一種間歇浸沒(méi)式百合鱗片增殖快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種間歇浸沒(méi)式百合鱗片增殖快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物組織培養(yǎng)技術(shù)，具有繁殖數(shù)量多且快速、實(shí)驗(yàn)條件易控制、可連續(xù)生產(chǎn)、生產(chǎn)效率高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于作物育種及種質(zhì)資源保存以及花卉、果樹(shù)、蔬菜、林木及中草藥的脫毒苗生產(chǎn)與快繁無(wú)性繁殖等方面，例如百合脫毒籽球的無(wú)性快速繁殖。
[0003]傳統(tǒng)的固體或半固體組織培養(yǎng)方式需要耗費(fèi)大量的瓊脂，并且在灌裝及清洗時(shí)需處理大量容器，故耗費(fèi)大量勞動(dòng)力，導(dǎo)致生產(chǎn)成本居高不下。
[0004]目前國(guó)內(nèi)外設(shè)計(jì)發(fā)明了一些植物組織間歇浸沒(méi)式培養(yǎng)裝置，其優(yōu)勢(shì):一方面間歇式浸沒(méi)培養(yǎng)方式使氣體交換充分，氧氣供應(yīng)充足，降低了普通液體培養(yǎng)易產(chǎn)生畸形苗與玻璃化苗的機(jī)率，從而提高了培養(yǎng)質(zhì)量與繁殖效率，另外，間歇式浸沒(méi)培養(yǎng)方式利用自動(dòng)化調(diào)控元件，輔助組織培養(yǎng)過(guò)程，減少了勞動(dòng)密度，降低培養(yǎng)成本。但是，這類(lèi)裝置通常設(shè)備龐大，不易拆卸或移動(dòng)，且控制元件復(fù)雜，維護(hù)成本較高，而且它們也不易于簡(jiǎn)便的無(wú)菌人工接種操作以及高效的裝置整體清洗以及滅菌處理。
[0005]現(xiàn)有的國(guó)內(nèi)關(guān)于間歇浸沒(méi)式百合鱗片增殖快繁的報(bào)道極少，申請(qǐng)?zhí)枮?01310043169.0公開(kāi)了一種利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)鱗莖的方法，雖然在培養(yǎng)過(guò)程中引入了間歇式浸沒(méi)培養(yǎng)技術(shù)。但是對(duì)于其中最為重要的間歇浸沒(méi)式培養(yǎng)裝置未進(jìn)行介紹與改進(jìn)，忽視了對(duì)整個(gè)培養(yǎng)步驟中最為重要的限制因素即間歇浸沒(méi)式培養(yǎng)裝置的考慮，在一定程度上影響了百合鱗片增殖快繁效率的提高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種間歇浸沒(méi)式百合鱗片增殖快繁方法。
[0007]本發(fā)明提供一種間歇浸沒(méi)式百合鱗片增殖快繁方法，其包括如下步驟:
[0008]I)剝?nèi)“俸戏N球鱗莖的鱗片，進(jìn)行表面滅菌；
[0009]2)將表面滅菌的百合鱗片接種于固體基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)7 - 10天進(jìn)行無(wú)菌外植體篩選；
[0010]3)將已確定無(wú)污染百合鱗片置于連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置內(nèi)進(jìn)行間歇浸沒(méi)式培養(yǎng)；
[0011]所述的連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置包括培養(yǎng)容器裝置、載物構(gòu)件和運(yùn)輸配件，所述的培養(yǎng)容器裝置包括容器主體以及通過(guò)螺紋嚙合的密封蓋體；所述容器密封蓋體頂部設(shè)有氣體交換的通孔；所述容器主體側(cè)壁的一端其底部與頂部均各設(shè)一外伸開(kāi)孔；所述載物構(gòu)件包括載物篩盤(pán)以及固定框架，單個(gè)載物篩盤(pán)通過(guò)多個(gè)摞疊置于固定框架內(nèi)，而固定框架再擱置于所述培養(yǎng)容器內(nèi)；所述的運(yùn)輸配件包括硅膠軟管、蠕動(dòng)栗和儲(chǔ)液容器，通過(guò)兩條硅膠軟管與所述的培養(yǎng)容器、蠕動(dòng)栗、儲(chǔ)液容器相連接。
[0012]其中，所述通孔的向下延伸管內(nèi)裝有殺菌纖維團(tuán)和微孔濾膜，底部由不封口的螺紋塞固定。
[0013]其中，所述固定框架包括空心圓盤(pán)底座、垂直焊接于圓盤(pán)直徑兩邊的固定桿和連接固定桿的提手；所述的空心圓盤(pán)底座包括空心圓環(huán)以及由空心圓環(huán)圓心輻射出三條兩兩角度為120度且與空心圓環(huán)相接的焊接桿，且焊接桿連接于空心圓環(huán)的位置再垂直向下延伸出支腿。
[0014]其中，兩條硅膠軟管使所述的容器主體與儲(chǔ)液容器相連接，其中，第一條硅膠軟管一端與容器主體底部外伸開(kāi)孔相連，另一端與儲(chǔ)液容器下部開(kāi)口相連；第二條娃膠軟管一端與容器主體頂部外伸開(kāi)孔相連，另一端與儲(chǔ)液容器上部開(kāi)口相連；所述第一條硅膠軟管嵌入婦動(dòng)栗。
[0015]其中，所述儲(chǔ)液容器還設(shè)置有液體培養(yǎng)基注入口。所述的主入口還設(shè)置有密封蓋。
[0016]其中，所述培養(yǎng)容器裝置整體為透明可高壓滅菌PC材質(zhì)。
[0017]其中，所述連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置使用前，整體或各個(gè)部件經(jīng)高溫高壓滅菌，將表面滅菌的百合鱗片平鋪于滅菌后的載物篩盤(pán)上，每個(gè)載物篩盤(pán)放置20 — 50鱗片，將多個(gè)裝有鱗片的載物篩盤(pán)摞疊并置于固定框架內(nèi)，再將其放入培養(yǎng)容器內(nèi)，使用蓋體密封。
