0099] 4、激素：同實(shí)施例1中的激素。
[0100] 二、制備聯(lián)合用培養(yǎng)基
[0101] 1、愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0102] 取900mL待用液a，冷卻至50°C時(shí)加入I. 2mL TDZ母液和0. 5mL NAA母液，定容至 1L，混勻后分裝即可，4°C保存。
[0103] 2.愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0104] 取900mL待用液c，冷卻至50°C時(shí)加入I. 5mL 6-BA母液和0.0 lmL NAA母液，定容 至1L，混勻后分裝即可，4°C保存。
[0105] 3、不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0106] 取900mL待用液c，冷卻至50°C時(shí)加入0. 3mL 6-BA母液，定容至1L，混勻后分裝即 可，4°C保存。
[0107] 4、生根培養(yǎng)基：以配制1升試劑為例：
[0108] 取900mL待用液b，冷卻至50°C時(shí)加入0. 05mL IBA母液，定容至1L，混勻后分裝即 可，4°C保存。
[0109] 實(shí)施例3本發(fā)明聯(lián)合用培養(yǎng)基的制備
[0110] 聯(lián)合用培養(yǎng)基包括包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基、不定 苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基，
[0111] 愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：以NB培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為40g/L的蔗糖、 4g/L 的瓊脂、2. Omg/L 的 TDZ、0. 5mg/L 的 NAA ;
[0112] 愈傷組織增殖及分化培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的 鹿糖、4g/L 的瓊脂、3. Omg/L 的 6-BA、0. lmg/L 的 NAA ;
[0113] 不定苗伸長(zhǎng)培養(yǎng)基：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，添加終濃度為30g/L的蔗糖、5g/ L 的瓊脂、0· lmg/L 的 6-