一種鐵皮石斛組培袋苗生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及利用聚丙烯薄膜袋進(jìn)行鐵皮石斛種苗生產(chǎn)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鐵皮石斛(學(xué)名-.Dendrobiwnofficinale Kimura et Migo)，又名:黑節(jié)草、云南鐵皮。屬微子目，蘭科多年生附生草本植物。其莖入藥，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥。現(xiàn)已證實(shí)它具有滋陰清熱、生津益胃、止咳潤(rùn)肺、潤(rùn)喉明目、提高人體免疫功能、防治腫瘤和心血管疾病以及改善睡眠、防治白內(nèi)障、延年益壽等功效。但由于生長(zhǎng)環(huán)境特殊和分布局限，以及長(zhǎng)期采挖，自然資源日趨枯竭，已被國(guó)家列為重點(diǎn)保護(hù)的野生藥材并鼓勵(lì)人工大面積栽培鐵皮石斛。然而因其生長(zhǎng)周期緩慢，極難存活，野生鐵皮石斛瀕臨滅絕，人工育苗，成活率較低。傳統(tǒng)的鐵皮石斛的培育主要是通過(guò)扦插、分株的方式，但其繁殖率較低，生根緩慢，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)。
[0003]試管苗生產(chǎn)已成為現(xiàn)代種苗供應(yīng)的重要組成部分，如香蕉苗、桉樹苗、石斛苗等多是通過(guò)試管苗技術(shù)來(lái)大量生產(chǎn)；利用玻璃組培瓶或塑料組培瓶作為培養(yǎng)容器存在著需要清洗、費(fèi)時(shí)費(fèi)工，運(yùn)輸成本高等缺點(diǎn)，近年來(lái)，利用薄膜袋來(lái)作為培養(yǎng)容器成為試管苗企業(yè)的一個(gè)研究熱點(diǎn)，在香蕉苗的生產(chǎn)上得到推廣?，F(xiàn)有袋苗技術(shù)雖然可大大提高滅菌效率、減少清洗和運(yùn)輸成本，但由于薄膜袋質(zhì)地柔軟，配制常規(guī)半固體培養(yǎng)基難以成型，影響接種操作，所以袋苗技術(shù)在現(xiàn)有種苗生產(chǎn)體系中所占比例還不是很大，尤其是在鐵皮石斛的培養(yǎng)方面，還存在較大的改進(jìn)空間。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的本發(fā)明的目的在于開發(fā)出一種高效率的組培苗薄膜袋生產(chǎn)方法，以解決鐵皮石斛在種苗生產(chǎn)中存在的問(wèn)題。
[0005]本發(fā)明通過(guò)將生長(zhǎng)健壯的鐵皮石斛母株進(jìn)行異株人工授粉，授粉后110?130天果實(shí)基本成熟后采收未開裂的果實(shí)，對(duì)果實(shí)進(jìn)行表面滅菌后取出種子接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基上進(jìn)行無(wú)菌播種，種子萌發(fā)形成的原球莖培養(yǎng)50天左右，轉(zhuǎn)接到育苗培養(yǎng)基上進(jìn)行分瓶疏苗，培養(yǎng)50?60天后形成帶根小苗，將小苗轉(zhuǎn)移到薄膜袋中，倒入液體壯苗培養(yǎng)基后封袋培養(yǎng)60?90天形成健壯植株，袋苗在自然光照下煉苗7?14天后栽培，成苗的移栽成活率可達(dá)95%以上，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0006]基于上述方法，本發(fā)明的鐵皮石斛組培袋苗生產(chǎn)方法具體包括以下的步驟:
(I)材料:開花時(shí)選取生長(zhǎng)健壯的鐵皮石斛母株進(jìn)行人工授粉，授粉后果實(shí)110?130天時(shí)基本成熟而未開裂時(shí)做為外植體用于播種。
[0007](2)無(wú)菌播種:采用室外栽培植株獲得的鐵皮石斛種子進(jìn)行播種時(shí)，先將未開裂果實(shí)用75%酒精浸泡30?60秒后置于0.1%升汞溶液中滅菌10?20分鐘，無(wú)菌水漂洗4?5次后切開果實(shí)，將粉末狀種子撒播到種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，10?12天左右種子萌發(fā)形成原球莖。果實(shí)浸泡時(shí)間以30?60秒為佳，滅菌的時(shí)間以10?20分鐘為佳，成功率可達(dá)90%以上。
[0008](3)小苗培養(yǎng):將播種50天左右的原球莖轉(zhuǎn)接到育苗培養(yǎng)基上，進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶疏苗，培養(yǎng)50?60天后能進(jìn)一步形成帶根小苗。
[0009](4)壯苗培養(yǎng):將無(wú)菌播種和繼代增殖獲得的I?2cm帶根小苗接種到薄膜袋中，倒入液體壯苗培養(yǎng)基，封袋后培養(yǎng)60?90天時(shí)能形成健壯的植株。