[0018]在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，設(shè)置間歇式培養(yǎng)的程序，分別設(shè)為早上9 - 10點(diǎn)和晚上21 — 22點(diǎn)各I個(gè)小時(shí)，蠕動(dòng)栗會(huì)在設(shè)定時(shí)間內(nèi)將儲(chǔ)液容器內(nèi)的培養(yǎng)基推入與排出培養(yǎng)容器主體。
[0019]其中，每培養(yǎng)5-15天，更新儲(chǔ)液溶液內(nèi)的液體培養(yǎng)基。
[0020]在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施方案中，所述的液體培養(yǎng)基為可將百合鱗片誘導(dǎo)出小鱗莖的液體培養(yǎng)基，優(yōu)選MS基本培養(yǎng)基或根據(jù)不同培養(yǎng)要求所更改培養(yǎng)基。
[0021]本發(fā)明優(yōu)點(diǎn):培養(yǎng)空間利用率高且利于培養(yǎng)氣體成分交換，從而提高培養(yǎng)物質(zhì)量與繁殖系數(shù)，適宜大規(guī)模生產(chǎn)；培養(yǎng)裝置及配件，易于整體消毒滅菌，培養(yǎng)過(guò)程全封閉，污染機(jī)率??；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單緊湊，耗能低，節(jié)約了培養(yǎng)空間，降低了組培成本。
[0022]若按每個(gè)載物篩盤(pán)放置20 - 50個(gè)百合鱗片進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)鱗片約分化出3個(gè)新生小鱗莖，單個(gè)載物篩盤(pán)一次約可得60 - 150個(gè)小鱗莖；此培養(yǎng)容器若摞疊9層載物篩盤(pán)，單個(gè)培養(yǎng)容器約總得500 - 1300個(gè)小鱗莖；若在20平方米的培養(yǎng)室內(nèi)，放置30個(gè)架子，則每次繼代可得到上萬(wàn)百合種球，大大提高了快繁的效率。
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1所示為本發(fā)明連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置示意圖。
[0024]圖2所示為本發(fā)明連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置中的載物構(gòu)件示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025]以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0026]結(jié)合附圖1-2對(duì)本發(fā)明的連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0027]本發(fā)明的連通器式間歇式植物組織培養(yǎng)裝置包括培養(yǎng)容器裝置、載物構(gòu)件和運(yùn)輸配件。所述的培養(yǎng)容器裝置整體為透明可滅菌PC材質(zhì)，包括容器主體I以及通過(guò)螺紋嚙合的密封蓋體2 ;其中所述容器主體為圓柱形腔體，其側(cè)壁的一端頂部與底部均各設(shè)一外伸開(kāi)孔3和4 ;所述密封蓋體其頂部設(shè)有氣體交換的通孔5，其中通孔5的向下延伸管內(nèi)裝有殺菌纖維團(tuán)和微孔濾膜，底部由不封口的螺紋塞固定。
[0028]所述的載物構(gòu)件放置于所述培養(yǎng)容器內(nèi)，包括可摞疊的單個(gè)圓柱形不銹鋼載物篩盤(pán)8以及承載載物篩盤(pán)的不銹鋼固定框架9 ;所述的載物篩盤(pán)8底壁與側(cè)壁均由篩網(wǎng)構(gòu)成，可多個(gè)摞疊置于固定框架9內(nèi)；所述固定框架包括空心圓盤(pán)底座、垂直焊接于圓盤(pán)直徑兩邊的固定桿902和連接固定桿的提手903 ;所述的空心圓盤(pán)底座包括空心圓環(huán)901以及由空心圓環(huán)901圓心輻射出三條兩兩角度為120度且與空心圓環(huán)901相接的焊接桿904，且焊接桿904連接于空心圓環(huán)901的位置再垂直向下延伸出支腿905。
[0029]所述運(yùn)輸配件包括兩條耐高溫硅膠軟管、蠕動(dòng)栗以及非PVC復(fù)合膜圓柱形儲(chǔ)液容器6 ;其中通過(guò)兩條硅膠軟管使所述的容器主體I與儲(chǔ)液容器6相連接，所述的第一條硅膠軟管7 —端與容器主體I頂部外伸開(kāi)孔4相連，另一端與儲(chǔ)液容器開(kāi)口 10相連。此開(kāi)口主要調(diào)節(jié)培養(yǎng)容器與儲(chǔ)液容器之間氣體的交換，保證培養(yǎng)過(guò)程氣體的循環(huán)流通。所述第二條娃膠軟管11 一端與容器主體I底部外伸開(kāi)孔3相連，另一端與儲(chǔ)液容器開(kāi)口 14相連。此開(kāi)口主要是控制培養(yǎng)容器與儲(chǔ)液容器之間液體的交換，保證培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)基的循環(huán)流通。所述第二條硅膠軟管11中部嵌入蠕動(dòng)栗15 ;所述儲(chǔ)液容器除連接硅膠軟管的開(kāi)口 10與14夕卜，還包括液體培養(yǎng)基注入口 16，所述液體培養(yǎng)基注入口 16也設(shè)置有密封蓋17。
[0030]在具體的實(shí)施例中，所述容器體主體I底部直徑具體可為22cm，高度具體