一種大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法，屬于農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]大_花(^3力^7<3 pinnata Cav)為菊科大_花屬多年生球根花奔，全屬約27種，又名大理菊、天竺牡丹、西番蓮、洋芍藥、大麗菊、地瓜花、紅苕花等，原產(chǎn)墨西哥、哥倫比亞及危地馬拉等國，后傳到歐洲、日本和我國。大麗花莖桿粗壯，葉片肥大，花形與牡丹相似，花大而色彩艷麗，具有花姿優(yōu)美、花型多樣、花期長、品種繁多等特點(diǎn)，被譽(yù)為花卉中的寵兒。大麗花系天然種間雜交，人工選育的歷史不長，世界各國普遍栽培，目前在東北、西北、華北等地栽培較廣泛，其中在廣東秋、冬兩季栽培比較多。經(jīng)過人工雜交選擇，成為異源八倍體，新品種層出不窮，花色嬌艷，花期長，適應(yīng)性強(qiáng)，易于栽培，故一躍成為世界名花。目前大麗花是墨西哥的國花，西雅圖的市花，我國吉林省的省花，張家口、赤峰、包頭(小麗花)等城市的市花，大麗花象征大方、富麗，大吉大利，是世界著名的觀賞花卉。
[0003]大麗花常用分株繁殖，但每株每年僅可分出5-6個(gè)新株，無法滿足產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代積累，從而造成大麗花品種退化嚴(yán)重。除了分株繁殖，造成大麗花品種退化的原因還包括:栽培環(huán)境如光照、水分、溫度、營養(yǎng)不適宜大麗花生長發(fā)育，土壤板結(jié)和鹽漬化；連作土地的病原菌大量積累并復(fù)合浸染等，導(dǎo)致品種失去原有的典型性；在大麗花組織培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)溫度、增殖芽的繼代代數(shù)以及激素濃度等因素都可能造成大麗花種苗發(fā)生無性變異。大麗花品種退化通常表現(xiàn)為花朵變小、過渡色多、花型紊亂、雙桿現(xiàn)象、株高參差不齊、生活力下降、抗性和產(chǎn)量降低等。
[0004]目前，大麗花種質(zhì)資源的保存大多采用田間栽培保存，但田間栽培保存存在以下局限性:光、溫、水及病蟲害控制較難，造成種質(zhì)資源喪失；占地面積多，耗費(fèi)人力、物力、財(cái)力巨大；長期無性繁殖過程中易出現(xiàn)人為混雜和種性退化等。組培繁殖的種質(zhì)保存方法是花卉商品化推廣的重要輔助，既可在長距離運(yùn)輸優(yōu)良種苗，也可長時(shí)間保存優(yōu)質(zhì)種苗，防止種質(zhì)退化。目前，還沒有成熟的大麗花種質(zhì)保存體系應(yīng)用于大麗花的產(chǎn)業(yè)發(fā)展，因此針對現(xiàn)有大麗花保存人力、物力、空間耗費(fèi)大、保種時(shí)間短的不足，因此建立一種適宜的、保存時(shí)間久、低成本的大麗花種質(zhì)資源保存方法對大麗花的產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為克服目前大麗花常規(guī)保存所存在的保存空間大、投入資源高、保存時(shí)間短等缺點(diǎn)，本發(fā)明建立了一種大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法，通過優(yōu)化培養(yǎng)程序、培養(yǎng)條件和培養(yǎng)組分，大大提高了大麗花的保存質(zhì)量和保存期間，大麗花種質(zhì)保存周期可長達(dá)4年，而且操作簡便，技術(shù)穩(wěn)定可靠，可重復(fù)性強(qiáng)，非常適合大規(guī)模大麗花種質(zhì)的保存。
[0006]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案解決的:
一種大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法，其特征在于，它包括以下技術(shù)環(huán)節(jié):
O外植體的選材與低溫預(yù)處理；2)接種；3)不定芽誘導(dǎo)并轉(zhuǎn)接；4)慢生長保存種質(zhì)；5)復(fù)壯；6)生根移栽。
[0007]該方法的詳細(xì)步驟如下:
O外植體的選材與低溫預(yù)處理:
選擇生長至現(xiàn)蕾期的、健壯無病、種質(zhì)與親本一致的大麗花整株，先用自來水沖洗掉根部泥土及其它表面雜物，然后用毛刷蘸取洗潔精洗一遍后接著用超純水沖洗干凈，將植株根部浸入裝有8mg/L的KT溶液中，2°C低溫預(yù)處理4_8天；
