為1〇〇11^/1]11，得到10〇11^/1]11大花紅景天95%乙醇提取物二甲基亞砜溶液、10〇11^/1]11小花 紅景天95 %乙醇提取物二甲基亞砜溶液和lOOmg/mL高山紅景天95 %乙醇提取物二甲基亞 砜溶液。
[0059] 吸取濃度為lOmg/mL的一種紅景天提取物二甲基亞砜溶液ImL加到裝有IOOmL融 化的PDA培養(yǎng)基（45°C)的三角瓶中混勻，得到IOlml藥品培養(yǎng)基，該IOlml培養(yǎng)基平均倒 入5個滅菌培養(yǎng)皿中（直徑9cm)，制成該種紅景天提取物的含量為0.lmg/mL的帶藥培養(yǎng)基 平板。
[0060] 吸取濃度為lOOmg/mL的一種紅景天提取物二甲基亞砜溶液ImL加到裝有IOOmL 融化的PDA培養(yǎng)基（45°C)的三角瓶中混勻，得到IOlml藥品培養(yǎng)基，該IOlml培養(yǎng)基平均 倒入5個滅菌培養(yǎng)皿中（直徑9cm)，制成該種紅景天提取物的含量為lmg/mL的帶藥培養(yǎng)基 平板。
[0061] 吸取ImL二甲基亞砜加到裝有IOOmL融化的PDA培養(yǎng)基（45°C)的三角瓶中混勻， 得到IOlml對照培養(yǎng)基，該IOlml對照培養(yǎng)基平均倒入5個滅菌培養(yǎng)皿中（直徑9cm)，制成 對照培養(yǎng)基平板。
[0062] 每一種供試菌株的測定方法均如下：供試菌株在PDA培養(yǎng)基中于25°C培養(yǎng)5天后 在菌落邊緣菌絲生長旺盛處用打孔器打取直徑為0. 8cm的菌餅，分別接種于每個培養(yǎng)皿中 央（有菌絲的一面向下）。每個帶藥培養(yǎng)基平板和每個對照培養(yǎng)基平板各放一個菌餅，每處 理設(shè)3個重復(fù)（每個重復(fù)1個平板），25°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天后，采用十字交叉法測定菌落 直徑，按以下公式計(jì)算抑菌率：
[0063] 抑菌率=(對照培養(yǎng)基平板菌落直徑-0. 8)-(帶藥培養(yǎng)基平板菌落直徑-0. 8)/ (對照培養(yǎng)基平板菌落直徑-〇? 8)
[0064] 其中，PDA培養(yǎng)基按照如下方法配制：馬鈴薯200g(去皮的馬鈴薯切成小塊，煮沸 30分鐘過濾去濾液）、葡萄糖20g，瓊脂18-20g，用蒸餾水定容至1000ml，121°C蒸氣滅菌 20min〇
[0065] 結(jié)果如表1-4所示，表明大花紅景天95 %乙醇提取物、小花紅景天95 %乙醇提取 物和高山紅景天95%乙醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌 具有明顯的抑制作用，但對馬鈴薯干腐病菌、李干腐病菌、金銀木假尾孢葉斑病菌以及棉 花紅點(diǎn)病菌均未表現(xiàn)出抑制作用：大花紅景天95%乙醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番茄 灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 523,對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 490 ;小花紅景天95%乙 醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 404,對白菜黑斑病菌的 抑菌率達(dá)到0. 449 ;高山紅景天95%乙醇提取物在濃度為lmg/ml時，對番茄灰霉病病菌的 抑菌率達(dá)到0. 510,對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 337。大花紅景天乙酸乙酯萃取物在濃 度為0.lmg/ml時對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 580,大花紅景天乙酸乙酯洗脫物在濃 度為0.lmg/ml時對番茄灰霉病病菌的抑菌率達(dá)到0. 690 ;大花紅景天乙酸乙酯萃取物在濃 度為0.lmg/ml時對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 406,大花紅景天乙酸乙酯洗脫物在濃度 為0.lmg/ml時對白菜黑斑病菌的抑菌率達(dá)到0. 376。
[0066] 表1、紅景天95%乙醇提取物（濃度=lmg/ml)對植物病原真菌的抑菌率


【主權(quán)項(xiàng)】
1. 紅景天提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用，所述紅景天提取物的制備方法包括： 用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅景天 95%乙醇提取物，所述紅景天95%乙醇提取物為紅景天提取物； 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌或所述植物病原真菌為番茄灰霉 病菌；所述紅景天為大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。2. 紅景天提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用，所述紅景天提取物的制備方法包括： 1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅 景天95%乙醇提取物； 2)將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液，收集 水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得 到紅景天乙酸乙酯萃取物；所述紅景天乙酸乙酯萃取物為紅景天提取物； 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二種或一種；所述紅景天為大 花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。