洋桔?；ǚ鄢蜏乇４娣椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物花粉保存方法，具體是一種洋桔梗花粉超低溫保存方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 洋桔梗（價(jià)*? (〇船為龍膽科（(?/? (ianaceae)草原龍膽屬（價(jià)以咖沒 1~2年生草本植物，因其花色豐富、姿態(tài)優(yōu)美，被廣泛用于鮮切花、園林布 景等。洋桔梗是雌雄同花植物，雄蕊比雌蕊早成熟3~5天，在自然環(huán)境下屬于異花授粉植 物?；ǚ凼欠N子植物的雄配子體，在有性繁殖中發(fā)揮著重要作用，對花粉進(jìn)行貯藏保存是種 質(zhì)保存、雜交育種及商業(yè)制種的重要手段之一。
[0003]目前，洋桔梗育種主要方式是優(yōu)勢育種，花粉的提前采收和貯藏是必須的。洋桔梗 自交系間雜交存在超強(qiáng)雜種優(yōu)勢，在制種過程中往往需要人工授粉來滿足制種要求，而具 有較高生命力的花粉是確保雜交成功的首要條件，所以，自交系花粉保存成為人工授粉最 重要的前提，洋桔梗的花粉壽命很短，離開植株后自然條件下存活時(shí)間不長，這給種質(zhì)保存 和雜交育種工作帶來極大的不利。花粉的長期保存技術(shù)能夠克服在種子生產(chǎn)上和雜交育種 工作中存在的時(shí)間和空間限制，還可以節(jié)省人力、物力，防止花粉過?；蛉鄙?，親本易丟失 等一系列問題。花期不遇是洋桔梗雜交過程中經(jīng)常遇到的問題之一，只有適宜的花粉貯藏 條件保存花粉的活力是解決該問題的關(guān)鍵。
[0004] 超低溫技術(shù)是進(jìn)行種質(zhì)資源保存的一條新途徑，是目前唯一可行的長期而穩(wěn)定地 保存種質(zhì)資源的方法。將超低溫保存技術(shù)應(yīng)用于花粉保存，其優(yōu)點(diǎn)：（1)操作簡單易行、占 用空間小、安全穩(wěn)定；（2)保存成本低；（3)可以大大延長花粉的保存時(shí)間，使花粉的貯運(yùn)和 交換成為可能，同時(shí)還能很好服務(wù)于育種工作，提高育種效率；（4)經(jīng)過低溫保存的花粉能 保持其遺傳完整性和穩(wěn)定性；（5)低溫條件下還可以避免病蟲害的引入，為地區(qū)間、國際間 的種質(zhì)交換提供方便。
[0005]目前，為滿足種質(zhì)資源保存和交換以及雜交育種工作的需求，花粉超低溫保存研 究日漸興起并逐步深入，保存材料從農(nóng)作物、果樹逐漸擴(kuò)展到藥用植物、園林植物等各類 植物花粉。但不同的植物花粉其超低溫保存所采用的方法以及保存參數(shù)是不一樣的，例如： 在花粉超低溫保存中，預(yù)冷凍的效果因植物種類不同而有較大差異，預(yù)冷凍對桃、梨，人參 以及牡丹的花粉超低溫保存的效果沒有顯著影響；刺葵花粉經(jīng)預(yù)冷凍處理后比直接投入液 氮的花粉生活力有所降低；番茄花粉經(jīng)-25°C預(yù)冷凍能夠顯著提高超低溫保存后花粉的萌 發(fā)率，因此，對花粉預(yù)冷凍的處理完全不能一概而論。再者，超低溫保存后化凍處理也因 不同種類植物有所不同，例如：番茄花粉用自來水沖洗較理想；茄屬花粉超低溫保存后在 50°C水浴中化凍IOs效果最好；牡丹花粉在30°C溫水浴化凍花粉有較高的萌發(fā)率；梅花花 粉在室溫化凍效果較差，用自來水沖洗及溫水浴化凍效果最好，但二者間差異不明顯。
[0006]因此，研發(fā)一種適合于洋桔?；ǚ鄣目尚械馁A藏保存的方法是非常必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決現(xiàn)有洋桔?；ǚ墼谧匀粭l件下保存存在壽命短的問題，本發(fā)明提供一種洋 桔?；ǚ鄢蜏乇４娣椒?。