2)接種:
將大麗花用超純水清洗后轉(zhuǎn)移到超凈工作臺里，用70%酒精表面消毒15s，再用無菌水沖洗兩次，然后置于加入了數(shù)滴吐溫20的0.1%升萊中處理10 min，再用無菌水沖洗4_5次，濾紙吸干，用解剖刀切割莖段后用鑷子接種至裝有培養(yǎng)基①的三角瓶中；
3)不定芽誘導(dǎo)并轉(zhuǎn)接:培養(yǎng)室溫度控制為26±1°C，以熒光燈為光源，光照強(qiáng)度控制為1600-2000LX，光周期控制為光14h/暗10h，25-30天誘導(dǎo)出不定芽，然后將不定芽接種至培養(yǎng)基②中，將接種好的三角瓶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度控制為23-25°C，光照強(qiáng)度控制為1600-2000LX、光周期控制為光14h/暗1h，培養(yǎng)5-8天；
4)慢生長保存種質(zhì):
將三角瓶轉(zhuǎn)移到低溫、弱光條件下緩慢生長，每培養(yǎng)10個(gè)月，繼代接種一次，再低溫培養(yǎng);
5)復(fù)壯:
當(dāng)需要大麗花恢復(fù)生長時(shí)，將三角瓶轉(zhuǎn)移到溫度控制為23-25 °C、光照強(qiáng)度為1500-2000LUX，光周期為12h光/12h的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-15天，獲得健壯的大麗花幼苗；
6)生根移栽:
將大麗花幼苗轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基③中，控制溫度為23-25 °C、濕度多85%、光照強(qiáng)度為2000-30001x、光周期為12h光/12h培養(yǎng)條件下生長10-15天誘導(dǎo)生根，然后煉苗移栽。
[0008]所述步驟I)中切割下接種的莖段長度為0.6-0.8cm。
[0009]所述步驟2)中的培養(yǎng)基①的配方為:MS +2.5mg/L6-BA+0.08NAA+3%蔗糖+6.5g/L植物凝膠，pH為5.8。
[0010]所述步驟3 )中的培養(yǎng)基②的配方為:MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L 氯化膽堿 +4% 鹿糖 +6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.8。
[0011]所述步驟4)中的低溫、弱光條件為:培養(yǎng)溫度控制為5-8°C，光照強(qiáng)度控制為400-600lx，光周期控制為光12h/暗12h。
[0012]所述步驟6)中的培養(yǎng)基③的配方為:l/2MS+0.15mg/L NAA+1.5%蔗糖+6.5g/L瓊月旨，pH為5.8。
[0013]所述步驟4)中的繼代次數(shù)不超過5次。
[0014]本發(fā)明的有益效果:
(1)本發(fā)明采用大麗花莖段作為種質(zhì)保存材料來源，取材容易，來源廣闊，生長季節(jié)不受限制，為育種工作中的種質(zhì)引進(jìn)和保存提供了捷徑；
(2)本發(fā)明通過控制組織培養(yǎng)條件，有效地延緩了大麗花種苗的生長，使得種質(zhì)資源保存周期大大拉長，種質(zhì)資源保存周期最長可達(dá)4年；
(3)與常規(guī)保種方法相比，本發(fā)明的原料成本降低、勞動(dòng)力和培養(yǎng)保存空間減少，而且操作簡便，從而大大降低了保種成本；
(4)與常規(guī)保種方法相比，本發(fā)明苗移栽成活率大大提高，可達(dá)95%以上。
【附圖說明】
[0015]附圖1為常規(guī)組培條件下大麗花品種亮劍生長I個(gè)月的示意圖；
附圖2為采用本發(fā)明的大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法，大麗花品種亮劍繼代4次又生長8個(gè)月的示意圖；
附圖3為采用本發(fā)明的大麗花組培繁殖的種質(zhì)保存方法，大麗花品種亮劍繼代4次又生長8個(gè)月復(fù)壯并生根移栽時(shí)的狀態(tài)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，實(shí)施例中無特殊說明的為常規(guī)方法。
實(shí)施例
[0017]2010年6月，選擇大麗花品種亮劍按照本發(fā)明的技術(shù)路線進(jìn)行組培繁殖的種質(zhì)保存，詳細(xì)步驟如下:
O外植體的選材與低溫預(yù)處理:
選擇生長至現(xiàn)蕾期的、健壯無病、種質(zhì)與親