3.紅景天提取物在抑制植物病原真菌中的應(yīng)用，所述紅景天提取物的制備方法包括： 1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅 景天95%乙醇提取物； 2)將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液，收集 水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得 到紅景天乙酸乙酯萃取物； 3)將步驟2)的紅景天乙酸乙酯萃取物進(jìn)行硅膠柱層析得到紅景天乙酸乙酯洗脫物； 所述硅膠柱層析的洗脫是先用乙酸乙酯-石油醚進(jìn)行洗脫然后用乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，收集 用乙酸乙酯洗脫得到的洗脫液，除去洗脫液中的乙酸乙酯即得到紅景天乙酸乙酯洗脫物； 所述乙酸乙酯-石油醚是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的體積比混合得到的混合物；所述紅 景天乙酸乙酯洗脫物為紅景天提取物； 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二種或一種；所述紅景天為大 花紅景天。4.紅景天提取物的制備方法，包括：用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并 除去所述提取液中的乙醇，得到紅景天95%乙醇提取物，所述紅景天95%乙醇提取物為紅 景天提取物； 所述紅景天為大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。5.紅景天提取物的制備方法，包括： 1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅 景天95%乙醇提取物； 2)將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液，收集 水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得 到紅景天乙酸乙酯萃取物；所述紅景天乙酸乙酯萃取物為紅景天提取物； 所述紅景天為大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。6. 紅景天提取物的制備方法，包括： 1)用95%乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅 景天95 %乙醇提取物； 2) 將所述紅景天95%乙醇提取物用水分散成混懸液，用石油醚萃取所述混懸液，收集 水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯即得 到紅景天乙酸乙酯萃取物； 3) 將步驟2)的紅景天乙酸乙酯萃取物進(jìn)行硅膠柱層析得到紅景天乙酸乙酯洗脫物； 所述硅膠柱層析的洗脫是先用乙酸乙酯-石油醚進(jìn)行洗脫然后用乙酸乙酯進(jìn)行洗脫，收集 用乙酸乙酯洗脫得到的洗脫液，得到紅景天乙酸乙酯洗脫物；所述乙酸乙酯-石油醚是乙 酸乙酯和石油醚按照1:1的體積比混合得到的混合物；所述紅景天乙酸乙酯洗脫物為紅景 天提取物； 所述紅景天為大花紅景天。7. 由權(quán)利要求4-6中任一所述的制備方法制備的紅景天提取物。8. 紅景天在制備植物病原真菌抑制劑中的應(yīng)用，所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和 白菜黑斑病菌中的二種或一種；所述紅景天為大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述植物病原真菌抑制劑的活性成分為 權(quán)利要求7所述的紅景天提取物。10. 植物病原真菌抑制劑，它的活性成分為權(quán)利要求7所述的紅景天提取物； 所述植物病原真菌為番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二種或一種；所述紅景天為大 花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天。
【專利摘要】本發(fā)明公開了紅景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的紅景天提取物，其制備方法包括：用95％乙醇水溶液提取紅景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到紅景天95％乙醇提取物，所述紅景天95％乙醇提取物為紅景天提取物。實(shí)驗(yàn)證明大花紅景天95％乙醇提取物、小花紅景天95％乙醇提取物和高山紅景天95％乙醇提取物在濃度為1mg/ml時，對番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌具有明顯的抑制作用。說明大花紅景天、高山紅景天和/或小花紅景天可用于制備番茄灰霉病病菌和白菜黑斑病菌抑制劑。
【IPC分類】A01N65/08, A01P3/00
【公開號】CN105028492
【申請?zhí)枴緾N201510490827
【發(fā)明人】柳春梅, 馬蘭青, 趙曉萌, 王樹芳, 馮靜, 郭輝力, 楊亞東
【申請人】北京農(nóng)學(xué)院
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2014年2月27日
【公告號】CN103814954A, CN103814954B