[0008] 本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種洋桔梗花粉超低溫保存方法，經(jīng)過下列各步 驟： (1) 花粉采集及干燥：選取發(fā)育正常、無病蟲危害的洋桔梗健壯植株，開花后收集花粉， 并進(jìn)行干燥； (2) 凍存方法：將步驟（1)的花粉放入凍存管中并置于2~6°C下冷藏2~5小時(shí)后， 轉(zhuǎn)入-15~-25°C冷凍3~6小時(shí)后，再投入液氮中保存一周，然后再置于_75~-85°C下 長期保存，即完成對洋桔?；ǚ鄣某蜏乇４妗?br>[0009] 所述步驟（1)的收集花粉是在開花后1~2天采集洋桔?；?，取出花藥，將花藥均 勻地散在蠟光紙上，置于室溫下，用600瓦白熾燈在距離1米遠(yuǎn)處光照，待花藥散粉后，用 120目篩子過篩去雜，將過篩后的花粉用硫酸紙包好。
[0010] 所述步驟（1)的干燥是按干燥劑與花粉質(zhì)量比為250~350:1，將花粉與干燥劑一 起置于室溫下進(jìn)行干燥2~5小時(shí)，使花粉含水量為4~7%。
[0011] 所述干燥劑為變色硅膠。
[0012] 所述步驟（2 )所得洋桔?；ǚ墼谑褂脮r(shí)，置于室溫下自然解凍后，再按常規(guī)方法直 接用于授粉。
[0013] 本發(fā)明具備的優(yōu)點(diǎn)及效果：本發(fā)明的方法簡單易行，根據(jù)需要，可隨時(shí)隨地從冰箱 中取出用于制種生產(chǎn)。如果是遠(yuǎn)距離制種可采用冰盒攜帶花粉，到制種地后自然解凍，用于 授粉。本發(fā)明的洋桔?；ǚ鄢蜏乇４娣椒苡行ПＷC花粉生活力，在洋桔梗制種生產(chǎn)上 具有重要的實(shí)踐與推廣意義。經(jīng)試驗(yàn)，正常花粉常溫貯藏3天花粉活力完全喪失，而在本發(fā) 明的保存方法下花粉貯藏90天其生活力高達(dá)65%，新鮮花粉授粉后座果率100%，在本發(fā)明 的保存方法下貯藏90天花粉授粉后座果率高達(dá)70%。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面通過實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0015] 實(shí)施例1 以洋桔梗"雪萊香檳"為例 (1) 花粉采集及干燥：選取發(fā)育正常、無病蟲危害的洋桔梗健壯植株，開花后1~2天 采集洋桔?；ǎ〕龌ㄋ?，將花藥均勻地散在蠟光紙上，置于室溫下，用600瓦白熾燈在距 離1米遠(yuǎn)處光照，待花藥散粉后，用120目篩子過篩去雜，將過篩后的花粉用硫酸紙包好，按 干燥劑與花粉質(zhì)量比為300:1，與干燥劑變色硅膠一起置于密閉的玻璃容器內(nèi)，在室溫下進(jìn) 行干燥3小時(shí)，使花粉含水量為6% ; (2) 凍存方法：將步驟（1)的花粉放入凍存管中并置于4°C下冷藏3小時(shí)后，轉(zhuǎn)入-20°C 冷凍5小時(shí)后，再投入液氮中保存一周，然后再置于-80°C下長期保存，即完成對洋桔?；?粉的超低溫保存。
[0016] 所得洋桔?；ǚ墼谑褂脮r(shí)，置于室溫下自然解凍后，再按常規(guī)方法直接用于授粉。
[0017] 運(yùn)用TTC(氯化三苯基四氮唑)染色法對凍存前后花粉生活力進(jìn)行比較，每處理做3 次重復(fù)，每重復(fù)觀察10個(gè)視野，并用人工授粉方法對凍存后花粉進(jìn)行授粉，調(diào)查結(jié)果情況， 每處理授粉10朵花，調(diào)查座果數(shù)，計(jì)算平均值，結(jié)果如下表1 : 表1不同貯存條件下"雪萊香檳"花粉活力和座果率變化<