[0010](5)試管苗移栽:當(dāng)植株約3-5厘米高時(shí)，將薄膜袋轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗7?14天，然后將薄膜袋剪開，將小苗取出，經(jīng)清水漂洗后，用松樹皮(規(guī)格0.3?0.5cm)種植于1.5寸白色育苗杯中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，移栽的成活率均可達(dá)95%以上，馴化培養(yǎng)3個(gè)月的小苗可以轉(zhuǎn)入苗床或2.5寸白色育苗杯中培養(yǎng)。
[0011]步驟(2)?(4)中培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度24?28°C，光照度1500?20001x，光照12小時(shí)/天。
[0012]步驟⑴所述的果實(shí)成熟期為110?130天。
[0013]步驟(2)所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基成分如下:花寶I號(hào)(Hyponex I) I?1.5 g.L\蛋白胨(Peptone) 0.5 ?2 g.L\挪子汁(CM) 50 ?100 ml.L\鹿糖 15 ?30 g.L\瓊脂6.5 g.L1、MS培養(yǎng)基的維生素(含肌醇)，活性炭(AC)0.5?I g.LSpH 5.4-5.60
[0014]步驟(3)所述的育苗培養(yǎng)基為:花寶I號(hào)I?1.5 g.L1、蛋白胨0.5?2 g.L1,蔗糖15?30 g.L\瓊脂6.5 g.L \ MS培養(yǎng)基的維生素(含肌醇)，萘乙酸(NAA) 0.1?0.5m g.L \ 活性炭 0.5 ?I g.L SpH 5.4 ?5.6。
[0015]步驟(4)所述的壯苗培養(yǎng)基成分如下:花寶I號(hào)3 g.L\蛋白胨0.5?3 g.L \NH4HCO3 0.01 ?0.1 g.L \ 萘乙酸 0.5 ?3 mg.L \PP333 (多效唑)0.I ?0.2m g.L \蔗糖15?30 g.L \其余為MS培養(yǎng)基中的維生素和肌醇成分；pH 5.4?5.6。
[0016]步驟(4)所述的倒入壯苗培養(yǎng)基可以通過(guò)移液器或蠕動(dòng)栗實(shí)現(xiàn)精確和快速操作。
[0017]上述步驟所用到的花寶I號(hào)可以從市場(chǎng)上購(gòu)得。
[0018]步驟(2所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基、步驟(3)所述的育苗培養(yǎng)基均采用常規(guī)高壓滅菌法進(jìn)行滅菌，步驟(4)所述的壯苗培養(yǎng)基采用過(guò)濾滅菌法進(jìn)行滅菌。
[0019]本發(fā)明具有種苗生長(zhǎng)迅速，品質(zhì)好、成本低廉等特點(diǎn)，能在短期內(nèi)獲得大量的袋苗，成苗的移栽成活率95%以上。能為鐵皮石斛等種苗生產(chǎn)提供一條有效的途徑。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0021]實(shí)施例1:
(I)材料:開花時(shí)選取生長(zhǎng)健壯的鐵皮石斛母株進(jìn)行人工授粉，采收授粉后112天的未開裂果實(shí)作為外植體用于播種。
[0022](2)無(wú)菌播種:將收獲的果實(shí)先用體積分?jǐn)?shù)濃度為75%的酒精浸泡30秒后，置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度為0.1%的升汞溶液中消毒20分鐘，無(wú)菌水漂洗5次后切開果實(shí)，可見白色粉末狀種子，將種子撒播到萌發(fā)培養(yǎng)基上，10?12天左右可見種子萌發(fā)形成原球莖。
[0023](3)小苗培養(yǎng):將播種50天的原球莖轉(zhuǎn)接到育苗培養(yǎng)基上，進(jìn)行轉(zhuǎn)瓶疏苗，培養(yǎng)50天后形成帶根小苗。
[0024](4)壯苗培養(yǎng):將無(wú)菌播種和繼代增殖獲得的I?2cm帶根小苗接種到薄膜袋中，通過(guò)移液器快速倒入液體壯苗培養(yǎng)基，封袋后培養(yǎng)85天。
[0025](5)試管苗移栽:培養(yǎng)85天的植株約3-5厘米高，將薄膜袋轉(zhuǎn)移到自然光下煉苗14天，然后將薄膜袋剪開，將小苗取出，經(jīng)清水漂洗后，5苗左右I叢用松樹皮(規(guī)格0.5cm)種植于1.5寸白色育苗杯中，保持適當(dāng)通風(fēng)和足夠的濕度，馴化培養(yǎng)3個(gè)月形成健壯叢生苗，成活率96%，脫盆后轉(zhuǎn)入2.5寸白色育苗杯中培養(yǎng)。
[0026]其中，種子萌發(fā)培養(yǎng)基成分如下:花寶I號(hào)g.1^1、蛋白胨0.58.L 椰子汁50ml.L1、蔗糖15 g.L\